分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的研究
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国马克西米利昂 ·罗伯斯比尔 (Maxim ilien de Robesp ierre, 1758 - 1794年 )语 ]1 [ 5 ]弗里德利希 ·冯 ·哈耶克 , 邓正来译 1 自由秩序原理 1三联书 店 , 1997, 172 - 173 [ 6 ] [英 ]J1M1奥利弗 1法律和经济 (1 版 ) [M ] 1武汉 :武汉大学出 版社 , 1986, 32 [ 7 ] 谁为一个公民的非正常死亡负责 1南方都市报 , 2003 - 04 - 25 [ 8 ] 吸毒母亲将女儿锁在家中 , 3 岁幼女被活活饿死 1 成都商报 ,
定为例 (从豌豆 、黄瓜中提取和测定过氯化氢酶活性参照 小麦叶片的测定 ) 。 11311 酶液提取 称取新鲜小麦叶片 015g置研钵中 ,加 入 2 - 3m l 4℃下预冷的 pH = 710磷酸缓冲液和少量石英 砂研磨成匀浆后 ,转入 25m l容量瓶中 ,并用缓冲液冲洗研 钵数次 ,合并冲洗液 ,并定容到刻度 。混合均匀将量瓶置 5℃冰 箱 中 静 置 10m in, 取 上 清 液 在 4000 rpm 下 离 心 15m in,上清 液 即 为 过 氧 化 氢 酶 粗 提 液 。 5℃下 保 存 备 用[2] 。 11312 活力测定 取 10m l试管 3 支 ( S1 、S2 、S3 ) , 其中 ( S1 、S2 )为样品测定管 , ( S3 )为空白管 ,按表 1顺序加入试 剂 ,重复 3次 。
[ 1 ]中国青年报 , 2005 - 10 - 08 [ 2 ]刘武俊 1增设袭警罪折射“立法依赖症 ”,江南时报 , 2005 - 10 -
09 [ 3 ]范杨 ,张企泰译 1黑格尔《法哲学原理 》1商务印书馆 , 1961, 96 [ 4 ]黄基泉著 1西方宪政思想史略 1山东人民出版社 , 200411421 [法
M ea sura tion of Ca ta la se V igor in Plan ts w ith Spectrophotom etry L i Sh ife i1 L iu Sh itong2 Zhou J ianp ing2 L uo T ianx iong2 (1 Quan Zhou J in Q iao Food L im ited Company, Fujian,
72
安徽农学通报 , Anhui Agri1Sci1Bull12007, 13 ( 2) : 72 - 73
分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的研究
李仕飞 1 刘世同 2 周建平 2 罗天雄 2
(1 泉州金桥食品有限公司 ,福建泉州 362011; 2 襄樊学院化学与生物科学系 ,湖北襄樊 441053)
×VT ×t ×FW
作者简介 :李仕飞 (1976 - ) ,男 ,泉州永春人 ,助理工程师 ,从事生物化学与分子生物学研究 。 收稿日期 : 2006 - 12 - 10
A240
= AS0
- As1
+ As2 2
AS0 —加入煮死酶液的对照管吸光值 ; AS1 , AS2 —样品管吸光值 ;
第 2分钟 01057 01061 4371565
第 3分钟 01056 01061 2911865
第 4分钟 01055 01060 2191131
73
从试验得出的数据可以看到第 1 分钟得出的结果是 从黄瓜中提取的过氧化氢酶的活性最大 ,小麦次之 ,最后 是豌豆 。第 2分钟 、第 3分钟 、第四分钟得到的结果和第 1 分钟一样 ,也是从黄瓜中提取的过氧化氢酶的活性最大 , 小麦次之 ,最后是豌豆 。 3 结论与讨论
250 [ 3 ]潘建国 ,郑尧隆 ,邓兆活 1蜂花粉中过氧化氢酶活性测定新方法
的探讨 [ J ]1 中国养蜂 , 1998, 49 (4) : 8 - 9 [ 4 ]徐镜波 ,郎佩珍 1过氧化氢酶活性及活性抑制的测定 [ J ] 1 环境
化学 , 1994, 13 ( 3) : 279 - 282 [ 5 ]徐镜波 ,哀晓凡 ,郎佩珍 1过氧化氢酶活性及活性抑制的紫外分光
光度测定 [ J ]1环境化学 , 1997, 16 (1) : 73 - 76 (责编 :余立华 )
(上接 156页 )分和管理制度 。要完善诉讼程序 ,保障公 民和法人的合法权益 。要采 取强 有 力 的 措施 , 切实 加 强执法队伍的建设 ,努力提高执法人员的业务素质 ,促 进执法队伍的专业化 。要建 设一 支 政 治 坚定 、业务 精 通 、作风优良 、执法公正的司法队伍 。同时要拓宽和健 全监督渠道 ,把权力运行置于有效的制约和监督之下 。 加强对权力的制约和监督 ,就要使权力结构本身形成 严密的制约和监督 ,以保证人民赋予的权力真正用来 为人民谋利益 。在这种权力 运行 机 制 中 , 不 同 性质 的 权力要作分解 , 决策职能 、执政职能 、监督 职 能 要相 对 独立行使 ,使各种权力由不同部门行使 ,在各种权力之 间形成合理的结构 。根据分权和各自的职权来设计权 力运行的 程 序 , 使 各 种 权 力 部 门 既 分 工 负 责 、互 相 配 合 、又互相制约 、互相把关 ,保证权力依法运行 , 从而防 止滥用权力的行为发生 。 4 结语
定吸光度 ,每隔 1m in读数 1次 ,共测 4m in,待 3 支管全部
测定完后 ,按下式计算酶活性 [ 3 - 5 ] 。
11313 结果计算 以 1m in内 A240减少 011的酶量为 1个 酶活单位 (U ) 。
过氧化氢酶
(A )活性 (U / gFW /m in)
=
ΔA240 011 ×V1
A S1 A S2 活性
第 1分钟 01181 01237 703199
第 2分钟 01177 01236
35311075
第 3分钟 01176 01236 235155
第 4分钟 01173 01231 177155
表 4 从黄瓜中提取的过氧化氢酶活性的测定结果
A S1 A S2 活性
第 1分钟 01058 01063 8731735
表 1 小麦叶片活力测定的试剂
S1
粗酶液 (m l)
012
pH718磷酸 (m l)
115
蒸馏水 (m l)
110
S2
S3
012
012 (加热 )
115
115
110
110
25℃预热后 ,逐管加入 013m l 011mol/L 的 H2 O2 ,每加
完一管立即记时 ,并迅速倒入石英比色杯中 , 240nm 下测
[ 1 ]陈晓敏 1 测定切花中过氧化氢酶活性的 3 种常用方法的比较 [ J ]1热带农业科学 , 2002, 22 (5) : 13 - 16
[ 2 ]陈大义 ,余蓉 ,许沧 ,等 1催化分光光度法快速测定血清过氧化氢 酶活性 [ J ]1 四川省卫生管理干部学院学报 , 2000, 12 ( 4 ) : 249 -
Key words: Hydrogen peroxide; catalase; spectrophotometry
过氧化氢酶大量分布于动植物细胞内 [1 ] ,同时需氧微 生物代谢过程也会有大量的过氧化氢酶产生 ,其产生和存 在是一动态过程 。动物肝脏细胞代谢产生的过氧化氢量 多 ,此酶大量积蓄 ,所以从动物肝脏提取过氧化氢酶是制 备过氧化氢酶的一个重要途径 ;细菌和霉菌在发酵过程中 也会有大量的过氧化氢酶释放于胞外 ,积蓄于发酵液中 , 通过生化制备方法得到纯度较高的过氧化氢酶可应用于 工业生产和医学界 。
本试验主要研究从 3 种植物中 ,在质量相同的情况 下哪种植物可以提取更多的过氧化氢酶 。由于这 3 个反 应都是过氧化氢的分解反应 ,在其他的条件相同的情况 下过氧化氢酶的量多的反应速度就快 ,反应进行的越快 则过氧化氢酶的活性就越大 。从最后试验得出的数据可 以看到黄瓜中提取的过氧化氢酶的活性最大 ,小麦次之 , 最后是豌豆 。在质量相同的情况下在这 3 种植物中从黄 瓜中可以提取更多的过氧化氢酶 ,小麦次之 ,最后是豌 豆。 参考文献
VT —粗酶提取液总体积 (m l) ; V1 —测定用粗酶液体积 (m l) ;
FW —样品鲜重 ( g) ;
011—A240每下降 011为 1个酶活单位 (U ) ;
t—加过氧化氢到最后一次读数时间 (m in) 。Biblioteka Baidu
2 结果与分析
从小麦叶片 、豌豆和黄瓜中提取的过氧化氢酶活性的
测定结果见表 2、表 3和表 4。
总之 ,改善执法环境 ,遏制袭警行为的发生 ,不仅 要依法严惩不法之徒 、大力提高群众法律素质 、增强民 警自身防护能力 ,更需下大力气提高警察的执法素质 , 确立“执法为民 ”的服务理念 ,树立执法公正 、高效的形 象 ,建立警民之间的和谐关 系 。更 有必 要 加 强 警察 的
规范性程序执法 ,以达到真正改善执法环境 、减少或避 免警察被侵害的可能 。在执法过程中力求做到人性执 法 、合理执法 、阳光执法 。而 要 做 到 这一 点 , 惟 有 推 进 法治一途 。只有做到了严格 、公正 、文明 执 法 , 才 能 切 实执法为民 、取信于民 , 也才能真正树立 执 法 权 威 、有 效保护自身权益 。 参考文献
表 2 小麦叶片中提取的过氧化氢酶活性的测定结果
A S1 A S2 活性
第 1分钟 01174 01202 747104
第 2分钟 01173 01183 378112
第 3分钟 01170 01183 252154
第 4分钟 01170 01181 1891635
表 3 豌豆中提取的过氧化氢酶活性的测定结果
摘 要 : H2O2 在 240nm波长下有强烈吸收峰 ,过氧化氢酶能分解过氧化氢 ,使反应溶液吸光度 (A240 )随反应时间增加 而降低 。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性 。本试验是在其他反应条件相同的情况下 ,从相同 质量的 3种不同植物 (小麦叶片 、豌豆 、黄瓜 )中提取的 3种过氧化氢酶 (A、B、C)与同体积同浓度的过氧化氢作用 ,根 据其反应速度的不同得出 A、B、C的活性大小 ,从而得出了在质量相同的情况下从黄瓜中可以提取更多的过氧化氢 酶。 关键词 :双氧水 ;过氧化氢酶 ; 分光光度法 中图分类号 S56512 文献标识码 A 文章编号 1007 - 7731 (2007) 02 - 72 - 02
随着科学技术的发展和社会的进步 ,过氧化氢酶的用 途越来越广泛 。目前纺织业应用强氧化剂过氧化氢漂白 脱色 ,而多余的过氧化氢可用过氧化氢酶去掉 ,以符合于 环保的要求 。医学上也可用低浓度过氧化氢清除坏死组 织 ,然后再用过氧化氢酶反应多余的过氧化氢 。葡萄糖氧 化酶和过氧化氢酶复合制剂还可用于防治动物肠道 、胃部 由细菌引起的一些疾病 。因此过氧化氢酶的酶活力测定 对于研究和应用此酶显得十分重要 。 1 材料与方法 111 试验仪器 紫外分光光度计 ;离心机 ;研钵 ;容量瓶 ; 吸管 ;试管 ;恒温水浴锅 。 112 试剂 012mol/L pH718 磷酸缓冲液 (内含 1%聚乙 烯吡咯烷酮 ) ; 011mol/L H2 O2 (用 011mol/L 高锰酸钾标 定 )。 113 方法 以从小麦叶片中提取的过氧化氢酶活性的测
362011; 2 Department of Chem istry and B ioscience, Xiangfan University, Hubei, 441053) Abstract: The hydrogen peroxide had the intense absorp tion at 240 wave length1 The catalase could decompose the hydrogen peroxide, causing the lum inosity (A240 ) to reduce along w ith the reaction time1 The variation rate was able to determ ine the catalase vigor1 W ith the same conditions, the catalases extracted from 3 kinds of different p lants (wheat leaf blade, pea, cu2 cumber) were treated with same density hydrogen peroxide1 Results showed that cucumber had more density of catalase than the other two1
定为例 (从豌豆 、黄瓜中提取和测定过氯化氢酶活性参照 小麦叶片的测定 ) 。 11311 酶液提取 称取新鲜小麦叶片 015g置研钵中 ,加 入 2 - 3m l 4℃下预冷的 pH = 710磷酸缓冲液和少量石英 砂研磨成匀浆后 ,转入 25m l容量瓶中 ,并用缓冲液冲洗研 钵数次 ,合并冲洗液 ,并定容到刻度 。混合均匀将量瓶置 5℃冰 箱 中 静 置 10m in, 取 上 清 液 在 4000 rpm 下 离 心 15m in,上清 液 即 为 过 氧 化 氢 酶 粗 提 液 。 5℃下 保 存 备 用[2] 。 11312 活力测定 取 10m l试管 3 支 ( S1 、S2 、S3 ) , 其中 ( S1 、S2 )为样品测定管 , ( S3 )为空白管 ,按表 1顺序加入试 剂 ,重复 3次 。
[ 1 ]中国青年报 , 2005 - 10 - 08 [ 2 ]刘武俊 1增设袭警罪折射“立法依赖症 ”,江南时报 , 2005 - 10 -
09 [ 3 ]范杨 ,张企泰译 1黑格尔《法哲学原理 》1商务印书馆 , 1961, 96 [ 4 ]黄基泉著 1西方宪政思想史略 1山东人民出版社 , 200411421 [法
M ea sura tion of Ca ta la se V igor in Plan ts w ith Spectrophotom etry L i Sh ife i1 L iu Sh itong2 Zhou J ianp ing2 L uo T ianx iong2 (1 Quan Zhou J in Q iao Food L im ited Company, Fujian,
72
安徽农学通报 , Anhui Agri1Sci1Bull12007, 13 ( 2) : 72 - 73
分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的研究
李仕飞 1 刘世同 2 周建平 2 罗天雄 2
(1 泉州金桥食品有限公司 ,福建泉州 362011; 2 襄樊学院化学与生物科学系 ,湖北襄樊 441053)
×VT ×t ×FW
作者简介 :李仕飞 (1976 - ) ,男 ,泉州永春人 ,助理工程师 ,从事生物化学与分子生物学研究 。 收稿日期 : 2006 - 12 - 10
A240
= AS0
- As1
+ As2 2
AS0 —加入煮死酶液的对照管吸光值 ; AS1 , AS2 —样品管吸光值 ;
第 2分钟 01057 01061 4371565
第 3分钟 01056 01061 2911865
第 4分钟 01055 01060 2191131
73
从试验得出的数据可以看到第 1 分钟得出的结果是 从黄瓜中提取的过氧化氢酶的活性最大 ,小麦次之 ,最后 是豌豆 。第 2分钟 、第 3分钟 、第四分钟得到的结果和第 1 分钟一样 ,也是从黄瓜中提取的过氧化氢酶的活性最大 , 小麦次之 ,最后是豌豆 。 3 结论与讨论
250 [ 3 ]潘建国 ,郑尧隆 ,邓兆活 1蜂花粉中过氧化氢酶活性测定新方法
的探讨 [ J ]1 中国养蜂 , 1998, 49 (4) : 8 - 9 [ 4 ]徐镜波 ,郎佩珍 1过氧化氢酶活性及活性抑制的测定 [ J ] 1 环境
化学 , 1994, 13 ( 3) : 279 - 282 [ 5 ]徐镜波 ,哀晓凡 ,郎佩珍 1过氧化氢酶活性及活性抑制的紫外分光
光度测定 [ J ]1环境化学 , 1997, 16 (1) : 73 - 76 (责编 :余立华 )
(上接 156页 )分和管理制度 。要完善诉讼程序 ,保障公 民和法人的合法权益 。要采 取强 有 力 的 措施 , 切实 加 强执法队伍的建设 ,努力提高执法人员的业务素质 ,促 进执法队伍的专业化 。要建 设一 支 政 治 坚定 、业务 精 通 、作风优良 、执法公正的司法队伍 。同时要拓宽和健 全监督渠道 ,把权力运行置于有效的制约和监督之下 。 加强对权力的制约和监督 ,就要使权力结构本身形成 严密的制约和监督 ,以保证人民赋予的权力真正用来 为人民谋利益 。在这种权力 运行 机 制 中 , 不 同 性质 的 权力要作分解 , 决策职能 、执政职能 、监督 职 能 要相 对 独立行使 ,使各种权力由不同部门行使 ,在各种权力之 间形成合理的结构 。根据分权和各自的职权来设计权 力运行的 程 序 , 使 各 种 权 力 部 门 既 分 工 负 责 、互 相 配 合 、又互相制约 、互相把关 ,保证权力依法运行 , 从而防 止滥用权力的行为发生 。 4 结语
定吸光度 ,每隔 1m in读数 1次 ,共测 4m in,待 3 支管全部
测定完后 ,按下式计算酶活性 [ 3 - 5 ] 。
11313 结果计算 以 1m in内 A240减少 011的酶量为 1个 酶活单位 (U ) 。
过氧化氢酶
(A )活性 (U / gFW /m in)
=
ΔA240 011 ×V1
A S1 A S2 活性
第 1分钟 01181 01237 703199
第 2分钟 01177 01236
35311075
第 3分钟 01176 01236 235155
第 4分钟 01173 01231 177155
表 4 从黄瓜中提取的过氧化氢酶活性的测定结果
A S1 A S2 活性
第 1分钟 01058 01063 8731735
表 1 小麦叶片活力测定的试剂
S1
粗酶液 (m l)
012
pH718磷酸 (m l)
115
蒸馏水 (m l)
110
S2
S3
012
012 (加热 )
115
115
110
110
25℃预热后 ,逐管加入 013m l 011mol/L 的 H2 O2 ,每加
完一管立即记时 ,并迅速倒入石英比色杯中 , 240nm 下测
[ 1 ]陈晓敏 1 测定切花中过氧化氢酶活性的 3 种常用方法的比较 [ J ]1热带农业科学 , 2002, 22 (5) : 13 - 16
[ 2 ]陈大义 ,余蓉 ,许沧 ,等 1催化分光光度法快速测定血清过氧化氢 酶活性 [ J ]1 四川省卫生管理干部学院学报 , 2000, 12 ( 4 ) : 249 -
Key words: Hydrogen peroxide; catalase; spectrophotometry
过氧化氢酶大量分布于动植物细胞内 [1 ] ,同时需氧微 生物代谢过程也会有大量的过氧化氢酶产生 ,其产生和存 在是一动态过程 。动物肝脏细胞代谢产生的过氧化氢量 多 ,此酶大量积蓄 ,所以从动物肝脏提取过氧化氢酶是制 备过氧化氢酶的一个重要途径 ;细菌和霉菌在发酵过程中 也会有大量的过氧化氢酶释放于胞外 ,积蓄于发酵液中 , 通过生化制备方法得到纯度较高的过氧化氢酶可应用于 工业生产和医学界 。
本试验主要研究从 3 种植物中 ,在质量相同的情况 下哪种植物可以提取更多的过氧化氢酶 。由于这 3 个反 应都是过氧化氢的分解反应 ,在其他的条件相同的情况 下过氧化氢酶的量多的反应速度就快 ,反应进行的越快 则过氧化氢酶的活性就越大 。从最后试验得出的数据可 以看到黄瓜中提取的过氧化氢酶的活性最大 ,小麦次之 , 最后是豌豆 。在质量相同的情况下在这 3 种植物中从黄 瓜中可以提取更多的过氧化氢酶 ,小麦次之 ,最后是豌 豆。 参考文献
VT —粗酶提取液总体积 (m l) ; V1 —测定用粗酶液体积 (m l) ;
FW —样品鲜重 ( g) ;
011—A240每下降 011为 1个酶活单位 (U ) ;
t—加过氧化氢到最后一次读数时间 (m in) 。Biblioteka Baidu
2 结果与分析
从小麦叶片 、豌豆和黄瓜中提取的过氧化氢酶活性的
测定结果见表 2、表 3和表 4。
总之 ,改善执法环境 ,遏制袭警行为的发生 ,不仅 要依法严惩不法之徒 、大力提高群众法律素质 、增强民 警自身防护能力 ,更需下大力气提高警察的执法素质 , 确立“执法为民 ”的服务理念 ,树立执法公正 、高效的形 象 ,建立警民之间的和谐关 系 。更 有必 要 加 强 警察 的
规范性程序执法 ,以达到真正改善执法环境 、减少或避 免警察被侵害的可能 。在执法过程中力求做到人性执 法 、合理执法 、阳光执法 。而 要 做 到 这一 点 , 惟 有 推 进 法治一途 。只有做到了严格 、公正 、文明 执 法 , 才 能 切 实执法为民 、取信于民 , 也才能真正树立 执 法 权 威 、有 效保护自身权益 。 参考文献
表 2 小麦叶片中提取的过氧化氢酶活性的测定结果
A S1 A S2 活性
第 1分钟 01174 01202 747104
第 2分钟 01173 01183 378112
第 3分钟 01170 01183 252154
第 4分钟 01170 01181 1891635
表 3 豌豆中提取的过氧化氢酶活性的测定结果
摘 要 : H2O2 在 240nm波长下有强烈吸收峰 ,过氧化氢酶能分解过氧化氢 ,使反应溶液吸光度 (A240 )随反应时间增加 而降低 。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性 。本试验是在其他反应条件相同的情况下 ,从相同 质量的 3种不同植物 (小麦叶片 、豌豆 、黄瓜 )中提取的 3种过氧化氢酶 (A、B、C)与同体积同浓度的过氧化氢作用 ,根 据其反应速度的不同得出 A、B、C的活性大小 ,从而得出了在质量相同的情况下从黄瓜中可以提取更多的过氧化氢 酶。 关键词 :双氧水 ;过氧化氢酶 ; 分光光度法 中图分类号 S56512 文献标识码 A 文章编号 1007 - 7731 (2007) 02 - 72 - 02
随着科学技术的发展和社会的进步 ,过氧化氢酶的用 途越来越广泛 。目前纺织业应用强氧化剂过氧化氢漂白 脱色 ,而多余的过氧化氢可用过氧化氢酶去掉 ,以符合于 环保的要求 。医学上也可用低浓度过氧化氢清除坏死组 织 ,然后再用过氧化氢酶反应多余的过氧化氢 。葡萄糖氧 化酶和过氧化氢酶复合制剂还可用于防治动物肠道 、胃部 由细菌引起的一些疾病 。因此过氧化氢酶的酶活力测定 对于研究和应用此酶显得十分重要 。 1 材料与方法 111 试验仪器 紫外分光光度计 ;离心机 ;研钵 ;容量瓶 ; 吸管 ;试管 ;恒温水浴锅 。 112 试剂 012mol/L pH718 磷酸缓冲液 (内含 1%聚乙 烯吡咯烷酮 ) ; 011mol/L H2 O2 (用 011mol/L 高锰酸钾标 定 )。 113 方法 以从小麦叶片中提取的过氧化氢酶活性的测
362011; 2 Department of Chem istry and B ioscience, Xiangfan University, Hubei, 441053) Abstract: The hydrogen peroxide had the intense absorp tion at 240 wave length1 The catalase could decompose the hydrogen peroxide, causing the lum inosity (A240 ) to reduce along w ith the reaction time1 The variation rate was able to determ ine the catalase vigor1 W ith the same conditions, the catalases extracted from 3 kinds of different p lants (wheat leaf blade, pea, cu2 cumber) were treated with same density hydrogen peroxide1 Results showed that cucumber had more density of catalase than the other two1