SSI 沙门血清分型 Training 2014 June CHS_

血清分型实例：沙门菌株 No. 1
x x x (x) x
O抗原: 1,9,12
x
x
x
SGG
无需诱导，菌株为单相
H 抗原: g, m S. Enteritidis O:1,9,12 H:g,m : -
血清分型实例：沙门菌株 No. 2
x x x x
x
x
O:1, 4, [5], 12
x x
H:i
10%
Sero gr. E Others
动物和环境 – Poly A-I (Art. no. 44806) – Poly A-S (Art. no. 48957) – Poly H (Art. no. 40290)
Salmonella sero-group distribution (1999). National Reference Laboratory for Enteropathogenic Bacteria, SSI.
SSI肠道致病菌国家参比实验室
玻片凝集实验操作方法
• 于洁净载玻片的测试区域及对照区域分别滴一滴抗 血清和一滴生理盐水； • 用铂金丝蘸取新鲜培养物单菌落一环，于载玻片上 的抗血清和生理盐水中； • 分别将培养物和抗血清、培养物和生理盐水充分混 匀，来回倾斜晃动载玻片10s； • 观察凝集现象： O抗原为颗粒状凝集 H抗原为絮状或绒毛状凝集

Group B 包括鼠伤寒(S. typhimurium) Group D 包括肠炎(S. enteritidis)
丹麦O抗原的分布统计数据
1% 1% 0%
人源 – Poly A-E (Art. no. 40190) – Vi (Art. no. 15514)
63%
Sero gr. A
25%
Sero gr. B Sero gr. C Sero gr. D
沙门氏菌血清分型流程图
血清学确诊 O抗原鉴定
O多群血清 OMA-OMG
图例 阳性结果 阴性结果 相诱导
Poly A-E+Vi
沙门阴性
OMA
OMB
OMC, etc.
与群和因子血清反应
1,4,[5],12
1,9,12
6,7,14
6,8
H抗原鉴定
H多价群血清 HMA-HMG
HMA
HMB
HMC
HMB
与相血清和因子血清反应：确定第1相 相诱导 H多价群血清 HMA-HMG
•所有的抗血清 – 除了Vi 抗血清 – 都来自兔子（多 克隆）。 •Vi抗血清产自老鼠（单 克隆）。
沙门氏菌抗血清简介

用于玻片凝集反应 快速 • 10秒之内判读结果 Vi来自单克隆抗体 带滴管瓶装 1或3 ml包装，即用型 每毫升可用于50次实验 没有交叉反应
+
-
SSI血清相对其他品牌血清的不同 沙门氏菌O + H血清
6,7,14:e,h: e,n,z15 布伦登卢普
临床事件
• 食物中毒 • 腹泻 • 伤寒
血清分型的作用
诊断病情 控制动物和食品 流行病学监测 流行病暴发溯源
食物传染和人间传染 的主要原因
沙门氏菌血清学（快速）确诊

人类标本 • A-E多价 • Vi 其他标本 • A-I多价 • A-S多价 • H多价 一定要进行生化实验
i HMD
g,m
无游动，此菌 株只有单一相。
ห้องสมุดไป่ตู้
r
HMD
e,h HMD
z10 HMB
与相血清和因子血清反应：确定第2相
1,2
1,5
S. Infantis 6,7,14:r:1,5
1,2
S. Newport 6,8:e,h:1,2
e,n,x
S. Hardar 6,8:z10:enx
沙门氏菌血清型结论
S. Typhimurium S. Enteritidis 1,4,[5],12:i:1,2 1,9,12:g,m:-
主要内容
• 沙门氏菌属的分类及其抗原简介 • 沙门氏菌的血清学分型方法简介 • 丹麦SSI沙门氏菌抗血清产品简介
沙门氏菌抗原
O 抗原(57种 )
O抗原也称菌体抗原，是细胞壁的组成 成分。
Vi 抗原(荚膜多糖)
Vi抗原是一种特殊的菌体抗原，属于K 抗原群
H 抗原(116种)
大部分沙门氏菌H抗原都有两相，第一 相被称为特异性相，第二相为非特异 性相
沙门氏菌抗血清
应用

沙门菌血清学（快速）确诊 • O多价群血清 • H多价群血清（可选） 完整血清学分型 • 全部群血清和因子血清 部分血清分型或快速鉴定 • 需要选择性的部分抗血清 • 例如：S. Enteritidis （肠炎） 和 S. Typhimurium（鼠伤寒）
The Kauffmann-White scheme

SSI血清更快的反应时间 (10 sec./ 1 min) ； SSI血清专用于玻片凝集反应； 若有需要，可提供高滴度血清； SSI血清用量每次反应仅需 30 µl。同一玻片上可同时进行多个反应； SSI血清覆盖全部已知沙门氏菌； SSI的H因子血清也可用于试管凝集反应； SSI有齐全的相诱导血清；
+ + + + -
Warmblooded animals
Cold-blooded animals and environment
沙门氏菌血清分型
Kauffmann-White scheme
O(Vi):H1:H2 H抗原第二相通过相诱导后分型确定 S. Typhi S. Paratyphi A S. Typhimurium S. Braenderup 9,12,[Vi]: d: – 1,2,12: a: [1,5] 1,4,[5],12: i: 1,2 伤寒 副伤寒 鼠伤寒
拥有齐全的沙门血清产品可使用Kauffmann-White表对所有已知 沙门氏菌进行完整分型。 玻片凝集用抗血清 多价血清 Vi 血清 O 多群抗血清 (OM) O 群抗血清 O 因子血清 H 多相抗血清 (HM) H 单相抗血清 H 因子血清 H:R-相抗血清 相诱导用抗血清 SG 相诱导血清 H 相抗血清 抗血清试剂盒 Salmonella Sero-Quick ID Kit Salmonella Group Kit
沙门氏菌诊断血清30支套装
沙门氏菌诊断血清60支套装
沙门氏菌诊断血清30支套装
沙门氏菌抗血清60支套装
沙门30/60支套装 分型流程
Title: Antigenic formulae of the Salmonella serovars (沙门氏菌血清型抗原表) 2007 9th edition WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella, Institut Pasteur, Paris, France
• Salmonella bongori 邦戈尔沙门氏菌 (22)
总计：2579（截止2007年）
沙门氏菌O群的命名
命名规则
现名 旧名 现名 旧名 现名 旧名 ________________________________________________________________________ A B C1–C4 C2–C3 D1 D2 D3 E1–E2–E3 E4 F 2 4 6,7 8 9 9,46 9,46,27 3,10 1,3,19 11 G1–G2 H I J K L M N O P 13 6,14 16 17 18 21 28 30 35 38 Q R S T U V W X Y Z 39 40 41 42 43 44 45 47 48 50
无游动
正常游动
未接种
SSI体外诊断产品
1. 2. 培养基 抗血清 沙门氏菌（Salmonella） 大肠杆菌（E. coli） 肺炎链球菌（Pneumococci） 志贺菌（Shigella） 链球菌（Streptococci） 其他试剂盒和产品

3.
SSI沙门氏菌抗血清
沙门氏菌抗血清
SG 2
x
x
H:1,2
结果：1,4,[5],12:i:1,2 沙门鼠伤寒
沙门氏菌相诱导
沙门氏菌相诱导操作
加100µl相诱导血清
加10 ml半固体琼 脂 (Swarm agar)
混匀并固化20分钟
沙门氏菌相诱导操作
在平板中心接种， 35-37ºC过夜培养
从边缘取菌落进行 血清凝集实验
沙门氏菌相诱导操作
________________________________________________________________________
其它 O:51 – O:67
(O:64 = O:48)
在沙门氏菌血清分型之前
1. (粪便)标本采集
2. 在SSI肠道培养基上 培养并分离沙门氏菌 3. 生化鉴定
超过2500种血清型
例子: Salmonella Typhimurium 抗原表 (O:4,5,12; H:i:1,2)
沙门氏菌抗血清
O抗原 H抗原
Flagella
Vi抗原
鼠伤寒沙门氏菌（红色）入侵培养 人类细胞。
沙门氏菌血清型命名法： O: [Vi]: H1: H2 超过2500种血清型 例： 4,5,12:i:1,2 Salmonella Typhimurium
F. Kauffmann 1899-1978
沙门氏菌属分类
• salmonella enterica 肠道沙门氏菌
– 下属亚种 (2557) I - enterica 肠道亚种 (1531) II - salamae 萨拉姆亚种 (505) IIIa - arizonae 亚利桑那亚种 (99) IIIb - diarizonae 双亚利桑那亚种 (336) IV - houtenae 豪顿亚种 (73) VI - indica 印度亚种 (13)
产品覆盖广

玻片凝集用血清 多价血清 单克隆Vi血清 O多群血清 O群血清 O因子血清 H多相血清 H单相血清 H因子 H:R相血清

相诱导血清 SG混合血清
Kauffman-White
提供超过180种血清产品，根据Kauffman-White表可对所有已知沙门菌株进行分型。
Fritz Kauffmann
• • • • • • 1922-1929: 在德国研究沙门氏 菌 1929: 建立了最初的血清分型表 1929-1932: 在德国研究肺炎链 球菌 1933-1965: 工作于SSI 1938-1965: 国际沙门氏菌参比 中心主任 1940: 建立肺炎链球菌的丹麦式 血清分型系统
血清分型之前一定要先做生化鉴定
• 赖氨酸脱羧酶 • 吲哚试验 • 硫化氢 • 半固体琼脂 (游动性) • 葡萄糖产气 • 糖发酵试验
沙门氏菌生化鉴定
利用生化特性区别沙门氏菌属的种及亚种
Species Subsp. enterica I
+ + + d -
S. enterica salamae II
Statens Serum Institut 丹麦国家血清研究院 沙门氏菌血清分型
顾竑 guhong@ssi.dk 2014 SSI北京代表处
Statens Serum Institut
• 丹麦国家血清研究院 (Statens Serum Institut, 简 称SSI)是丹麦内务与卫生 部下属的事业单位，成立 于 1902年。 • SSI是丹麦国家级卫生和疾 病预防、控制机构。为丹 麦国民提供卫生服务是其 众多职责中的一项。SSI致 力于预防和控制传染病、 生物威胁和先天缺陷。
+ + + + d -
arizonae IIIa
+ + + + - (75%)
diarizonae IIIb
+ + + + + + (75%)
houtenae IV
+ + + + -
indica VI
d d + d d
S. bongori
Dulcitol ONPG (2h) Malonate L(+)-tartrate Gelatinase Sorbitol KCN PGUA Salicine Lactose Habitat