间充质干细胞特性 - 360文档中心

血液病患者骨髓间充质干细胞的增殖分化特点

ＡｓｒｃＯｂｃｉｅＴｖｓｇｔｔｅｐｏｆｒｔｎａｄｄｆｒｎｉｉｈｒｃｅｓｃｆｏｅｍａｒｗｍｓｎｈｍａｂｔｔａｊｔ：ｏｉｅｔａｅｈｒｌｅａｏｎｉｅｅｔｔｎｃａｔｔｓｎｒｅｅｅｙｌｅｖｎｉｉｉａｏａｒｉｏｂｉｏ
ｒｕｄｏｌｐｅｎｃｅ．ｔｉｉｇｗｔｒｈｔｏ，ｐａｍａｗｓｂｕｕｕｌｉｒｒｎｓｓＡｌｏｅｃｉｅｅｐｓｔｅｏｎｒｌｓｕｌｉＳａｎｎｈＷｉｔｅｉｉｇｍｅｈｄｌｓａｌｅｂｔｃｅｅｐｕｏｕ．ｌｆｅｌｗｒｏｉｖｎｗｅｔｈｓｉｆｒｃｄ仪ｎａｈｈｌｎｃｔｔｓｒｓｔｉａｈｃｓ．ｅｐｓｔｅｒｔｓｆＤ２ｎＤ４ｒｅｗｅ０ａｄ９％，ｏｉ一ｐｔａｅｅａｅａｅｅｔａｅｓａｎｉｅｃａｅＴｏｉｖａｅａｅｎｈｉｏＣ９ａｄＣ４ｗｅｅｂｔｅｎ９％ｎ５ｗｉｌａｉｅｐｏｐａｅｎｆ－ＭＡｂｕ５ａｄ３％ｒｓｅｔｅｙｉｖｒａｅ，ｈｒｌｅａｉｎｄｇｅｆＭＳｓｈｌａｋｎｈｓｈｔｓａｄＯ一ｅｌ．Ｓａｏｔ％ｎ０２ｅｐｃｉｌｅｅｙｃｓｓＴｅｐｏｉｒｔｅｒｅｏＣｗａｖｎ．ｆｏｄｆｒｎｎ４ｒｕｓａｄａｌｓｉｎｍｉａｈｇｅｈｎｔｏｅｆａｕｅｅｋｍｉｍｙｌｄｓｌｓｉｙｄｏｎｉｅｅｔｉｇｏｐ，ｎｐａｔａｅａｗｓｉｈｒｔａｓｏｃｔｌｕｅａ，ｆｃｈｅｏｙｐａｔｓｎｒｍｅａｄｃ

(完整)胎盘间充质干细胞的分离和培养 2016.07.21

胎盘间充质干细胞的分离，原代与继代培养及鉴定刘亭2016.7。

21目录前言 (2)1分离制备PMSC组织的选取 (4)2脐带，胎盘MSC的分离与纯化 (6)2.1胎盘组织的获取，存储与清洗 (6)2-2 脐带，胎盘MSC的分离及纯化方法 (7)3 原代培养和继代培养 (11)3—1培养基 (11)3-2培养密度 (12)3-3培养条件 (13)3—4换液 (13)3—5 传代培养 (13)3—6细胞形态与生长速度 (14)3—7 MSC的冻存与复苏： (14)4细胞表面抗原检测 (14)5生长曲线 (15)6细胞周期 (15)7分化潜能 (15)参考文献 (15)附件1不同实验室从脐带血,脐带和胎盘等各组织中分离MSC的方法.. 16脐带血 (16)脐带 (17)羊膜 (19)绒毛膜 (19)蜕膜层 (20)胎盘 (21)整体灌注法 (22)附件2 背景知识 (22)附件3 PMSC实验所需试剂 (23)前言干细胞（Stem cell，SC）是一种能够自我更新且未分化并可分化成两个或两个以上其它品系的细胞。

在一定的条件下，干细胞能够分化成为多种成熟细胞类型。

按照来源和分化潜能不同，干细胞可分为胚胎干细胞（Embryonic stem cell，ESC）和成体干细胞(Adult stem cell，ASC）两类。

胚胎干细胞来源于早期的胚泡和胚胎内层的细胞群，并且具有向3个胚层细胞分化的能力.但是胚胎干细胞应用时产生的免疫排斥、体内实验中引发肿瘤生成以及所涉及的伦理问题等影响并制约了临床应用。

成体干细胞形成于原肠胚形成后的胎儿和成体组织,早期研究认为，成体干细胞主要分化为其来源组织的细胞类型。

然而，近几年来的很多研究表明，成体干细胞具有能够分化成为除来源以外的其他胚层组织的能力。

间充质干细胞(Mesenchymal stem cell， MSC）又称为基质干细胞，是属于成体干细胞的一种，最早从骨髓中分离而来。

骨髓间充质干细胞的生物学特性

干细胞是近年来研究的热点．以干细胞工程为代表的现
代组织工程学则为组织器官的修复与替代提供了一个崭新的领域。组织工程学将体外分离、养的高浓度的功能楣关培
的活细胞种植于天然的人工合成的支架上，之植人人体后使
１骨髓ＭＳｓＣ的发现
骨髓组织除含有造血干细胞外，含有另一类干细还胞— — 骨髓问充质干细胞。早在一个多世纪前，国病理学德
家Ｃｈｈｉ就推测骨髓内存在非造血功能的干细胞。ｏｎｃｍｔ１６８９年Ｇｕｎ证实骨髓具有成骨能力。此后，到上个世ｏｊｏ直
３细胞表面标记
到目前为止，没有特异性的被发现。研究证明ＭＳｓ还Ｃ
步证实了骨髓ＭＳｓ的存在，创建了一种体外分离和培养Ｃ并
ＭＳｓ简便可行的方法，今仍是一种经典的方法，到Ｃ的至得广泛应用。８Ｏ年代Ｐｅｓｉｍａ和（ｗｎ将这种骨髓单核细胞ｒ）ｅ定义为骨髓问充质干细胞。自此有关ＭＳｓ的研究逐渐深Ｃ
养增殖、期传代不改变生物学特征、原性小、织修复能长抗组
力强等特征。骨髓问充质干细胞（ｓｎｈｍａｓｅｃｌ，ｍｅｅｃｙｌｔｍｅｓｌ

骨髓间充质干细胞研究与应用概况

骨髓间充质干细胞研究与应用概况于雷;高俊玲【摘要】骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells,BMSCs)是当下热点研究对象之一。

1867年德国病理学家Cohnheim教授[1]在研究创口愈合过程中发现骨髓中存在一种非造血系统的多潜能细胞,但研究因为条件原因未能深入。

后来有研究者[2]在20世纪60年代开展一系列开创性研究,发现从骨髓中分离得到长梭状、成纤维细胞样的细胞群,在塑料培养皿中呈集落样贴壁生长;1987年,又发现这种骨髓单核细胞可在一定的条件下分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞。

培养增殖二十代后仍保有其多向分化的潜能。

于是把这种多能细胞称为间充质干细胞(mesenchyma stem cell,MSC)。

【期刊名称】《华北理工大学学报：医学版》【年(卷),期】2018(020)002【总页数】5页(P164-168)【关键词】骨髓间充质干细胞;肺纤维化;缺血性脑卒中【作者】于雷;高俊玲【作者单位】[1]华北理工大学基础医学院,河北唐山063000;[1]华北理工大学基础医学院,河北唐山063000;【正文语种】中文【中图分类】R329.2骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells，BMSCs)是当下热点研究对象之一。

1867年德国病理学家Cohnheim教授[1]在研究创口愈合过程中发现骨髓中存在一种非造血系统的多潜能细胞，但研究因为条件原因未能深入。

后来有研究者[2]在20世纪60年代开展一系列开创性研究，发现从骨髓中分离得到长梭状、成纤维细胞样的细胞群，在塑料培养皿中呈集落样贴壁生长；1987年，又发现这种骨髓单核细胞可在一定的条件下分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞。

培养增殖二十代后仍保有其多向分化的潜能。

于是把这种多能细胞称为间充质干细胞(mesenchyma stem cell，MSC)。

间充质干细胞制备流程

间充质干细胞制备流程摘要：本文详尽阐述了间充质干细胞（MSCs）的制备流程，涵盖了从供者选择、血清学检测、活检、分离、生物样品处理、体外扩增、细胞鉴定、包装直至放行等一系列关键步骤。

间充质干细胞凭借其独特的生物学特性，在再生医学和细胞治疗领域展现了巨大的应用潜力。

文章伊始，便对间充质干细胞的基本特性及其临床应用前景进行了深入探讨，随后，对制备流程中的每个环节进行了细致的描述，包括了严格的技术要求和质量控制标准。

通过对这些流程的深入分析和详尽说明，本文意在为科研人员和临床医生提供一份科学、翔实的间充质干细胞制备指南，以期促进相关领域的研究进展和临床应用。

关键词：间充质干细胞；制备流程；再生医学；细胞治疗Abstract: This article comprehensively describes the preparation process of mesenchymal stem cells (MSCs), covering a series of key steps from donor selection, serological testing, biopsy, isolation, biosample processing, in vitro expansion, cell identification, packaging to release. Mesenchymal stem cells, with their unique biological characteristics, have shown great potential for application in the fields of regenerative medicine and cell therapy. At the beginning of the article, an in-depth discussion is conducted on the basic characteristics of mesenchymal stem cells and their clinical application prospects. Subsequently, each step in the preparation process is described in detail, including strict technical requirements and quality control standards. Through in-depth analysis and detailed explanation of these processes, this article aims to provide researchers and clinicians with a scientific and detailed guide for the preparation of mesenchymal stem cells, in the hope of promoting research progress and clinical applications in related fields.Keywords: Mesenchymal stem cells; Preparation process; Regenerative medicine; Cell therapy一、引言1.1 间充质干细胞的定义与特性间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells, MSCs）是一类具有独特生物学特性的多能干细胞，起源于胚胎发育的中胚层。

“生物药”--Wharton’s jelly源间充质干细胞

“生物药”--Wharton’s jelly源间充质干细胞高连如【摘要】干细胞治疗代表生物冶疗进入到了一个崭新的时代。

间充质干细胞是存在于胚胎或成体组织中来源于中胚层具有多向分化潜能的干细胞。

由于成体间充质干细胞的质量与数量自身缺陷,使之应用受到了很大限制。

Wharton’s jelly组织,是起始于胚胎发育第13天的胚外中胚层组织。

使用基因微阵列分析及功能分析,首次发现Wharton’s jelly源间充质干细胞( Wharton’s jelly derived mesenchymal stem cells,WJMSCs)高表达胚胎早期干性基因及心肌细胞分化早期特异转录因子,可分化心肌细胞等多种细胞。

进而,应用临床级WJMSCs经冠状动脉移植治疗ST抬高型急性心肌梗死患者的随机双盲临床试验,首次证明WJMSCs可明显改善心肌活力及心脏功能。

因此,WJMSCs具有极其重要益处；无伦理涉及,有强的分化潜能,无致瘤性；加之,WJMSCs可作为产品,在任何时候病情需要时立即应用。

为此,WJMSCs作为真正意义上的干细胞族,将最有希望成为具有应用前景的干细胞生物药。

%Cell-based treatment represents a new generation in the evolution of biological therapeutics. Mesenchymal stem cells ( MSCs) are mesoderm-derived multipotent stromal cells that reside in embryonic and adult tissues. The use of adult MSCs is limited by the quality and quantity of host stem cells. Wharton’s jelly of the umbilical cord originates from the extraembryonic and/or the embryonic mesoderm at day 13 of embryonic development. Using Affymetrix GeneChip microarray and functional network analyses, we found for the first time that Wharton’s jelly-derived MSCs ( WJMSCs) , except for their expression of stemness molecular markers in common with human ESCs ( hESCs) ,exhibited a high expression of early cardiac transcription factor genes and could be in-duced to differentiate into cardiomyocyte-like cells. Further, we demonstrated for the first time that intracoronary delivery of prepared clinical-grade WJMSCs was safe in treating patients with an ST-AMI attack by double-blind, randomized controlled trial and could significantly improve myocardial viability and heart function. It is therefore important to consider the benefits of WJMSCs, which are not ethically sensitive, have differentiation potential, and do not have the worrying issue of teratoma formation. Moreover, as the off the shelf product, WJMSCs can be applied immediately, and on de-mand. Thus, WJMSCs constitute a true stem cell population and are promising cells as a biological drug for stem cell-based therapies.【期刊名称】《转化医学杂志》【年(卷),期】2016(005)004【总页数】5页(P193-197)【关键词】间充质干细胞;Wharton’s jelly源间充质干细胞;生物药物【作者】高连如【作者单位】100048 北京，海军总医院心脏中心【正文语种】中文【中图分类】R329.2+4［Abstract］Cell-based treatment represents a new generation in the evolution of biological therapeutics.Mesenchymal stem cells（MSCs）are mesoderm-derived multipotent stromal cells that reside in embryonic and adult tissues.The use of adult MSCs is limited by the quality and quantity of host stem cells.Wharton’s jelly of the umbilical cord originates from the extraembryonic and/or the embryonic mesoderm at day 13 of embryonic ing Affymetrix GeneChip microarray and functional network analyses，we found for the first time that Wharton’s jelly-derived MSCs （WJMSCs），except for their expression of stemness molecular markers in common with human ESCs （hESCs），exhibited a high expression of early cardiac transcription factor genes and could be induced to differentiate into cardiomyocyte-like cells.Further，we demonstrated for the first time that intracoronary delivery of prepared clinical-grade WJMSCs was safe in treating patients with an STAMI attack by double-blind，randomized controlled trial and could significantly improve myocardial viability and heart function.It is therefore important to consider the benefits of WJMSCs，which are not ethically sensitive，have differentiation potential，and do not have the worrying issue of teratoma formation.Moreover，as the off the shelf product，WJMSCs can be applied immediately，and on demand.Thus，WJMSCs constitute a true stem cell population and are promising cells as a biological drug for stem cell-based therapies.［Key words］Mesenchymal stem cells（MSCs）；Wharton’s jelly-derived mesenchymal stem cells（WJMSCs）；Biological drug21世纪，人类疾病治疗模式在继现代医学——药物、手术、机械辅助等手段后，一个崭新的充满希望的新理念——细胞生物治疗理论诞生了，这将给人类带来什么样的变化与影响，如此快速之进展，正如Science、Nature中所表述的“即使站在世界最前沿的科学家也难以预料”［1-2］。

骨髓间充质干细胞的培养及生物学特性

ＬＵＪＡｉｔｌＩＩｑａｅ（ｄｎｎｄｃｌｎｅｓｙＭｕａｊｇＣｉａＭｕａｊｇＭｅｉａＵｉｒｉ，ｄｎｉｈｎｉｖｔｎ１７１）５０１
［ｂｔｃ］Ｏｊｃｖ：ａｂｎｍ／Ｗｍｓｎｈｍｌｔｌ（ＭＣ）ｅｏｔｄｕｕｄｎｒｅｔｉｅｉｔｔｏＡｓａｔｒｂｅｔｅＲｔｏｅｓＯｅｃｙａｓｍｃｌＢＳｓｗｒｉｌｅａｌｒｄｒｏｎｓｇｅｈｂ－ｉＴｅｅｅｓｅｓａｄｎｃｔｅｉｏｖｔａｅｉ
ｌｇｃｈｒｃｅｉｔｓａｄｏｅｒｄｍｉａｔｔｒｅｅｌｆｒｔｓｅｅｇｎｅｉｇａｄｇｎｎｉｅｒｇＭｅｈｄ：ＭＳｓｗｒｕｔｒｄｏｉａｃａａｔｒｉｎｆｒｐｅｏｎａｇｔｃｌｏｉｕｎｉｅｒｎｎｅｅｅｇｎｅｉ．ｌｓｃｎｓｓｎｔｏｓＢＣｅｅｃｌｕｅ
骨髓间充质干细胞的培养及生ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 学特性
刘嘉祺林
（牡丹江医学院
峰
李孟全
牡丹江１７１）５０１
黑龙江
【摘要】目的：分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞（ＭＣ）探讨其生物学特性，ＢＳｓ，为组织工程和基因工程提供优势靶细胞。
方法：骨髓细胞贴壁法进行ＢＳｓ全ＭＣ的原代培养，倒置相差显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测ＢＳｓ面抗原，Ｔ法ＭＣ表Ｍｒ检测ＢＳｓ殖能力，ＭＣ增并绘制生长曲线。结果：原代培养２ｈ４后看见少量贴壁细胞，为小圆形，ｄ可见梭形类似成纤维初起３后细胞，涡样生长，３— 代细胞均一性良好，代以后细胞逐渐有宽大梭形样变，呈漩传６ｌ０增殖减慢，偶有细胞漂浮、亡。流式死细胞仪检测传３代细胞Ｃ２表达率为９％，Ｄ４几乎无表达。生长曲线显示，３６ＢＳｓＤ９２Ｃ３传、代ＭＣ有较强的增殖能力，中传其６代细胞更为明显，１传０代细胞的增殖能力较前有所减弱。结论：成功从大鼠骨髓组织分离、培养ＢＳｓ纯度高，ＭＣ，生物学特性符合正常干细胞生长规律，组织工程和基因工程理想的靶细胞。是

间充质干细胞流程

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间充质细胞汇总

间充质干细胞研究进展【摘要】间充质干细胞是一种源于中胚层的早期干细胞，具有多向分化潜能，特定的条件下可分化为骨细胞、软骨细胞和神经细胞等，支持造血，具备低免疫原性和免疫调节活性，具有广泛的科研和临床应用价值。

本文针对间充质干细胞的研究进展和在临床医学应用进行综述。

【关键词】间充质干细胞、分化、免疫调节、应用1 引言间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）就是指在胚胎发育过程中形成的成体间叶组织（如骨髓基质、脂肪、胎盘和脐带等）中留存下来未分化的原始细胞。

MSCs主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓中含量最为丰富，少量存在于血液及其他组织中。

MSCs承担着支持造血系统细胞的使命，为造血干细胞的生长、分化及自我更新提供重要的微环境，还能分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、软骨细胞等多种细胞。

此外，MSCs还具有免疫调节功能，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制T细胞的增殖及其免疫反应，发挥免疫重建的功能。

MSCs来源方便，易于分离、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性。

MSCs的这些特性，使其在自身免疫性疾病治疗和细胞治疗等方面具有广阔的临床应用前景。

2 MSCs的来源最常见的MSCs来源是骨髓。

外周血、脂肪和胎盘等组织也可进行MSCs提取。

此外，越来越多新的MSCs来源也逐渐被人们发现，如图1，为MSCs的研究与应用提供了更丰富多样的供体。

a b图1.间充质干细胞的来源。

a ：骨髓MSCs的提取；b ：MSCs的新来源骨髓来源的MSCs来源方便,易于分离、扩增和纯化,多次传代扩增后仍具干细胞特性,无免疫排斥,体外基因转染率高并稳定高效表达外源基因，且能最终分化成骨、软骨和神经等组织。

越来越多的实验证明脐血能分离得到MSCs。

脐血MSCs的形态、免疫表型和生长方式等生物学特征与其他来源的MSCs大致类似[1]。

Cheng等从十字交叉韧带中发现了MSCs，可诱导分化为软骨细胞、脂肪细胞、骨细胞等。

真皮间充质干细胞生物学特性研究进展

Ｓ２（Ｄ１５．不表达血小板内皮细胞粘附分子ＨＣ０）（Ｄ１、ＤＣ３）Ｃ８和整合素ａ（Ｄ１ｃ。ｃＣ）１３２受体分子．啮齿类动物和人类的真皮间充质干细胞均表达透明质酸受体（Ｄ４，者也表达Ｃ４）前转铁蛋白受体（Ｄ１，者有报道不表达脂多糖受Ｃ７）后体（Ｄ１）Ｃ４和干细胞因子受体（Ｄ１７即ｃｋｔ。Ｃ１ —ｉ）
组织是机体内自我更新和再生修复速度最快的组
织之一．以往有研究发现鸟类的多种结缔组织包且
达内皮选择素（ — ｅｃｎＤ２：类真皮多能干Ｅｓｌｔ；６）人ｅｉＣ
细胞也表达间充质干细胞特异表型之一的ｅｄｇｉ／ｎｏｌｎ
祖细胞嘲
膜等多种组织中均证实有间充质干细胞的存在．本世纪初。们发现真皮组织中同样存在有间充质干人
细胞，皮间充质干细胞（真国外常称作Ｓｉ— ｅｖｄｋｎｄｒｅｉＰｅｕｓｒ即皮肤来源的祖细胞）自２０ｒｃｒｏｓ００年发现到现在不过数年［，相关研究已取得巨大进展，其１其１尤
括真皮中存在多能间充质干细胞．此人们推测真据皮组织中也可能存在有多能干细胞。基于此设想．
２０００年，ｏＴｍａ等则自小鼠皮肤中以细胞悬浮培养方式（细胞形成球形集落，养基由ＤＭＦ２添培ＭＥ／１加上Ｂ２、Ｇ一７ＥＦ和ｂＧＦＦ等组成）分离培养出皮肤

间充质干细胞外泌体的作用及其在口腔领域的研究进

间充质干细胞外泌体的作用及其在口腔领域的研究进外泌体是由多种细胞分泌的直径约30~100nm的微小囊泡，电镜下为双层磷脂分子包裹的扁形或球形小体，部分为杯状。

外泌体可传递生物信号分子包括蛋白质、mRNA、microRNA、DNA片段等，构成细胞间信息传递系统。

外泌体广泛存在并分布于各种体液，包括血液、尿液、唾液、脑脊液及羊水等，与多种疾病的发生发展密切相关。

外泌体具有低免疫原性、低毒性和高效性，能最大程度保留其所承载物质的活性。

间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）被认为是产生外泌体能力最旺盛的细胞之一，许多文献表明MSC来源的外泌体（MSC-exo）具有与MSC相似的特性，包括组织损伤修复、抗炎、免疫调节等，又能弥补MSC移植应用中的不足，因此其潜在的临床应用价值备受关注。

本文将对外泌体特性、MSC-exo的治疗应用及其在口腔领域的研究进展加以综述。

1.外泌体的生物学特性1）外泌体结构外泌体表面富含胆固醇、神经鞘磷脂、脂筏、神经酰胺及磷脂酰丝氨酸等脂类物质，主要内容物为蛋白质，一类是在外泌体中普遍存在并参与结构构成的蛋白质，包括微管蛋白、肌动蛋白和微丝结合蛋白等细胞骨架成分；膜转运和融合相关蛋白Rab、膜联蛋白Annexins、脂筏标记蛋白Flotillin；多囊泡胞内体产生相关蛋白Alix、TSG101；热休克蛋白Hsp70、Hsp90；四跨膜蛋白超家族CD63、CD9、CD81和CD82等。

另一类蛋白质与细胞来源有关，蛋白成分随来源细胞的不同而存在差异，如抗原呈递细胞分泌的外泌体质膜上含有MHC-Ⅰ与MHC-Ⅱ，以及共刺激蛋白CD80与CD86；来源于血小板的外泌体质膜上有血管性血友病因子和整合蛋白CD41。

除蛋白质外，外泌体还携带丰富的mRNA、miRNA、siRNA等生物信号分子。

外泌体形成外泌体主要由其来源细胞通过“内陷-融合-外排”的过程进行分泌，该过程受多种因素调节，如钙离子载体、结合蛋白浓度、磷脂酰肌醇激酶的活性与细胞应激状态等。

间充质干细胞与自身免疫性疾病

皮肤病与性病
２０１３年４月第３５卷第２期
ＪＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙａｎｄＶｅｎｅｒｅｏｌｏｇｙ，Ａｐｒ２０１３，Ｖｏ１．３５，ＮＯ．２
・综
述・
５
间充质干细胞与自身免疫性疾病
【收稿ＢＪ￣１２０１２－０８－０７ ※ 通讯作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｉｎａｆｕｐｉｎｇ＠ｈｏｔｍｍ１．ｃ０ｍ
８６
・论
著・
皮肤病与性病
２０１３年４月第３５卷第２期
ＪＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙａｎｄＶｅｎｅｒｅｏｌｏｙ，ｇＡｐｒ２０１３，Ｖｏ１．３５，ＮＯ．２
【关键词】自身免疫性疾病；间充质干细胞
中３．２文献标识码：Ａｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２ — １３１０．２０１３．０２．０１０
Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅｓ
ＹＵＸｉａｏ —ｘｕａｌｚ，ＦＵＰｉ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄａｒｙＡｆｉｌｆｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｆＫｏｕｎｍｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０１０１，Ｃｈｉｎａ）

脐带间充质干细胞生物学有效性及临床研究进展

脐带间充质干细胞生物学有效性及临床研究进展摘要：目的：研究脐带间充质干细胞(hMSCs)生物学有效性。

方法：本实验以PHA刺激淋巴细胞作为反应体系，观察hMSCs与淋巴细胞共培养时增殖的变化，培养体系分为阴性对照组、阳性对照组、实验组。

结果：在共培养接触体系中不同数量hMSCs对淋巴细胞增殖具有抑制作用，且hMSCs浓度越高，抑制作用越强，具有剂量依赖性。

结论：间充质干细胞在不同类型的炎症环境中，可由静息状态转变成激活状态，通过细胞间相互作用和分泌可溶性免疫调控因子，调节多种免疫细胞的增殖、分化、活化以及炎症因子的分泌功能。

MSC的免疫调控功能是其临床应用中重要的生物学有效性质量属性，对这一质量属性的有效评价，是指导MSC产品研发及临床应用中最为相关的质量控制内容之一。

近年来人们对MSC免疫调控功能的认识及其与临床应用的相关性，在此基础上提出了针对治疗性MSC产品免疫调控功能的评价策略，为在我国建立和完善MSC生物学有效性评价体系奠定基础。

关键词：脐带间充质干细胞；物学有效性；免疫调控功能前言：间充质干细胞是具有高度自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，在体外不同的诱导条件下可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌肉细胞以及神经细胞等，其免疫原性低，几乎影响免疫系统的所有细胞，具有免疫调节作用[1]。

但其免疫调节作用机制不明确，我们通过研究hMSCs对异体淋巴细胞增殖的影响，进一步探讨hMSCs的免疫调节作用的可能机制，为hMSCs应用于临床提供一定基础。

1材料与方法1.1 材料脐带间充质干细胞(hMSCs)和淋巴细胞（PBMC）均由生产提供。

间充质干细胞无血清培养基；牛血清(FBS)；10XPBS；灭菌注射用水；PHA（植物血凝素）；CFSE；无水DMSO；荧光抗体；48孔板；流式细胞仪。

1.2 方法1.2.1 hMSCs表型鉴定调整细胞浓度，使用荧光抗体进行标记，不加抗体作为空白对照；室温避光孵育，洗涤后检测。

人脐带间充质干细胞国际细胞治疗协会定义的标准

人脐带间充质干细胞国际细胞治疗协会定义的标准人脐带间充质干细胞国际细胞治疗协会定义的标准1. 引言人脐带间充质干细胞（Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells，WJ-MSCs）是一种被广泛研究和应用的干细胞资源。

作为这个领域的重要组成部分，人脐带间充质干细胞国际细胞治疗协会（International Society for Cell & Gene Therapy）制定了一系列标准来定义人脐带间充质干细胞，这些标准不仅对于科学研究具有重要意义，同时也对于临床应用和治疗效果的评估至关重要。

2. WHO 推行的初衷和原则人脐带间充质干细胞国际细胞治疗协会的标准旨在确保干细胞的质量和安全性，以便更好地应用于细胞治疗领域。

这些标准不仅限定了干细胞的来源和特性，还包括细胞处理和存储的要求等。

通过制定这些标准，国际细胞治疗协会为临床研究和细胞治疗的发展提供了指导。

3. 人脐带间充质干细胞定义的关键指标根据国际细胞治疗协会的定义，人脐带间充质干细胞可以通过以下几个关键指标来判断：a. 来源：主要来源于脐带的Wharton's jelly组织，这是一种丰富而易获得的干细胞来源。

b. 表面标记：表达特定的免疫表面标记，如CD73、CD90、CD105等，并且不表达CD34、CD45等造血干细胞标记。

c. 多向分化潜能：具有分化为多种细胞类型的潜能，如骨、脂肪、软骨等。

d. 免疫抑制能力：具有调节免疫功能，可以抑制免疫反应和自身免疫性疾病等。

e. 活力和增殖能力：繁殖能力强，能够长时间维持干细胞特性。

4. 临床应用和治疗效果评估根据人脐带间充质干细胞的定义标准，科研人员和临床医生可以更好地评估细胞治疗的效果和潜在风险。

这些标准也为细胞治疗产品的质量控制和监管提供了依据，确保细胞治疗的安全性和可行性。

5. 对于干细胞研究和应用的启示人脐带间充质干细胞国际细胞治疗协会定义的标准，不仅适用于人脐带间充质干细胞，也为其他干细胞类型的研究和应用提供了借鉴。

脐带间充质干细胞概述

脐带间充质干细胞概述医学实验班 70080103 王雪彤脐带是胎儿时期连接母体与胎儿的索状结构,其外被羊膜,内含2条脐动脉、1条脐静脉,在动静脉之间含有特殊的胚胎粘液样结缔组织———华尔通氏胶(Whartonps Jelly) ,从华尔通氏胶分离得到的基质细胞即为人脐带间充质干细胞(HUMSCs) 。

1人脐带间充质干细胞(HUMSCs) 的形貌分析:倒置显微镜下观察人脐带间充质干细胞贴壁生长, 为形态相对均一的梭形细胞,呈平行排列生长或旋涡状生长,低密度时较扁平, 密度增加趋于融合时细胞变细长。

扫描电镜下观察呈长条状纤维样, 细胞膜表面不光滑, 有小结节状物, 细胞无明显突起,细胞间无网络状连接。

透射电镜观察核大, 不规则, 核仁明显, 常染色质多, 异染色质少, 胞浆少。

胞质内细胞器较少, 以粗面内质网和线粒体为主, 内有大量游离核糖体, 部分细胞可见内质网肿胀。

——植块法培养获得的人脐带间充质干细胞(×200)例如三代细胞的形态学特征——人体脐带间充质干细胞离体培养后，培养至第三代。

第三代人脐带间充质干细胞以均一长梭形的细胞为主，细胞周边有较多的丝状伪足，见图1，2；并形成毗邻细胞之间的网状连接，见图3；细胞核较大，核膜清晰，含两三个核仁，核质比较小，见图4。

2人脐带间充质干细胞(HUMSCs) 的生物学特性：HUMSCs既非胚胎干细胞又非成体干细胞,是别于两者之间的一类新的多能间充质细胞,它们之间既有联系又有差异。

根据国际细胞疗法间充质与组织干细胞委员会( the Mesenchymal and Tissue Stem Cell Committee of the Internation2 al Society for Cellular The rapy)制定的最低标准, 脐带间充质干细胞（MSCs）需满足以下条件: 1)MSCs在标准培养条件下呈贴壁生长; 2 )MSCs表达CD105, CD73和CD90,不表达CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a 或CD19和HLA2DR; 3)MSCs在体外至少能向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞分化。

间充质干细胞与慢性阻塞性肺疾病的治疗

因其具有多向分化潜能、造血支持、免疫调控和自我复制等特
点而日益受到人们的关注。ＭＳＣ最初在骨髓中发现，们长他
充质干细胞在体外可诱导分化成肺上皮细胞，在炎症等因且
素的趋化下，外源的骨髓ＭＣ有向肺损伤部位汇集的现象。Ｓ
目前有新型研究表明，在治疗上，甲酸存在有效的干预作维
用，其不仅能促进肺脏肺泡的形成，能促进成熟肺脏损伤后还
的修复过程，进肺气肿相关的肺实质损害后的肺泡形促
成。
究的实验材料，比较理想的细胞和基因治疗的载体。问充是质干细胞凭借以上特点，为干细胞生物工程学提供一个很将
细胞、肌细胞等）外胚层（经纤维 … 等）内胚层（肝成、神和如
细胞、上皮细胞等）肺来源的多种组织细胞分化的能力，再加上其来源方便，于培养，逐步趋向于临床应用，在易故但
ＣＰＯＤ治疗上尚未有太多的报道。间充质干细胞的特性间充质干细胞（ｅｅｃｙａｍｓｎｈｍｌｓｍｃｌ，Ｃ）源于发育早期的中胚层的一类多能干细ｔｅｓＭＳ来ｅｌ
体外分离、培养人胚胎干细胞的成功，干细胞经适当诱导分化可发育为不同类型的细胞、组织和器官，成为移植供体的新来
源。作为 “ 子细胞 ” 干细胞可以通过细胞工程的方法在种的体外发育为各种特异性的细胞供移植和细胞替代所需，可并作为基因疗法的靶细胞用于治疗和研究。间充质干细胞是干

干细胞分型

干细胞分型干细胞是具有自我更新和分化能力的细胞，被广泛研究和应用于医学领域。

根据其来源和潜能，干细胞可以分为多种类型。

下面将介绍几种常见的干细胞分型。

1. 胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells，ESC）胚胎干细胞来源于早期胚胎，具有高度的可塑性和潜能。

它们可以分化为几乎所有类型的细胞，包括心脏细胞、神经细胞和肌肉细胞等。

因为其来源于胚胎，所以在伦理和道德层面上存在一定争议。

2. 成体干细胞（Adult Stem Cells）成体干细胞存在于人体各个组织和器官中，具有一定的分化潜能。

它们可以自我更新并分化为该组织或器官所需的细胞类型。

常见的成体干细胞包括骨髓干细胞、脂肪干细胞和神经干细胞等。

3. 诱导多能干细胞（Induced Pluripotent Stem Cells，iPSC）诱导多能干细胞是通过重编程成体细胞，使其重新获得类似胚胎干细胞的特性。

通过转录因子等技术手段，可以将成体细胞转化为具有干细胞特性的iPSC。

iPSC具有与ESC相似的分化潜能，但避免了胚胎使用的争议。

4. 间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，MSC）间充质干细胞存在于人体的骨髓、脂肪组织和其他组织中。

它们具有自我更新和多向分化的能力，可以分化为骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞等。

MSC在组织修复和再生方面具有广泛的应用前景。

干细胞的分型为科学研究和医学应用提供了重要的基础。

不同类型的干细胞具有不同的特性和应用潜能，可以用于治疗多种疾病和损伤。

然而，干细胞研究还面临许多挑战和争议，需要进一步的科学探索和伦理评估。

希望通过以上介绍，读者能够对干细胞分型有一个初步的了解，并认识到干细胞研究的重要性和潜力。

干细胞的发现和应用将为人类健康带来新的希望和可能。

我们期待未来能够更好地利用干细胞的优势，为人类的健康福祉作出更大的贡献。

骨髓间充质干细胞生物学特性的研究

骨髓中可能存在间质细胞的
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