FAD染色法
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花粉粒有可育和不育两种,通过一种可以指示膜的完整性的酶对花粉粒进行染色,由于只有可育的花粉在显微镜下可以观察到荧光,而不育的没有,因此可以将两者区别。
一、材料和试剂
1. BKbufferS 15 M OPSpH7.5
2. 醋酸荧光素(FDA)
3. Source:拟南芥花粉
4. 取样:开花期
5. 染色:Stock醋酸荧光素(FDA)溶液2 mg FDA/mlof丙酮(在离心管中-20°C保存)。
二、设备
1. 荧光显微镜
三、步骤
1. 取1 ul FDA母液加入到1mloftheBKbufferS 15 M OPS,pH7.5。
注意:FDA母液非常易挥发–混合FDA-buffer时不要超过2个小时。
2. Mounting:滴一滴FDA-buffer混合液到用酒精清洗过的载玻片上,放上一些花粉粒到溶液里,盖上盖玻片。
3. 观察:在蓝光下(wavelength=495 nm)用光学显微镜观察。有活力的花粉粒显示荧光(FCR+)。
注意:醋酸荧光素,是无极性、无荧光的分子,穿入到花粉粒中。它被花粉的酯酶类水解释放荧光素,一个极性荧光分子,当花粉粒的膜是完整的,荧光素会在花粉粒的内径积累,就会在蓝光下显示荧光。FCR检测可以让我们知道花粉粒酯酶的活性和膜的完整性。