溶血性链球菌

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4、杆菌肽敏感试验：取典型菌落的菌液涂布 于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单 位的杆菌肽纸片置于上述平板上，36℃培养 18-24h，如有抑菌圈出现即为阳性。用已知 的阳性菌株做对照。
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3、链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2mL， 加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链 球菌18-24h36℃肉浸液肉汤培养物0.5mL 及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于36℃ 水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝 块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性， 如24h后不溶解即为阴性。同时用肉浸液 肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的 菌株做阳性对照。
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血平板：菌落为灰白色，半透明或不透明， 表面光滑，有乳光，直径约0.5—0.75mm， 为圆形突起的细小菌落，乙型溶血性链球 菌周围有2—4mm界限分明、无色透明的 溶血圈。
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血琼脂平板（BA）
配方：pH7.4-7.6豆粉琼脂
100ml
脱纤维羊血
5—10ml
制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使 其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每 100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔 血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或 分装试管，制成斜面备用。
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报告
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周身不适。
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3、透明质酸酶：又称扩散因子，能分解 细胞间质的透明质酸，故能增加细菌的侵 袭力，使病菌易在组织中扩散。 4、链激酶：又称链球菌纤维蛋白溶酶， 能使血液中纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶， 具有增强细菌在组织中的扩散作用，该酶 耐热，100℃50分钟仍可保持活性。 5、链道酶：又称链球菌DNA酶，能使脓 液稀薄，促进病菌扩散。 6、杀白细胞素：能使白细胞失去动力， 变成球形，最后膨胀破裂。
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4、抗原结构
链球菌的抗原构造较复杂，主要有三种： （1）核蛋白抗原 或称P抗原，无特异性， 各种链球菌均相同。 （2）多糖抗原或称C抗原，系群特异性抗 原，是细胞壁的多糖组分，可用稀盐酸等提 取。 （3）蛋白质抗原 或称表面抗原，具有型特 异性，位于C抗原外层，其中可分为M、T、 R、S四种不同性质的抗原成分，与致病性 有关的是M抗原。
在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉 淀生长。
在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边 缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株 溶血不一。
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3、生化反应
分解葡萄糖，产酸不产气， 对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨 醇、棉子糖、蕈糖、七叶苷的分 解能力因不同菌株而异。一般不 分解菊糖，不被胆汁溶解，触酶 阴性。
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抵抗力
该菌抵抗力一般不强，60℃30min即 被杀死，对常用消毒剂敏感，在干燥 尘埃中生存数月。乙型链球菌对青霉 素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺 均敏感。青霉素是链球菌感染的首选 药物，很少有耐药性。
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来自百度文库
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设备和材料 1冰箱：O℃——4℃。 2恒温培养箱：36℃士1℃。 3恒温水浴锅：36℃土1℃。 4显微镜：10*～l00*。 5均质器或灭菌乳钵。 6离心机：4000r/min。 7架盘药物天平：0g——5009，精确至0.5g。 8灭菌试管：10mm*100mm、l6mm*160mm。 9灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具1mL 刻度）。 10灭菌锥形瓶：100mL。 11灭菌培养皿：直径90mm。 12灭菌棉签、镊子等。
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5、分类
根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血 及其溶血性质分为三类。 （1）α-溶血性链球菌：菌落周围有1-2mm宽的草绿 色溶血环，也称甲型溶血，这类链球菌多为条件致病 菌。 （2）β-溶血性链球菌：菌落周围形成一个2-4mm宽、 界限分明、完全透明的无色溶血环，也称乙型溶血， 因而这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强， 常引起人类和动物的多种疾病。
溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 致
袭性酶有关，主要有以下几种： 1、链球菌溶血素：溶血素有O和S两种，
病
O为含有-SH的蛋白质，具有抗原性，S为小分 性
子多肽，分子量较小，故无抗原性。
2、致热外毒素：曾称红疹毒素或猩红热
毒素，是人类猩红热的主要毒性物质，会引起
局部或全身红疹、发热、疼痛、恶心、呕吐、
1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎 症时造成食品的污染；
2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局 部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；
3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。
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溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的 化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发 性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、 猩红热、肾小球肾炎。
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葡萄糖肉浸液肉汤
配方（每升）：
牛肉(提取浸出 500g 粉)
氯化钠
5g
原 理：
蛋白胨
10g
磷酸氢二钾 2g
葡萄糖
10g
最终pH 7.5±0.2
蛋白胨、牛肉浸出粉提供氮源、 维生素和生长因子；氯化钠维持 均衡的渗透压；磷酸氢二钾为缓 冲剂；葡萄糖提供碳源。
将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合 后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣 完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补 足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正 pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。
（3）γ-链球菌：不产生溶血素，菌落周围无溶血 环，也称为丙型或不溶血性链球菌，该菌无致病性， 常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起感染 。
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流行病学
溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、 粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接 触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食 品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感 染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。一 般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：
亦可用其它营养丰富的基础培养基配制血琼脂。
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（一）检验
1、样品处理：取25g固体（或25mL液体） 检样加入225mL灭菌生理盐水，制成混悬液。
2、吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸 液肉汤，或直接划线于血平板（如检样污染 严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤）， 36℃培养24h，接种血平板，36℃培养24h, 挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平 板上分纯，观察在液体和固体中的培养特征、 溶血情况及革兰氏染色、形态，并进行链激 酶试验和杆菌肽敏感试验。
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匹克氏肉汤
含1%胰蛋白胨的牛心浸液 200mL 1：25000结晶紫盐水溶液 10mL 1：800三氮化钠溶液 10mL 脱纤维兔血(或羊血) 10mL
制法 ： 将上述已灭菌的各种成分，用无菌
手续依次混合，分装于无菌试管内，每 管约2mL，保存于冰箱内备用
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溶血性链球菌又称沙培林 对热和化学清毒剂均敏感,常 引起扁桃体、咽部、中耳等 感染。亦为肾盂肾炎、产褥 热、猩红热的病原体。
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一、生物学特性 二、流行病学 三、致病性 四、抵抗力 五、检验和控制
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1、形态与染色
链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链 状排列，长短不一，从4-8个至20-30个菌细胞组成 不等，链的长短与细菌的种类及生长环境有关。在 液体培养基中易呈长链，固体培养基中常呈短链， 由于链球菌能产生脱链酶，所以正常情况下链球菌 的链不能无限制的延长。
多数菌株在血清肉汤中培养24h易形成透明质酸的荚膜，继 续培养后消失。该菌不形成芽 胞，无鞭毛，易被普通的碱性 染料着色，革兰氏阳性，老龄 培养或被中性粒细胞吞噬后， 转为革兰氏阴性。
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2、培养特征
需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培 养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大 多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。 最适生长温度为37℃，在20-42℃能生长，最适 pH为7.4-7.6。
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培养基和试剂
1葡萄糖肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.1 规定。在肉浸液肉汤内加人1％葡萄糖。 2肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.1规定。 3匹克氏肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.62规定。 4血琼脂平板：按GB/T4789.28一2003中4.6规定。 5人血浆。 6 0.25%氯化钙。 7 0.85％灭菌生理盐水。 8杆菌肤药敏纸片（含0.04单位）。