葡萄糖耐量的试验ppt课件

反应方程式：

[H+]
加热
葡萄糖——5-羟甲基-2-呋喃甲醛+3H2O
5-羟甲基-2-呋喃甲醛+邻甲苯胺——Schiff碱+H2O 青色
3、其他方法举例 福林—马尔露斯（Folin-Malmors）超微量法： 在热碱溶液中的葡萄糖可将高铁氰化钾还原为低 铁氰化钾，后者再与硫酸高铁盐作用生成亚铁氰 化铁（普鲁士蓝），与同样处理的葡萄糖标准液 进行比色，即可求出血糖含量。 其反应如下：
葡萄糖耐量的 试验
临床上OGTT主要适用于下列情况：（1）
无糖尿病症状，空腹血糖异常，或偶尔出 现糖尿，或有明显糖尿病家族史者；（2） 有糖尿病症状，血糖水平不够糖尿病诊断 标准者；（3）妊娠期或甲状腺功能亢进出 现糖尿者；（4）不明原因肾病与视网膜病 者。
实验原理
葡萄糖耐量试验（OGTT）是一种葡萄糖负荷
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血清葡萄糖浓度测定方法 1、GOD-POD法：以过氧化物酶作指示酶的
偶联酶反应定量法。葡萄糖氧化酶（GOD） 利用氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时释放 过氧化氢。过氧化物酶（POD）催化过氧化 氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚）， 并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。红 色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
测定血清中血糖浓度方法： 取三支试管，按表操作
项目 血清 测定管
（0.1.2.3.4）
标准管 —
空白管 —
100
葡萄糖标准应用液
蒸馏水 邻甲苯胺试剂

—
— 5.00
100
— 5.00
—
100 5.00
混匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出冷却后用分 光光度计在波长630nm处，以空白调零，读取标 准管和测定管的吸光度。
血糖测定方法归纳

血糖的测定方法按测定原理可分为无机化学方法、 有机化学方法和生物化学方法三类。此外，还有固 相酶法、电化学法及质谱法等。常用的是分光光度 法和酶学方法。分光光度法中常见的是邻甲苯胺法， 是利用葡萄糖在加热的有机酸溶液中与某些芳香族 胺类，可生成有色衍生物这一原理建立的。酶学方 法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脱氢酶 法等。(己糖激酶法)原理是用已糖激酶催化葡萄糖同 ATP反应，产生葡萄糖－6－磷酸及ADP，葡萄糖－ 6－磷酸在葡萄糖－6－磷酸脱氧酶存在时，同 NADP＋作用．产生NADPH及6—磷酸葡萄糖酸内 酯，NADPH在340nm有吸收峰。
应用邻甲苯胺法测定血糖浓度来 检测葡萄糖耐量
实验试剂：
1．邻甲苯胺试剂 邻甲苯胺为略带黄色的油状液 体，易氧化，配置时易重蒸馏，收集199—201℃ 时无色或浅黄色的馏出液。取硫脲2.5g，溶解于 750mL冰醋酸中，再将此溶液移入1000mL容量 瓶，加邻甲苯胺150mL、2.4%硼酸100mL，然后 加冰醋酸至刻度。 2．12mmol/L苯甲酸溶液 称取苯甲酸2.5g，加入 蒸馏水1000ml,加热助溶，冷却后储存于试剂瓶中 。 3.葡萄糖标准贮存液（10mg/mL） 准确称取无水 葡萄糖1.0000g,用饱和苯甲酸溶液溶解，移至 100ml容量瓶中，稀释至刻度。 4．葡萄糖标准应用液（1mg/mL） 用饱和苯甲酸 溶液将葡萄糖标准储存液溶液稀释10倍。

实验步骤：
受试者前三天正常饮食，停用影响血糖的各种
药物，如胰岛素、肾上腺皮质素、儿茶酚胺等。 试验前1天晚餐后即不再进食（即空腹10~14小 时）。 次日清晨空腹抽静脉血2ml（称为空腹血浆血 糖，即FPG），然后将75g葡萄糖溶于200 ~300ml温开水中（儿童按每千克体重1. 75g）， 令受试者5min内服 下。服后0.5小时、1小时、 1.5小时、2小时各抽一次血，取七支试管按下 表操作：
2、酶试剂
取过氧化物酶12000U，葡萄糖氧化 酶1200U，4-氨基安替比林10mg，置4℃保存，可 稳定存放3个月。 称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水 100ml中，用棕色瓶贮存。 将酶试剂及酚溶液等量混合， 4℃可以存放1个月。
3、酚溶液
4、酶酚混合试剂
5、12mmol/L苯甲酸溶液
取苯甲酸1.4g，于 800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至1L。 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于约70ml 12mmol/L苯甲酸溶液中，以12mmol/L苯甲酸溶液定 容至100ml。2h后方可使用。（防止氧化的作用 ，
反应方程式：
GOD
葡萄糖+O2+H2O———— 葡萄糖酸+2H2O2
POD
2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚————红色醌类化合物
葡萄糖氧化酶法是利用葡萄糖氧化酶氧化β葡
萄糖产生葡萄糖酸和双氧水的反应而建立。
血糖的酶法测定是利用酶的特异性催化而建
立起来的，具有高度的特异性，同时，可以 避免使用化学方法中的一些有害试剂等。操 作过程简便，便于自动化检测

2、邻甲苯胺法：葡萄糖为一含醛基的己糖，在酸 性条件下加热，可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛， 后者与邻甲苯胺缩合成青色的Suchiff碱。 Suchiff碱 颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比与进行同 样处理的标准葡萄糖液相比较，即可求出样品中葡 萄糖的含量。由于邻甲苯胺只与醛糖作用显色，故 此种测定方法不受血液中其他还原物质的干扰，测 定时也无需除去血浆或血清中的蛋白质。
计算公式：
应用GOD-POD法测定血糖浓度来检测葡 萄糖耐量
实验器材与试剂：
器材：
5ml移液管 50或100ul微量可调式移液器 721E分光光度计 1cm比色皿 37℃恒温水浴
试剂： 1、0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）
称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶 于蒸馏水800ml中，调pH7.0，定容至1L。
试验，用于检查人体胰岛素B细胞功能和机体 对糖的调节能力。正常人进食后血糖都会暂时 性升高，30~60分钟后可升到最高峰，但一般 不超过8.9mmol/L，2小时左右又会回到空腹 水平。这种现象称为耐糖现象。若内分泌失调 或神经系统功能紊乱，则调节功能失常，食入 大量糖后血糖浓度可急剧上升，短时间不能恢 复到原值，称为耐糖失常现象。所以观察耐糖 现象可以了解调节血糖的各种机能是否健全。