鸡传染性贫血病毒广西株全基因组的克隆与序列分析
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Ｄ ＮＡ 抽提 ， Ｐ Ｒ检测 证实 含有 Ｃ ＡＶ。 用 Ｃ Ｉ
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 样 品 来源 与处理 Ｃ ＡＶ（ Ｃ ６ ８ １株 由 ． ． Ｉ ＧＸ ０ ０ ２ ） 广 西兽 医研 究 所 分 离 自某 公 司 ３ 日龄 的三 黄 鸡 。 ８
１２ ２ 病毒 分 离鉴定 ．．
将经 参考谢 芝勋 建立 的 Ｃ— Ｉ
ＡＶ Ｐ Ｒ检 测方 法进行 鉴定 Ｅ 为 阳性 的病 鸡 骨髓 悬 －Ｃ ４ ］ 液 ， 别用 氯仿 和 乙醚处 理 ， 去可 能存 在 的其 他 囊 分 除 膜病 毒后 卵黄囊 接 种 ７日龄 Ｓ Ｆ鸡胚 ， 部 分 刚 出 Ｐ 取 壳雏 鸡 的骨髓 和脾 脏 的悬 液 作 为 种 毒［ 置 一７ ℃ ５ Ｏ 保存 备用 ， 另取 适 量 冻 溶 ３次后 取 上 清 供 Ｃ ＡＶ 总 Ｉ
关键词 ： 鸡传 染性 贫血 病毒 ； 全基 因组 ； 克隆 ； 列 分析 序
中 图分 类 号 ：８ ２ ６ ９ ２ ￥ ５ ． １ ￥ ５ ． ５ ． ；８ ８ ３ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：ｏ ７５ ３ （０ １ Ｏ－０ ９０ ｌ ０—Ｏ ８ ２ ｌ ）４０ １—４
鸡 传 染 性 贫 血 （ ｈｃ ｅ ｎｅｔ ｕ ｎ ｍｉ， Ｃ ｉ ｎ ｉｆｃｉ ｓ ａ ｅ ａ ｋ ｏ
心 ５ｍｉ ， ｎ 收集 上 清液 ６ ０ ５ Ｌ， Ｃ ＡＶ 总 ＤＮＡ 抽 供 Ｉ
提。
与 国内外 已发表 的 ３ １株 Ｃ ＡＶ 全 基 因核 苷 酸序 列 Ｉ 及 其推 导的 氨 基 酸 序 列 进 行 比较 分 析 ， 广 西 Ｃ － 为 Ｉ
ＡＶ 的研究 奠定 基础 。
司产 品 ； 苄 青 霉 素 为 Ｐ ｏ ｇ 氨 ｒｍｅ ａ公 司 产 品 ； ０ ｐ １０ｂ
Ｄ ａ ｄ ｒ为北 京 天 为 时代 科 技 有 限公 司 产 品 ； ＮＡ ｌｄ ｅ
Ｐ Ｒ 仪 为 美 国 Ｐ ｒ ｉ ｌ ｒＣ ｔｓ公 司 生 产 的 Ｃ ｅｋｎ Ｅ ｍｅ ｅｕ
Ｐ ９０ Ｅ ６ ０型 。 １ ２ 方 法 ．
２２ ２ ９ 个核 苷 酸 ， 有 ３个互 相 重叠 的开放 阅读框 （ Ｆ 。序 列 分析 表 明 ， Ｃ ＡＶ 分 离株 与 国 内外 其他 ３ 含 ＯＲ ） 本 Ｉ １
个 Ｃ ＡＶ 毒株 比较 核 苷酸 的 同源性 在 ９ ． ～ ９ ． 之 间 ， 导氨 基 酸 的 同源 性在 ８ ． ～９ ． 之 间 。 ｌ ６１ ８５ 推 ９８ ４２ 全基 因 系统发 育进化 树 分析 显 示 ， 西分 离株和 中国 的 Ｔ Ｂ ４ 广 Ｊ Ｄ Ｏ株 、 Ｆ Ｌ ４株 都 处 于一 个 分 支， 它们 的 亲缘 关 系较 近 ， 而与 美 国的 ９ Ｄ０ ０ ３分 离株及 中国的 ＨＡ４分 离株 的亲缘 关 系较 远 。 ８ ６７
动 物 医学进展 。０ ｌ ３ （ ） １ —２ ２ １ ， ２ ４ ：９２
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｃｎｅ ｏｇ ｅ ｓｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄｉｉ
鸡传 染 性 贫 血 病 毒 广 西株 全 基 因组 的 克 隆 与序 列 分 析
邓 显 文 ， 芝 勋 ， 丽基 ， 谢 谢 刘加 波 ， 志 勤 ， 谢 庞耀 珊
（ 西兽 医研 究 所 ， 西 南 宁 ５ ００ ） 广 广 ３ ０ １
摘 要 ： 了解鸡传 染性 贫 血病毒 （ Ｉ 为 Ｃ ＡＶ） 西分 离株 全基 因变异 情 况 ， 广 设计 ３对特 异 性 引物 ， Ｃ ＡＶ 对 Ｉ
广 西分 离株（ Ｃ ６ ８ １ 的全 基 因进 行 Ｐ Ｒ扩 增 、 隆 和序 列 分析 。结 果 显 示 ， 西 分 离株 的 全 基 因为 ＧＸ Ｏ Ｏ ２ ） Ｃ 克 广
１ １ ２ 试 剂与仪 器 大 肠 埃希 菌 ＤＨ５ ．． ａ由广 西 兽 医研 究所 兽 wk.baidu.com分 子 生 物 技术 实 验 室 保 存 ； 隆 载 体 克
Ｃ Ａ） 由鸡传 染 性 贫 血 病 毒 （ Ｉ Ｉ 是 Ｃ ＡＶ） 起 的 ， 引 引 可
起 ３周龄 以 内的鸡严 重 贫血 、 出血 ， 骨髓 和 淋 巴器官 ｐ ＭＤ１一 Ｃ ８Ｔ Ｐ Ｒ试 剂盒 为宝 生 物 工 程 （ 连 ） 限公 大 有 严重 萎缩［ 。随着鸡 年龄 增长 对 Ｃ ＡＶ 的抵 抗力 增 司产 品 ； Ｂ培养 基 和 凝胶 回收 试 剂 盒 为 ＧＩ Ｃ １ ］ Ｉ Ｌ Ｂ Ｏ公 强 ， 年鸡 感染后 不 出现 任何 临床 症 状 ， 成 但种 鸡 可将 ＣＡ 垂直传播给其子代 ， ＩＶ 引起 子 代 发 生 传 染 性 贫 血； 临床上 Ｃ ＡＶ 感染 鸡群 常伴 发或 继发 其 他疾 病 ， Ｉ 甚 至 引起疫 苗免 疫失 败 等 。近 几 年 的流 行病 学调 查 表 明 ， ＡＩ 在我 国鸡 群 中的感 染 非 常普 遍 ， 染 率 Ｃ Ｖ 感 高 达 ４ ～ ９ ［３， 致 了巨 大经济 损失 。 Ｏ ６ ２ 导 － ］
１ ２ １ 样 品处 理 无 菌采 取 ２ｇ可 疑 传染 性 贫 血 ． ． Ｃ Ｖ 可在鸡 群 中长 期 存 在 ， ＡＩ 引起 免 疫 抑 制 ， 常 病 待检 鸡 的胸腺 、 骨髓 、 、 等组 织 ， 于乳 钵 或玻 肝 脾 置 导 致疫 苗免 疫失 败 ， 大 了对 该 病 两 防和 控 制 的 困 璃研 磨 器 中 ， 加 加入 无 菌 的 Ｐ Ｓ充 分 研磨 ， 集 组 织 Ｂ 收 难 。为 了解 Ｃ ＡＶ 广 西 野 毒 株 的 变 异 情 况 ， 研 究 Ｉ 本 对 １ 广西 分离株 进行 全基 因 扩增 、 隆及 测 序 ， 株 克 并 悬 液 于 １ ５ｍＬ离 心 管 ， ． 冻溶 ３次 ， ２５ ０ｒ ｍｉ 以 ０ ／ ｎ离
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 样 品 来源 与处理 Ｃ ＡＶ（ Ｃ ６ ８ １株 由 ． ． Ｉ ＧＸ ０ ０ ２ ） 广 西兽 医研 究 所 分 离 自某 公 司 ３ 日龄 的三 黄 鸡 。 ８
１２ ２ 病毒 分 离鉴定 ．．
将经 参考谢 芝勋 建立 的 Ｃ— Ｉ
ＡＶ Ｐ Ｒ检 测方 法进行 鉴定 Ｅ 为 阳性 的病 鸡 骨髓 悬 －Ｃ ４ ］ 液 ， 别用 氯仿 和 乙醚处 理 ， 去可 能存 在 的其 他 囊 分 除 膜病 毒后 卵黄囊 接 种 ７日龄 Ｓ Ｆ鸡胚 ， 部 分 刚 出 Ｐ 取 壳雏 鸡 的骨髓 和脾 脏 的悬 液 作 为 种 毒［ 置 一７ ℃ ５ Ｏ 保存 备用 ， 另取 适 量 冻 溶 ３次后 取 上 清 供 Ｃ ＡＶ 总 Ｉ
关键词 ： 鸡传 染性 贫血 病毒 ； 全基 因组 ； 克隆 ； 列 分析 序
中 图分 类 号 ：８ ２ ６ ９ ２ ￥ ５ ． １ ￥ ５ ． ５ ． ；８ ８ ３ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：ｏ ７５ ３ （０ １ Ｏ－０ ９０ ｌ ０—Ｏ ８ ２ ｌ ）４０ １—４
鸡 传 染 性 贫 血 （ ｈｃ ｅ ｎｅｔ ｕ ｎ ｍｉ， Ｃ ｉ ｎ ｉｆｃｉ ｓ ａ ｅ ａ ｋ ｏ
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与 国内外 已发表 的 ３ １株 Ｃ ＡＶ 全 基 因核 苷 酸序 列 Ｉ 及 其推 导的 氨 基 酸 序 列 进 行 比较 分 析 ， 广 西 Ｃ － 为 Ｉ
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司产 品 ； 苄 青 霉 素 为 Ｐ ｏ ｇ 氨 ｒｍｅ ａ公 司 产 品 ； ０ ｐ １０ｂ
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２２ ２ ９ 个核 苷 酸 ， 有 ３个互 相 重叠 的开放 阅读框 （ Ｆ 。序 列 分析 表 明 ， Ｃ ＡＶ 分 离株 与 国 内外 其他 ３ 含 ＯＲ ） 本 Ｉ １
个 Ｃ ＡＶ 毒株 比较 核 苷酸 的 同源性 在 ９ ． ～ ９ ． 之 间 ， 导氨 基 酸 的 同源 性在 ８ ． ～９ ． 之 间 。 ｌ ６１ ８５ 推 ９８ ４２ 全基 因 系统发 育进化 树 分析 显 示 ， 西分 离株和 中国 的 Ｔ Ｂ ４ 广 Ｊ Ｄ Ｏ株 、 Ｆ Ｌ ４株 都 处 于一 个 分 支， 它们 的 亲缘 关 系较 近 ， 而与 美 国的 ９ Ｄ０ ０ ３分 离株及 中国的 ＨＡ４分 离株 的亲缘 关 系较 远 。 ８ ６７
动 物 医学进展 。０ ｌ ３ （ ） １ —２ ２ １ ， ２ ４ ：９２
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鸡传 染 性 贫 血 病 毒 广 西株 全 基 因组 的 克 隆 与序 列 分 析
邓 显 文 ， 芝 勋 ， 丽基 ， 谢 谢 刘加 波 ， 志 勤 ， 谢 庞耀 珊
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摘 要 ： 了解鸡传 染性 贫 血病毒 （ Ｉ 为 Ｃ ＡＶ） 西分 离株 全基 因变异 情 况 ， 广 设计 ３对特 异 性 引物 ， Ｃ ＡＶ 对 Ｉ
广 西分 离株（ Ｃ ６ ８ １ 的全 基 因进 行 Ｐ Ｒ扩 增 、 隆 和序 列 分析 。结 果 显 示 ， 西 分 离株 的 全 基 因为 ＧＸ Ｏ Ｏ ２ ） Ｃ 克 广
１ １ ２ 试 剂与仪 器 大 肠 埃希 菌 ＤＨ５ ．． ａ由广 西 兽 医研 究所 兽 wk.baidu.com分 子 生 物 技术 实 验 室 保 存 ； 隆 载 体 克
Ｃ Ａ） 由鸡传 染 性 贫 血 病 毒 （ Ｉ Ｉ 是 Ｃ ＡＶ） 起 的 ， 引 引 可
起 ３周龄 以 内的鸡严 重 贫血 、 出血 ， 骨髓 和 淋 巴器官 ｐ ＭＤ１一 Ｃ ８Ｔ Ｐ Ｒ试 剂盒 为宝 生 物 工 程 （ 连 ） 限公 大 有 严重 萎缩［ 。随着鸡 年龄 增长 对 Ｃ ＡＶ 的抵 抗力 增 司产 品 ； Ｂ培养 基 和 凝胶 回收 试 剂 盒 为 ＧＩ Ｃ １ ］ Ｉ Ｌ Ｂ Ｏ公 强 ， 年鸡 感染后 不 出现 任何 临床 症 状 ， 成 但种 鸡 可将 ＣＡ 垂直传播给其子代 ， ＩＶ 引起 子 代 发 生 传 染 性 贫 血； 临床上 Ｃ ＡＶ 感染 鸡群 常伴 发或 继发 其 他疾 病 ， Ｉ 甚 至 引起疫 苗免 疫失 败 等 。近 几 年 的流 行病 学调 查 表 明 ， ＡＩ 在我 国鸡 群 中的感 染 非 常普 遍 ， 染 率 Ｃ Ｖ 感 高 达 ４ ～ ９ ［３， 致 了巨 大经济 损失 。 Ｏ ６ ２ 导 － ］
１ ２ １ 样 品处 理 无 菌采 取 ２ｇ可 疑 传染 性 贫 血 ． ． Ｃ Ｖ 可在鸡 群 中长 期 存 在 ， ＡＩ 引起 免 疫 抑 制 ， 常 病 待检 鸡 的胸腺 、 骨髓 、 、 等组 织 ， 于乳 钵 或玻 肝 脾 置 导 致疫 苗免 疫失 败 ， 大 了对 该 病 两 防和 控 制 的 困 璃研 磨 器 中 ， 加 加入 无 菌 的 Ｐ Ｓ充 分 研磨 ， 集 组 织 Ｂ 收 难 。为 了解 Ｃ ＡＶ 广 西 野 毒 株 的 变 异 情 况 ， 研 究 Ｉ 本 对 １ 广西 分离株 进行 全基 因 扩增 、 隆及 测 序 ， 株 克 并 悬 液 于 １ ５ｍＬ离 心 管 ， ． 冻溶 ３次 ， ２５ ０ｒ ｍｉ 以 ０ ／ ｎ离