戊二醛固定液的配制

创作编号：BG7531400019813488897SX

创作者：别如克*

Step 1:

0.2M磷酸缓冲液的配制：

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磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6克

磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29克

双蒸馏水加至500毫升

pH调至7.4

Step 2:

戊二醛固定液的配制：

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25% 戊二醛1ml

双蒸馏水4ml

0.2mol/L磷酸缓冲液5ml

戊二醛最终浓度 2.5%

pH值7.3-7.4

戊二醛固定剂的配方：

（a）磷酸缓冲液的配方：

A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液：

Na2HPO4·9H2O 17.81 克

或：Na2HPO4·7H2O 26.83 克

或：Na2HPO4·7H2O 35.82克

加双蒸水至500毫升

B 液：0.2M磷酸二氢钠贮备液

NaH2PO4·H2O 13.8 克

或：NaH2PO4·2H2O 15.61 克

加双蒸水至600毫升

使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。（PH7.4）

（b） 2.5﹪戊二醛固定液的配方：

0.2M磷酸缓冲液50毫升

25﹪戊二醛溶液10毫升

加双蒸水至100毫升

具体步骤如下：

离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋2.5％戊二醛。双醛固定对免疫电镜更加适合。）30min，PBS漂洗两遍，1％锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。

把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加2.5%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察

创作编号：BG7531400019813488897SX

创作者：别如克*