应用荧光偏振检测方法对出口牛进行布氏杆菌病检测

２５间接 Ｅ ＩＡ试验 ３ １ ． ＬＳ ２ 份血清样品中有 ２ 份样品 ｌ １ １ １ 主 要 试剂 布 氏杆 菌病 虎 红 平 板 凝集 抗 原 、 试 为 ｉＬＳ 试验 阳性反应 （ 表 １ ．． Ｅ ＩＡ 见 ）。
中国动物检疫 ２ １ ０ ２年第 ２ ９卷第 ５ 期
２ ６竞 争 Ｅ Ｉ Ａ试 验 ３ １ ． ＬＳ ２ 份血 清样 品 中有 ２ ６份样 品 小分 子抗 原与 其相应 抗 体结 合后 ，所 形成 的大 分子 在 为 ｃ ＬＳ Ｅ ＩＡ试 验 阳性反 应 （ 见表 １ 。 ）
染 的奶 制 品是对 公共 卫 生 的主要 危 险 。同时 本病 亦可 行 。
由牛 、羊 、猪传 染 于其 它家 畜 。 由于布 氏杆 菌病 对公 １ ２ ２ 间接 Ｅ ＩＡ 试 验 、竞 争 Ｅ ＩＡ 试 验方 法 按 试 ．． ＬＳ ＬＳ 共卫 生 的 意义 极大 ，对 畜群 的危 害 大 ，且广 泛分 布 于 剂 盒使 用说 明书进行 。 世 界各 地 ，可 引起 不 同程度 的流行 ，给 畜牧 业和 人类 １２３ 荧 光 偏 振 检 测 方 法 取 ２ Ｌ血 清 样 品加 入 ．． ０ 的健 康 带来 严 重 危 害 ，世界 动 物 卫 生组 织 （ Ｅ）将 黑 色 ９ ＯＩ ６孔 微 量 反 应 板 内， 加 ｌ０ ８ Ｌ反 应 缓 冲 液 ，
和 垂直 的偏 振光 强度 来确 定 。 因而 大 分子 比转 动快 的 小 分子 发射 更多 的偏振 光 。
一
［］ ２ 于大海 ， 崔砚林． 中国进出境动物检疫规范 ［ ． Ｍ］ 北京 ： 国农 中
、 出版 社 ， ９ ７ 【 １９ ．
被 引格 式 ： 荧 光标 记 的小分 子抗 原在 溶液 中旋 转速 度快 ，荧光偏 王 玉 玲 ， 铭 骏 ， 红 梅 ． 用 荧 光 偏 振 检 测 方 法 对 出 口牛 进 行 柴 刘 应 振 光强 度 小 。当加入 被检 血清 或全 血 时 ，荧光 标记 的 布 氏杆菌病检测［ ． Ｊ 中国动物 检疫 ，０ ２ ２ （ ）５ －２ ］ ２ １ ，９ ５ ： １５ ．
其 列为 一 种对 国际 贸易有 重 要影 响 的疫病 『，我 国农 室 温 孵 育 ３ｍｉ， 置 荧 光 偏 振 仪 上 读 板 ，加 结 合 物 １ ］ ｎ 业 部将 其列 为 二类 动物 疫病 ，并将 其列 为进 境动 物 二 １ Ｌ，室温 孵 育 ２ｍｉ，置 荧光 偏振 仪上 读板 ，两 次 ０ｐ ｎ 类传 染病 。 Ｊ
３ １ Ｐ 的原理 是溶液 中的分子 作随 机转 动 ，分子 的 参考 文献 ： ． Ｆ － Ａ 大 小是 影 响转动 速 率 的主 要 因素 ，与其 成反 比关系 ， 光 色素 ，通 过一 定 角度 的转动 时 间即可 通过 测量 水平
Ｍ］／ ／ 中 译 ５ 北 因而 小分 子较大 分 子转动 得 快 。如 果给 分子 标 记上 荧 ［ ．农 业 部 兽 医 局 ， 国动 物 卫 生 与 流 行 病 学 中 心 ， ．版 ．
般 以分子量 小于 ５ＫＤ 的抗原 用荧 光素 标记 ， ０
长沙市举办兽医实验室检测技术培训班
４月 ｌ ６日至 ２ ０日，长 沙 市 畜牧兽 医水 产局 举 办 了全 市兽 医实验 室 检测 技术 骨 干培 训班 ，来 自
市辖 ３ （ 县 市）６ 区和市畜禽水产品质量检测中心的检测技术骨干参加了培训。湖南省动物卫生监 督所和湖南省动物疫病预防控制 中心的专家讲授 了 “ 兽医实验室生物安全与考核”“ 重大动物疫病 采样技术 ”等课程；长沙市畜牧兽医水产局的专家还把培训骨干分成 ５ 组，现场培训了动物剖检及 病理样品采取，常见细菌的培养和检测，“ 瘦肉精 ”快速检测，禽流感 、猪瘟、 口蹄疫等动物疫病 的抗体检测技术 。 （ 戴届全）
Ｓ Ｔ （ 阳 性除 外 ） 、Ｃ Ｔ Ｅ ＩＡ 方 法检 测为 阳 性 Ａ 假 Ｆ 、ｉＬＳ
的样 品 ，用 Ｆ Ａ方 法均 能检 测 为 阳性 ，而用 Ｒ Ｐ 、 Ｐ Ｂ Ｔ Ｓ Ｔ、Ｃ Ｔ Ｅ ＩＡ 不 能检 测 出 阳性 的样 品 ，用 Ｆ Ａ Ａ Ｆ 、ｉＬ Ｓ Ｐ 仍 能 检 测 出 阳 性 ， 说 明 Ｆ Ａ 的敏 感 性 也较 高 。Ｆ Ａ Ｐ Ｐ
理 想 的、可 靠 的检测 布 氏杆菌 病抗 体 的血清 学方 法 ，
ＦＡ 可用 于布 氏杆菌病 抗 体检 测和 畜群 布 氏杆 菌病 筛 Ｐ
３ 讨论
查和 净化 。
【】世 界 动 物 卫 生 组 织 （ Ｅ）陆 生 动 物 诊 断 试 验 和 疫 苗 手 册 １ ＯＩ ． 京 ： 业 部 兽 医局 ，０ ４ ３ ３３４ 农 ２ ０ ： ６．６ ．
的检 测结果 与 ｃ ＬＳ 结果 最 接近 ，说 明 Ｆ Ａ 敏感 性 Ｅ ＩＡ Ｐ 和 特异 性接近 于 ｃ ＬＳ Ｅ ＩＡ。
３ ３ Ｆ Ａ 方法 简 便快速 ， 可在 １ 钟 内完 成 ９ 样 ． Ｐ ５分 ２份 品 的布 氏杆 菌 病 检 测 ，不 需要 象 Ｅ ＩＡ 那样 的洗 板 ＬＳ 步骤。 目前 在 国际 贸 易 中，在 双 边 签 订 的检 疫 议 定 书 中，对 于 牛、猪 、羊的布 氏杆 菌病 检测 主要 采用 的方 法为 Ｒ Ｐ Ｂ Ｔ、Ｓ Ｔ、Ｃ Ｔ２ Ｐ Ａ Ｆ 【；Ｆ Ａ从 敏感 性和 特 异性 上 ］
中国动物检疫 ２ １ ０ ２年第 ２ ９卷第 ５期
应用荧光偏振检测方法 对 出 口牛进行布 氏杆 菌病检测
王玉 玲 ，柴铭 骏 ，刘红 梅 （ 天津 出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，天津塘沽 ３０６ ） ０４ １
摘 要 ：荧光偏振 试验 （Ｐ Ｆ Ａ）是 一种新的试验方法 。本文应用 荧光偏振检测方法对 出口哈 萨克斯坦的 ３ １ ２ 份牛进行 布氏杆 菌病检 测，结果有 ２ 份牛血清样品检测 为抗体 阳性 。同时对 ３ １ ５ ２ 份血 清进行 虎红平板凝 集试验 （ ＢＰ 、试管凝 集试验 （ Ａ Ｒ Ｔ） Ｓ Ｔ）、 补体 结合试验 （ Ｆ Ｃ Ｔ）、 间接 Ｅ １Ａ试验 （－Ｌ Ｓ ＬＳ Ｉ ＩＡ）、竞争 Ｅ ＩＡ 试验 （ ．Ｌ Ｓ Ｅ ＬＳ Ｃ Ｅ ＩＡ）等比对 试验 ，结果是 Ｆ Ａ从敏感 性和特 Ｐ 异 性上都优 于或 等于 目前主要 采用的 Ｒ Ｐ Ｂ Ｔ、Ｓ Ｔ、Ｃ Ｔ Ｌ Ｓ Ａ Ｆ 、Ｅ ＩＡ检 测方 法。Ｆ Ａ 方法 简便 、快 速、通量 大，不需 洗板 ，可 在 Ｐ
表 ｌ 六种血清学方法检测牛布氏杆菌病 的阳性结果比对
溶 液 中旋转 速度 变慢 ，荧光 偏振 光强度 增 大 。通过 荧
光 偏振 仪测 量 ，将 获得 的偏振 光 差值 与 阴性对 照偏 振 值 比较 ，即可判 定 出样 品的阴 阳性 。 ３ ２ 以两种试 验 方法检 测 为阳性 的样 品 即认 定该样 品 ． 为 阳 性的规 则看 ，Ｓ Ｔ有 ｌ Ａ 份样 品为 假 阳性 ，Ｆ Ａ 未 Ｐ 出 现 假 阳 性 ， 说 明 Βιβλιοθήκη Baidu Ａ 的特 异 性 较 高 ； 用 Ｒ Ｔ Ｐ ＢＰ 、
竞 争 Ｅ ＩＡ （Ｅ ＩＡ）进 行 检 测 方 法 的 比对 ，现 将 试管凝集试验阳性反应 （ Ｌ Ｓ ｃ ＬＳ 见表 １ ）。 检测 情况 报 告如 下 。 ２４ 补体结合试验 ３ １ ． ２ 份血清样品中有 ｌ 份样 品为 ０ １ 材 料 和方 法 １１材 料 ． 补 体结 合试 验 阳性反 应 （ 见表 １ 。 ）
骼 、心 血管 系统 和 中枢神 经 系统 的严重 并 发症 。
１ ２方 法 ．
布 氏杆 菌 病 可 通 过 口腔 、 呼吸 道 、结 膜 炎 或 其 １ ２ １虎 红平 板 凝集试 验 、试 管凝集 试验 、补体 结 合 ．．
他可 能的途 径 ，通 常是 职业 性接 触 而被 感染 ，摄 入感 试 验 按 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 Ｓ Ｔ ０ ８２ １ Ｎ／ １ ８ ．０ ０进
１ ５分钟 内完成 ９ 份样 品的布氏杆菌病检 测 ，极适合于大批量牛布 氏杆 菌病 的检疫 、筛查和疫病监控 。 ２
关键词 ：布氏杆 菌病 ；荧光偏振试验 ；牛 ；检测
中图分类号 ：￥ ５ ． 文献标识码 ：Ｂ 文章编号 ：１０ —４ Ｘ （ ０ ２ ５０ ５－２ ８４４ ０ ５９ ４ ２ １ ）０ ．０ １ ０
行病 学进 行确诊 。 目前 常用 的检 测 方法 有平 板 凝集 、 读 取值 的差 值 与 阴性对 照 的差值 进行 比较 ，判 定 阴阳
２ 结 果
布 氏杆 菌 病 主 要 依 靠 实 验 室 检 测 结 果 并 结 合 流 性 结 果 。 试 管 凝 集 、补 体 结 合 和 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 。 荧 光偏 ２ １ 荧 光偏振 试 验 ３ １ 血清 样 品 中有 ２ 样 品为 ． ２份 ５份 振 检 测 方 法 （Ｐ Ｆ Ａ） 是 一 种 新 的 试 验 方 法 ， 本 文 应 Ｆ Ａ试 验 阳性反 应 （ Ｐ 见表 １ ）。 用 Ｆ Ａ 对 我 国 出 口哈萨 克 斯坦 的 牛进 行布 氏杆 菌病 ２ ２ 虎 红平板 凝 集试验 ３ １ 血清 样 品中有 ｌ 样 Ｐ ． ２份 ７份
都 优 于 或 等 于 目前 主 要 采 用 的 Ｒ Ｐ 、Ｓ Ｔ、Ｃ Ｔ ＢＴ Ａ Ｆ、
Ｅ ＩＡ 检 测 方 法 。 不 论 从 检 测 方 法 的 简 便 快 速 上 ， ＬＳ
还 是从 敏感 性和 特异 性上 看 ，Ｆ Ａ 试验 都是 一个 较 为 Ｐ
注 ：Ｐ ： 阳性 ：ＮＥ ＯＳ Ｇ： 阴性
检 测 ， 同时 用 补 体 结 合 试 验 （ Ｆ ） Ｃ Ｔ 、平 板 凝 集 试 验 品为平 板凝 集试 验 阳性反 应 （ 见表 １ 。 ）
（ Ｂ Ｔ） 试管 凝集 试验 （ Ａ 、 Ｒ Ｐ 、 Ｓ Ｔ） 间接 Ｅ ＩＡ（Ｅ ＩＡ） ２ ３ 试管凝集试验 ３ １ ＬＳ ｉＬＳ 、 ． ２ 份血清样品中有 ｌ 份样 品为 ８
布 氏杆菌 病 （ ｒｃ ｌ ｓ ）（ 称布 鲁 氏菌病 ）是 管 凝集 抗 原 、补体 结合 抗原 、补 体 、溶血 素 、标 准 阳 Ｂ ｕ ｅｌ ｉ 又 ｏｓ 由布 氏杆 菌 （ ｒ ｃｌ ）引 起 的 人 兽 共 患 传 染 病 ，其 性 血清 、标 准 阴性血 清 均购 白中国兽 药监 察所 ，布 氏 Ｂ ｕ ｅｌ ａ 特征 是 生殖 器 官和胎 膜 发炎 ，引起 流产 、不 育和 各种 杆 菌 病 间接 Ｅ ＩＡ、竞 争 Ｅ ＩＡ 试 剂 盒购 自北 京测 ＬＳ ＬＳ 组织 的局 部病 灶 。布 氏杆菌 病在 牛 、羊 、猪 等家 畜 中 迪 公 司，布 氏杆 菌病 荧光偏 振 试剂盒 购 自美 国。 ．． ２ 份血 最常 发生 。本 病 很容 易传 播给 人 ， 引起一 种波 浪 热 的 １ １ ２ 血清 样 品 采 自出 口哈萨 克斯 坦 牛 的 ３ １ 急性 发 热性疾 病 ，也可 以发 展成 慢 性 ，引起 肌 肉、骨 清 样 品 。