抗肿瘤药物的筛选方法 PPT
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*腹水应为白色浓稠液体，若为黄色或红色应弃去
给药及药效评价：
动物分组：随机分五组（溶剂对照组、阳性药组、高、中、低 给药组）；每组8-10只。
药品制备：药品溶解生理盐水或PBS等缓冲盐溶液 给药方式：连续给药；1-2次/天;（ig,ip,iv）14天以上 评价指标：观察记录荷瘤小鼠的存活天数（30天）
给药及药效评价：
给药方式：连续给药；1-2次/天;（ig,ip,iv）10-12天
评价指标：记录小鼠的体重变化。12天后，处死小
鼠，拨瘤称重（对照组瘤重1 g左右）。
取脾脏和胸腺称重，并测定脾细胞数目
数据处理：
抑瘤率(%)＝
对照组瘤重－治疗组瘤重
对照组瘤重
x100%
抑瘤率>30% 认为有效
２）人癌异种移植模型
肿瘤移植方法：
1）无菌操作 2）接种部位：右前肢腋下 3）癌块的制备及接种
接种7~10天小鼠处死，酒精消毒，切开皮肤取 出肿瘤块，置于生理盐水中，冰块上保存。剪碎瘤 块成2-3 mm3的小块或组织块匀浆成细胞悬液，接 种到右前肢腋下。5天左右，小鼠出现瘤块即为造模 成功。
7天后对照组20%小鼠肿瘤小于400 mg或大于2g，实验失败
甲氨蝶呤、氟脲嘧啶、阿糖胞苷
❖ 抗肿瘤抗生素
柔红霉素、阿霉素、丝裂霉素、多柔比星
❖ 铂类化合物
顺铂、卡铂、奥沙利铂
❖ 抗肿瘤植物药
长春新碱、依托泊苷、替尼泊苷、紫杉醇
❖ 激素类 ❖ 血管新生抑制剂
贝伐珠单抗注射液、舒尼替尼、索拉非尼
化疗药物的主要不良反应
骨髓抑制（血细胞减少） 胃肠道反应（恶心、呕吐、食欲不振等） 全身反应（脱发、发热、皮疹） 对各器官影响 （心脏毒性、肝脏毒性、神经毒性） 泌尿道毒性（血尿、蛋白尿、尿酸性肾病） 局部静脉炎 致畸、致突变、致癌
药效评价：
评价指标：记录小鼠的体重变化。结束治疗后，处
死小鼠，拨瘤称重（对照组瘤重1 g左
右）。取脾脏称重，并测定脾细
胞数目。
数据处理：
抑瘤率(%)＝对照组肿瘤体积－治疗组肿瘤体积
对照组肿瘤体积
x100%
抑瘤率>30% 认为有效
抗肿瘤谱
❖ Taxol
（卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、头颈癌、食管癌、 淋巴瘤）
（7天死亡率≥20%或20%动物存活超过4周，实验失败 对照组存活时间14-20天）
数据处理： 生命延长率(%)＝ 治疗组存活天数－对照组存活天数
x100% 对照组存活天数
非腹腔给药生命延长率>50% 腹腔给药>75%
２. 实体瘤动物模型
1）动物移植性肿瘤
国内外推荐模型
常用小鼠、大鼠实体瘤动物模型表（细胞株及动物）
１．非实体瘤动物模型
常用小鼠腹水瘤动物模型表（细胞株及动物） 国内外推荐模型
ຫໍສະໝຸດ Baidu
肿瘤移植方法：
1）无菌操作 2）接种部位：腹腔 3）癌细胞悬液的制备及接种
接种7~10天小鼠处死，酒精消毒，穿过腹 部肌肉吸取腹水2~4 mL*，置冰块上保存。细胞 计数后，PBS稀释制备1x107/0.1 mL细胞浓度悬 液，每只小鼠注射0.2 mL 肿瘤细胞悬液注射到 腹腔。5天左右，小鼠出现腹水即为造模成功。
细胞株的选择
１. 抑制肿瘤细胞增殖实验
A) 噻唑兰实验（MTT）
原理：
活细胞线粒体中脱氢酶能够代谢还原黄色的MTT，生 成蓝紫色不溶于水的甲臜（Formazan）。甲臜的多少可 以用酶标仪在570 nm 处进行测定。甲臜生成量与活细胞 数成正比，因此可根据光密度OD值推测出活细胞的数目。
细胞：人源肝癌，胃癌，肺癌，结肠癌等肿瘤细胞 动物： 裸鼠 （nude mice）
T淋巴功能缺陷 先天性无胸腺小鼠
11号染色体上隐性 突变裸基因（nu）
特点： 1）裸体，行似无毛； 2）不能执行正常T细胞功能，免疫力低下 3）B细胞功能正常，NK细胞活性高
肿瘤移植和给药方法：
1）无菌操作 2）接种部位：背部 3）细胞悬液的制备及接种
脑血管病
心脏病
肿瘤 25%
2005年全球常见疾病死亡率
2009年中国居民主要疾病死亡率及死亡原因构成
中国每年新增肿瘤病人
(中国卫生年鉴)
200万人，死亡130-
170多万人左右，目前
全国肿瘤患者总数约
450万人，并以每年3%
的速度递增。肿瘤已经
成为中国公民的头号杀
手，每年因恶性肿瘤而
死亡的人口占到总死亡
率的22%。
２００9年中国常见恶性肿瘤的死亡率
我国居民常见 癌症死亡率:
胃癌列肿瘤 死亡率首位;
其次肝癌、 肺癌、食管癌、 结直肠癌等。
2. 肿瘤的治疗方法
外科手术治疗 放射线治疗 化学药物治疗
大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持安静
3. 常用的化疗药物
❖ 烷化剂
环磷酰胺、异环磷酰胺
❖ 抗代谢药物
抗肿瘤药物的筛选方法 PPT
一、导论 二、整体动物水平的筛选 三、细胞水平的筛选 四、酶水平的筛选 五、展望
一、导论
1. 肿瘤发病率和死亡率
全球每年癌症 新发病例都在1200 万以上，因癌症死
其他 肺病
亡人数达760多万， 消化系统病 到2010年底全球肿
瘤病人总数已逾
5500万人 (WHO)。
4. 天然产物与抗肿瘤药物
❖ 天然产物在新药及新药先导化合物的发现中起着不 可替代的作用，是结构新颖和作用独特的抗肿瘤化 合物的重要来源。
❖ 美国国立癌症研究所（NCI）从1955年开始从天然 产物中筛选抗肿瘤药物。
❖ 目前世界上被批准广泛使用的抗肿瘤药物中,５０％ 以上来源于天然产物。
二、整体动物水平的筛选
❖ 5-Fu
（乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、宫颈癌、膀 胱癌、前列腺癌和头颈部肿瘤）
❖ ADM
（ 乳腺癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤和皮肤癌）
沙蟾毒精的体内抗肿瘤作用
(Carcinogenesis, 2013, 34:1331)
三、细胞水平的筛选
1. 抑制肿瘤细胞增殖实验 2. 诱导肿瘤细胞分化实验 3. 诱导肿瘤细胞凋亡实验 4. 抗肿瘤血管生成实验 5. 肿瘤多药耐药性逆转实验 6. 抗肿瘤侵袭和转移实验 7. 诱导肿瘤细胞自噬实验
细胞悬液浓度1x108/mL，接种0.1mL到背部。7天左 右，瘤块达到50 mm3体积即为造模成功，开始给药。
4）给药时间：根据药效确定，一般12-60天。
阳性药
5-Fu （5-氟尿嘧啶） ADM （阿霉素） Taxol（紫杉醇） CTX（环磷酰胺）
选择性对照药
推荐剂量：1-20 mg/kg 给药方式：与测试药物相同;常隔天给药
给药及药效评价：
动物分组：随机分五组（溶剂对照组、阳性药组、高、中、低 给药组）；每组8-10只。
药品制备：药品溶解生理盐水或PBS等缓冲盐溶液 给药方式：连续给药；1-2次/天;（ig,ip,iv）14天以上 评价指标：观察记录荷瘤小鼠的存活天数（30天）
给药及药效评价：
给药方式：连续给药；1-2次/天;（ig,ip,iv）10-12天
评价指标：记录小鼠的体重变化。12天后，处死小
鼠，拨瘤称重（对照组瘤重1 g左右）。
取脾脏和胸腺称重，并测定脾细胞数目
数据处理：
抑瘤率(%)＝
对照组瘤重－治疗组瘤重
对照组瘤重
x100%
抑瘤率>30% 认为有效
２）人癌异种移植模型
肿瘤移植方法：
1）无菌操作 2）接种部位：右前肢腋下 3）癌块的制备及接种
接种7~10天小鼠处死，酒精消毒，切开皮肤取 出肿瘤块，置于生理盐水中，冰块上保存。剪碎瘤 块成2-3 mm3的小块或组织块匀浆成细胞悬液，接 种到右前肢腋下。5天左右，小鼠出现瘤块即为造模 成功。
7天后对照组20%小鼠肿瘤小于400 mg或大于2g，实验失败
甲氨蝶呤、氟脲嘧啶、阿糖胞苷
❖ 抗肿瘤抗生素
柔红霉素、阿霉素、丝裂霉素、多柔比星
❖ 铂类化合物
顺铂、卡铂、奥沙利铂
❖ 抗肿瘤植物药
长春新碱、依托泊苷、替尼泊苷、紫杉醇
❖ 激素类 ❖ 血管新生抑制剂
贝伐珠单抗注射液、舒尼替尼、索拉非尼
化疗药物的主要不良反应
骨髓抑制（血细胞减少） 胃肠道反应（恶心、呕吐、食欲不振等） 全身反应（脱发、发热、皮疹） 对各器官影响 （心脏毒性、肝脏毒性、神经毒性） 泌尿道毒性（血尿、蛋白尿、尿酸性肾病） 局部静脉炎 致畸、致突变、致癌
药效评价：
评价指标：记录小鼠的体重变化。结束治疗后，处
死小鼠，拨瘤称重（对照组瘤重1 g左
右）。取脾脏称重，并测定脾细
胞数目。
数据处理：
抑瘤率(%)＝对照组肿瘤体积－治疗组肿瘤体积
对照组肿瘤体积
x100%
抑瘤率>30% 认为有效
抗肿瘤谱
❖ Taxol
（卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、头颈癌、食管癌、 淋巴瘤）
（7天死亡率≥20%或20%动物存活超过4周，实验失败 对照组存活时间14-20天）
数据处理： 生命延长率(%)＝ 治疗组存活天数－对照组存活天数
x100% 对照组存活天数
非腹腔给药生命延长率>50% 腹腔给药>75%
２. 实体瘤动物模型
1）动物移植性肿瘤
国内外推荐模型
常用小鼠、大鼠实体瘤动物模型表（细胞株及动物）
１．非实体瘤动物模型
常用小鼠腹水瘤动物模型表（细胞株及动物） 国内外推荐模型
ຫໍສະໝຸດ Baidu
肿瘤移植方法：
1）无菌操作 2）接种部位：腹腔 3）癌细胞悬液的制备及接种
接种7~10天小鼠处死，酒精消毒，穿过腹 部肌肉吸取腹水2~4 mL*，置冰块上保存。细胞 计数后，PBS稀释制备1x107/0.1 mL细胞浓度悬 液，每只小鼠注射0.2 mL 肿瘤细胞悬液注射到 腹腔。5天左右，小鼠出现腹水即为造模成功。
细胞株的选择
１. 抑制肿瘤细胞增殖实验
A) 噻唑兰实验（MTT）
原理：
活细胞线粒体中脱氢酶能够代谢还原黄色的MTT，生 成蓝紫色不溶于水的甲臜（Formazan）。甲臜的多少可 以用酶标仪在570 nm 处进行测定。甲臜生成量与活细胞 数成正比，因此可根据光密度OD值推测出活细胞的数目。
细胞：人源肝癌，胃癌，肺癌，结肠癌等肿瘤细胞 动物： 裸鼠 （nude mice）
T淋巴功能缺陷 先天性无胸腺小鼠
11号染色体上隐性 突变裸基因（nu）
特点： 1）裸体，行似无毛； 2）不能执行正常T细胞功能，免疫力低下 3）B细胞功能正常，NK细胞活性高
肿瘤移植和给药方法：
1）无菌操作 2）接种部位：背部 3）细胞悬液的制备及接种
脑血管病
心脏病
肿瘤 25%
2005年全球常见疾病死亡率
2009年中国居民主要疾病死亡率及死亡原因构成
中国每年新增肿瘤病人
(中国卫生年鉴)
200万人，死亡130-
170多万人左右，目前
全国肿瘤患者总数约
450万人，并以每年3%
的速度递增。肿瘤已经
成为中国公民的头号杀
手，每年因恶性肿瘤而
死亡的人口占到总死亡
率的22%。
２００9年中国常见恶性肿瘤的死亡率
我国居民常见 癌症死亡率:
胃癌列肿瘤 死亡率首位;
其次肝癌、 肺癌、食管癌、 结直肠癌等。
2. 肿瘤的治疗方法
外科手术治疗 放射线治疗 化学药物治疗
大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持安静
3. 常用的化疗药物
❖ 烷化剂
环磷酰胺、异环磷酰胺
❖ 抗代谢药物
抗肿瘤药物的筛选方法 PPT
一、导论 二、整体动物水平的筛选 三、细胞水平的筛选 四、酶水平的筛选 五、展望
一、导论
1. 肿瘤发病率和死亡率
全球每年癌症 新发病例都在1200 万以上，因癌症死
其他 肺病
亡人数达760多万， 消化系统病 到2010年底全球肿
瘤病人总数已逾
5500万人 (WHO)。
4. 天然产物与抗肿瘤药物
❖ 天然产物在新药及新药先导化合物的发现中起着不 可替代的作用，是结构新颖和作用独特的抗肿瘤化 合物的重要来源。
❖ 美国国立癌症研究所（NCI）从1955年开始从天然 产物中筛选抗肿瘤药物。
❖ 目前世界上被批准广泛使用的抗肿瘤药物中,５０％ 以上来源于天然产物。
二、整体动物水平的筛选
❖ 5-Fu
（乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、宫颈癌、膀 胱癌、前列腺癌和头颈部肿瘤）
❖ ADM
（ 乳腺癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤和皮肤癌）
沙蟾毒精的体内抗肿瘤作用
(Carcinogenesis, 2013, 34:1331)
三、细胞水平的筛选
1. 抑制肿瘤细胞增殖实验 2. 诱导肿瘤细胞分化实验 3. 诱导肿瘤细胞凋亡实验 4. 抗肿瘤血管生成实验 5. 肿瘤多药耐药性逆转实验 6. 抗肿瘤侵袭和转移实验 7. 诱导肿瘤细胞自噬实验
细胞悬液浓度1x108/mL，接种0.1mL到背部。7天左 右，瘤块达到50 mm3体积即为造模成功，开始给药。
4）给药时间：根据药效确定，一般12-60天。
阳性药
5-Fu （5-氟尿嘧啶） ADM （阿霉素） Taxol（紫杉醇） CTX（环磷酰胺）
选择性对照药
推荐剂量：1-20 mg/kg 给药方式：与测试药物相同;常隔天给药