金黄色葡萄球菌脑膜炎小鼠模型的建立
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〔１０〕杨春治 雷公藤内酯醇对大鼠变应性鼻炎 ＴＬＲ２ＮＦκＢ信号通 路的干预作用〔Ｊ〕山西医科大学学报，２０１５，４６（７）：６３６６４０
〔１１〕王会玲，周晓春，龚理，等 雷公藤内酯醇对 ＡＤ细胞模型核因子
海峡药学 ２０１８年 第 ３０卷 第 ９期
κＢ表达及炎性因 子 释 放 的 影 响 〔Ｊ〕时 珍 国 医 国 药，２０１３，２４ （５）：１１００１１０２
作者简介：龚书榕，男，毕业于福建医科大学。职称：副主任医师。
·２０·
１ 材料与方法 １１ 材料 １１１ 试药及仪器：金黄色葡萄球菌菌株 （ＡＴＣＣ２９２１３和 ＡＴＣＣ４３３００）购自上海鲁徽科技有限公司；小鼠 Ｃ反应蛋白 试剂盒均购自上海羽朵生物技术有限公司；生理盐水、５％葡 萄糖注射液购自山东鲁抗辰欣药业有限公司；红外体温枪购 自欧姆龙公司；法国科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基购于 北京赛为思生物技术开发中心。 １１２ 实验动物：清洁级健康 ＫＭ 小鼠，雄性，５０只，鼠龄 ６ ～８周，体重 ２２～２６ｇ，购于吴氏实验动物中心，适应性饲养 ３ｄ，自由饮水和进食。
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓｍｏｄｅｌｏｆｍｏｕｓｅ ｗｉｔｈ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｉｎｆｅｃ ｔｉｏｎＭＥＴＨＯＤＳ ６～８ｗｅｅｋｓｍａｌｅＫＭ ｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａｅｘｐｅｒｉ ｍｅｎｔｇｒｏｕｐａｎｄｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔｂａｃｔｅｒｉａｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｇｒｏｕｐＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈＳｔａｐｈｙｌｏ ｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ２９２１３ｏｒＡＴＣＣ４３３００），ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈａｓｅｐｔｉｃｓａｌｉｎｅＡｆｔｅｒｍｏｄｅｌ ｉｎｇ，ｔｈｅｓｙｍｐｔｏｍｓａｎｄｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｏｆｍｉｃｅｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ，ａｎｄｂｏｄｙｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｄｅｘａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅｏｆｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄＲＥＳＵＬＴＳ Ａｆｔｅｒｍｏｄｅｌｉｎｇ，ｔｈｅｍｉｃｅｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｓｈｏｗｅｄｓｙｍｐ ｔｏｍｓｏｆｓｌｏｗｒｅａｃｔｉｏｎ，ｃｏｎｖｕｌｓｉｏｎ，ａｎｄＣＲＰｖａｌｕｅｓｅｌｅｖａｔｅｄＣｕｌｔｕｒｅｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｗａｓｐｏｓｉ ｔｉｖｅＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ ＴｈｅＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓｍｏｄｅｌｏｆｍｏｕｓｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｎｔｈｉｓｐｒｏｊｅｃｔｃａｎｂｅｕｓｅｄ ｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈ ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ；Ｍｉｃｅ；Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ
金黄色葡萄球菌脑膜炎小鼠模型的建立
龚书榕１，王 凌２，周晓芬１，于荣国１（１福建省立医院重症医学三科 福州 ３５０００１；２福建省立医院临床药学
部 福州 ３５０００１）
摘要：目的 建立金黄色葡萄球菌感染的脑膜炎小鼠模型。方法 ６～８周雄性 ＫＭ小鼠随机分为对照组、敏感菌实验组和耐药菌实验组，实
验组小鼠颅内注射金黄色葡萄球菌（ＡＴＣＣ２９２１３或 ＡＴＣＣ４３３００），对照组注射等量无菌生理盐水。造模后观察小鼠症状、存活率，测定体温、炎
ＳｔｒａｉｔＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＶｏｌ３０Ｎｏ９２０１８
１２ 实验方法 １２１ 实验分组及给药：将 ＫＭ 小鼠用 １０％水合氯醛（３ｍＬ ·ｋｇ－１）经腹腔内注射进行麻醉。麻醉后，将小鼠头颅固定于 自制头架上，保持小鼠呼吸通畅，于 前 后 囟 之 间、中 线 左 旁 ２５ｍｍ处，用酒精棉球消毒，用微量进样器吸取 ２０μＬ金黄色 葡萄球菌菌液（１×１０８ＣＦＵ），垂直进针 ２ｍｍ，缓慢注入菌液。 敏感菌实验组和耐药菌实验组分别注射金黄色葡 萄 球 菌 ＡＴＣＣ２９２１３和 ＡＴＣＣ４３３００，对照组小鼠用相同方法注射等 量的 ０９％ ＮａＣｌ注射液。 １２２ 实验过程小鼠行为学整体情况：称重和测量体温；接 种细菌待麻醉清醒后即进行临床观察，包括有无口唇及四肢 皮肤发钳、呼吸困难、反应迟钝、运动减少和抽搐等。在试验 过程中采用 Ｌｏｅｆｆｌｅｒ的神经行为学 ５分制评分方法对实验小 鼠进行评估。５分：当抓住背部时，能正 常 运 动，在 ５ｓ内 翻 身；４分：自主运动减少，５ｓ内能翻身；３分：＞５ｓ翻身；２分：不 能翻身；１分：不能运动。 １２３ 血样采集及 Ｃ反应蛋白的检测：小鼠经眼眶采取血样 约 １ｍＬ，常温下离心 ５ｍｉｎ，转速 ５０００ｒ· ｍｉｎ－１，分离血清，取 １０μＬ血清，按照试剂盒步骤操作，检测血清中 Ｃ反应蛋白含 量。 １２４ 脑组织菌落计数：小鼠取血后，迅速剪下头部，迅速开 颅取脑组织。脑组织用 １ｍＬ无菌磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）制作匀 浆，经系列稀释后，分别取 １００μＬ接种 ＴＳＡ血平板，３７℃孵箱 培养 ２４ｈ，计数平板菌落。 １３ 统计分析 采用 ＳＰＳＳ１９０统计软件包进行统计，所有 结果用均数 ±标准差（ｘ±ｓ）表示，两组间均数比较采用 ｔ检 验或秩和检验，Ｐ＜００５为具有统计学意义。 ２ 结果 ２１ 小鼠症状与检测指标 在建模后，实验组小鼠行为学与 对照组相比有 显 著 性 差 异 （Ｐ＜００１）。体 温 情 况 表 显 示，在 建模后，实验组小鼠体温与对照组相比无显著性差异，但实验 组小鼠体温未见升高，反而出现 体 温 下 降。实 验 组 血 清 中 ＣＲＰ浓度明显高于对照组。耐药菌实验组与敏感菌实验组在 行为学评分和检测指标上无显著性差异（见表 １）。
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＭｅｎｉｎｇｉｔｉｓＭｏｄｅｌｏｆＭｏｕｓｅ
ＧＯＮＧ Ｓｈｕｒｏｎｇ１，ＷＡＮＧ Ｌｉｎｇ２，ＺＨＯＵ Ｘｉａｏｆｅｎ１，ＹＵ Ｒｏｎｇｇｕｏ１（１ＴｈｉｒｄＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｒｉｔｉｃａｌＣａｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００１，Ｃｈｉｎａ；２ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｙ，ＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｚｈｏｕ ３５０００１，Ｃｈｉｎａ）
症指标和脑组织细菌培养等。结果 造模后，实验组小鼠出现反应迟钝、抽搐等症状，ＣＲＰ升高，脑组织金黄色葡萄球菌培养阳性。 结论 本
文所建金黄色葡萄球菌脑膜炎小鼠模型可用于临床科研。
关键词：金黄色葡萄球菌；小鼠；脑膜炎
中图分类号：Ｒ９６５１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６３７６５（２０１８）０９０６１）系 指 软 脑 膜 的 弥 漫 性 炎 症 性 改 变。 临床上引发脑膜炎的途径主要有 ４种：直接感染、病灶感染、 血行感染和经由脑脊液通路所致感染，脑膜炎一旦发生，会导 致病情加重，病程延长 。 〔１，２〕 细菌性脑膜炎是一种特别严重 的疾病需及时治疗，特别是在 ＩＣＵ环境中，金黄色葡萄球菌特 别是耐药金 葡 菌 是 引 起 脑 膜 炎 的 主 要 致 病 菌 〔３５〕，如 果 治 疗 不及时，患者可能会在数小时内死亡或造成永久性的脑损伤。 本研究拟建立一种可用于临床科研的金黄色葡萄球菌脑膜炎 小鼠模型。
〔１１〕王会玲，周晓春，龚理，等 雷公藤内酯醇对 ＡＤ细胞模型核因子
海峡药学 ２０１８年 第 ３０卷 第 ９期
κＢ表达及炎性因 子 释 放 的 影 响 〔Ｊ〕时 珍 国 医 国 药，２０１３，２４ （５）：１１００１１０２
作者简介：龚书榕，男，毕业于福建医科大学。职称：副主任医师。
·２０·
１ 材料与方法 １１ 材料 １１１ 试药及仪器：金黄色葡萄球菌菌株 （ＡＴＣＣ２９２１３和 ＡＴＣＣ４３３００）购自上海鲁徽科技有限公司；小鼠 Ｃ反应蛋白 试剂盒均购自上海羽朵生物技术有限公司；生理盐水、５％葡 萄糖注射液购自山东鲁抗辰欣药业有限公司；红外体温枪购 自欧姆龙公司；法国科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基购于 北京赛为思生物技术开发中心。 １１２ 实验动物：清洁级健康 ＫＭ 小鼠，雄性，５０只，鼠龄 ６ ～８周，体重 ２２～２６ｇ，购于吴氏实验动物中心，适应性饲养 ３ｄ，自由饮水和进食。
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓｍｏｄｅｌｏｆｍｏｕｓｅ ｗｉｔｈ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｉｎｆｅｃ ｔｉｏｎＭＥＴＨＯＤＳ ６～８ｗｅｅｋｓｍａｌｅＫＭ ｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａｅｘｐｅｒｉ ｍｅｎｔｇｒｏｕｐａｎｄｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔｂａｃｔｅｒｉａｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｇｒｏｕｐＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈＳｔａｐｈｙｌｏ ｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ２９２１３ｏｒＡＴＣＣ４３３００），ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈａｓｅｐｔｉｃｓａｌｉｎｅＡｆｔｅｒｍｏｄｅｌ ｉｎｇ，ｔｈｅｓｙｍｐｔｏｍｓａｎｄｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｏｆｍｉｃｅｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ，ａｎｄｂｏｄｙｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｄｅｘａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅｏｆｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄＲＥＳＵＬＴＳ Ａｆｔｅｒｍｏｄｅｌｉｎｇ，ｔｈｅｍｉｃｅｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｓｈｏｗｅｄｓｙｍｐ ｔｏｍｓｏｆｓｌｏｗｒｅａｃｔｉｏｎ，ｃｏｎｖｕｌｓｉｏｎ，ａｎｄＣＲＰｖａｌｕｅｓｅｌｅｖａｔｅｄＣｕｌｔｕｒｅｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｗａｓｐｏｓｉ ｔｉｖｅＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ ＴｈｅＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓｍｏｄｅｌｏｆｍｏｕｓｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｎｔｈｉｓｐｒｏｊｅｃｔｃａｎｂｅｕｓｅｄ ｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈ ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ；Ｍｉｃｅ；Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ
金黄色葡萄球菌脑膜炎小鼠模型的建立
龚书榕１，王 凌２，周晓芬１，于荣国１（１福建省立医院重症医学三科 福州 ３５０００１；２福建省立医院临床药学
部 福州 ３５０００１）
摘要：目的 建立金黄色葡萄球菌感染的脑膜炎小鼠模型。方法 ６～８周雄性 ＫＭ小鼠随机分为对照组、敏感菌实验组和耐药菌实验组，实
验组小鼠颅内注射金黄色葡萄球菌（ＡＴＣＣ２９２１３或 ＡＴＣＣ４３３００），对照组注射等量无菌生理盐水。造模后观察小鼠症状、存活率，测定体温、炎
ＳｔｒａｉｔＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＶｏｌ３０Ｎｏ９２０１８
１２ 实验方法 １２１ 实验分组及给药：将 ＫＭ 小鼠用 １０％水合氯醛（３ｍＬ ·ｋｇ－１）经腹腔内注射进行麻醉。麻醉后，将小鼠头颅固定于 自制头架上，保持小鼠呼吸通畅，于 前 后 囟 之 间、中 线 左 旁 ２５ｍｍ处，用酒精棉球消毒，用微量进样器吸取 ２０μＬ金黄色 葡萄球菌菌液（１×１０８ＣＦＵ），垂直进针 ２ｍｍ，缓慢注入菌液。 敏感菌实验组和耐药菌实验组分别注射金黄色葡 萄 球 菌 ＡＴＣＣ２９２１３和 ＡＴＣＣ４３３００，对照组小鼠用相同方法注射等 量的 ０９％ ＮａＣｌ注射液。 １２２ 实验过程小鼠行为学整体情况：称重和测量体温；接 种细菌待麻醉清醒后即进行临床观察，包括有无口唇及四肢 皮肤发钳、呼吸困难、反应迟钝、运动减少和抽搐等。在试验 过程中采用 Ｌｏｅｆｆｌｅｒ的神经行为学 ５分制评分方法对实验小 鼠进行评估。５分：当抓住背部时，能正 常 运 动，在 ５ｓ内 翻 身；４分：自主运动减少，５ｓ内能翻身；３分：＞５ｓ翻身；２分：不 能翻身；１分：不能运动。 １２３ 血样采集及 Ｃ反应蛋白的检测：小鼠经眼眶采取血样 约 １ｍＬ，常温下离心 ５ｍｉｎ，转速 ５０００ｒ· ｍｉｎ－１，分离血清，取 １０μＬ血清，按照试剂盒步骤操作，检测血清中 Ｃ反应蛋白含 量。 １２４ 脑组织菌落计数：小鼠取血后，迅速剪下头部，迅速开 颅取脑组织。脑组织用 １ｍＬ无菌磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）制作匀 浆，经系列稀释后，分别取 １００μＬ接种 ＴＳＡ血平板，３７℃孵箱 培养 ２４ｈ，计数平板菌落。 １３ 统计分析 采用 ＳＰＳＳ１９０统计软件包进行统计，所有 结果用均数 ±标准差（ｘ±ｓ）表示，两组间均数比较采用 ｔ检 验或秩和检验，Ｐ＜００５为具有统计学意义。 ２ 结果 ２１ 小鼠症状与检测指标 在建模后，实验组小鼠行为学与 对照组相比有 显 著 性 差 异 （Ｐ＜００１）。体 温 情 况 表 显 示，在 建模后，实验组小鼠体温与对照组相比无显著性差异，但实验 组小鼠体温未见升高，反而出现 体 温 下 降。实 验 组 血 清 中 ＣＲＰ浓度明显高于对照组。耐药菌实验组与敏感菌实验组在 行为学评分和检测指标上无显著性差异（见表 １）。
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＭｅｎｉｎｇｉｔｉｓＭｏｄｅｌｏｆＭｏｕｓｅ
ＧＯＮＧ Ｓｈｕｒｏｎｇ１，ＷＡＮＧ Ｌｉｎｇ２，ＺＨＯＵ Ｘｉａｏｆｅｎ１，ＹＵ Ｒｏｎｇｇｕｏ１（１ＴｈｉｒｄＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｒｉｔｉｃａｌＣａｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００１，Ｃｈｉｎａ；２ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｙ，ＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｚｈｏｕ ３５０００１，Ｃｈｉｎａ）
症指标和脑组织细菌培养等。结果 造模后，实验组小鼠出现反应迟钝、抽搐等症状，ＣＲＰ升高，脑组织金黄色葡萄球菌培养阳性。 结论 本
文所建金黄色葡萄球菌脑膜炎小鼠模型可用于临床科研。
关键词：金黄色葡萄球菌；小鼠；脑膜炎
中图分类号：Ｒ９６５１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６３７６５（２０１８）０９０６１）系 指 软 脑 膜 的 弥 漫 性 炎 症 性 改 变。 临床上引发脑膜炎的途径主要有 ４种：直接感染、病灶感染、 血行感染和经由脑脊液通路所致感染，脑膜炎一旦发生，会导 致病情加重，病程延长 。 〔１，２〕 细菌性脑膜炎是一种特别严重 的疾病需及时治疗，特别是在 ＩＣＵ环境中，金黄色葡萄球菌特 别是耐药金 葡 菌 是 引 起 脑 膜 炎 的 主 要 致 病 菌 〔３５〕，如 果 治 疗 不及时，患者可能会在数小时内死亡或造成永久性的脑损伤。 本研究拟建立一种可用于临床科研的金黄色葡萄球菌脑膜炎 小鼠模型。