蔬菜水果中还原型Vc的测定(分光光度法)

3试样的侧定
精密吸取按1.0 mL样液(约相当于抗坏血酸200µg以下)于10mL比色管中，以下按标准曲线测定方法依次加入其它试剂。加水稀释至刻度，混匀。室温(20℃-25℃)下放置20 min后，移入1 cm比色皿内，以零号管调节零点，于波长420 nm处测定吸光度A。从标准曲线上查出样液中抗坏血酸含量。
若干，提前20min打开预热
2.10ml具塞玻璃比色管
10个/组
3.标签纸，记号笔
若干
4.组织捣碎机
2个
5.菜刀、菜板、一次性手套
6.棕色Βιβλιοθήκη Baidu量瓶100ml，胶头滴管
1个/组
7.移液管0.5ml，2ml
移液管1 ml，5 ml，吸小球
2个/组
1个/组
8.漏斗、滤纸
1个/组
9.托盘天平，
1个/组
10.烧杯100ml
一、实验目的
1.理解食物中维生素C的分布规律以及维生素C的理化特性。
2.掌握分光光度法测定食品中还原型Vc的原理、操作步骤、注意事项
二、实验原理
在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼-2-羟基丁酰内酯衍生物。在最大吸收波长420 urn处测定吸光度，与标准系列比较定量。
三、仪器
1.722分光光度计
2-3滴/次
8.蒸馏水
1瓶/组
五、实验步骤
1.蔬菜、水果:
样品采来后，整棵菜（不掰开）洗净吹干，均匀取样，稍切碎。称取可食部分50.0 g于捣碎机内，加同倍量的乙酸溶液(2 mol/L)捣成匀浆。用烧杯称取10.0 g匀浆(含0.2 g/kg以下抗坏血酸)于100mL棕色容量瓶内，加5mL乙酸溶液(2mol/L)，用水稀释至刻度，混匀。滤纸过滤，滤液备用。不易过滤的试样可用离心机离心后，上清液测定。
分装，1瓶/组
6.抗坏血酸标准使用溶液(0.1 g/L):精密吸取5. 0 mL抗坏血酸标准储备溶液(2..0g/L)于1 00 mL棕色容量瓶中，加5 mL乙酸溶液(2 mol/L)，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于100μg抗坏血酸。临用时配制。
分装，1瓶/组
7.异戊醇：除生食物匀浆时产生的气泡
2标准曲线的绘制
精密吸取0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.5,2.0mL抗坏血酸标准使用液(相当于抗坏血酸0, 10.0, 20.0 ,40.0, 60.0, 80.0 ,100.0 ,150.0, 200.0µg)，分别置于10 mL比色管中。各加0.3 mLEDTA二钠溶液(0.25mol/L),0.5 mL乙酸溶液(0.5mol/L),1.25mL固蓝盐B溶液(2g/L)，加水稀释至刻度，混匀。室温(20℃-25℃)下放置20 min后，移入1cm比色皿内，以零号管调节零点，于波长420 nm处测定吸光度A，绘制标准曲线。
食品中还原型Vc的测定（分光光度法）
在蔬菜水果中含量丰富，易溶于水，酸性，以还原型抗坏血酸、脱氢型抗坏血酸、二酮古乐糖酸三种形式存在于食品中。
测食品中总Vc含量的方法：荧光法和2，4二硝基苯肼法。
测食品中还原型Vc的方法：分光光度法。
新鲜食品中Vc主要以还原型的形式存在，因此，本实验学习食品中还原型Vc的测定。
2个/组
四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂。）
1.乙酸溶液(2mol/L)：吸取11.6mL冰乙酸，加蒸馏水定容至100mL
分装，1瓶/组
2.乙酸溶液(0.5mol/L):吸取2.9mL冰乙酸，加蒸馏水定容至100mL
分装，1瓶/组
3. EDTA二钠盐溶液（0.25mol/L）：称取9.3g二钠水合EDTA二钠盐于蒸馏水中，加热溶液，放冷后定容至100mL。作用：是螯合剂，与金属离子螯合，避免有色的金属离子对实验的显色产生干扰。
六、数据记录
管号
0
1
2
3
4
5
样液
A420
七、数据处理
C
X= ——————— × 100
v1
m × —— × 1000
V2
式中：
X —试样中抗坏血酸的含量，mg/100g；
V1—测定时所取溶液体积，mL；
V2—试样处理液总体积，mL；
M —试样质量，g；
C—试样测定液中抗坏血酸的含量，µg；
不要切得太碎，以减少Vc的流失和还原型Vc的氧化。
结果保留4位有效数字。
分装，1瓶/组
4.2 g/L固蓝盐B溶液（显色剂）：准确称取0.2g固蓝盐B，加蒸馏水溶液于100 ml棕色容量瓶中，稀释至刻度（室温下贮存可稳定3d以上）。
分装，1瓶/组
5.抗坏血酸标准储备液（0.1 g/L）：精密称取纯Vc粉末0.2000g，加20 mL2mol/L乙酸溶液溶解后移入100 mL棕色容量瓶中并定容，摇匀。冷藏保存（＜10℃下冷藏保存稳定2d）。