人类免疫缺陷病毒抗体

湖南省职业病防治院
作业指导书
标题：人类免疫缺陷病毒抗体（酶联免疫法）
修改记录
湖南省职业病防治院作业指导书文件编号：
标题：人类免疫缺陷病毒抗体（酶联免疫法）版号：第1 版页码1/2
1、目的
用于临床人类免疫缺陷病毒感染的辅助诊断。

2、范围
适用于献血员筛查与临床病例。

3、职责
检测人员按照本规程进行检测操作。

4、原理
采用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒“1”型和“2”型（HIV-1/HIV-2）抗原包被的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体。

5、样本要求
5.1仅限于检测人体血清或血浆。

5.2常规方法采集。

5.3血清：采血后，室温放置1-2小时，待血液凝固，再于3000转/分钟离心15分钟。

5.4血浆：采血后，样品与抗凝剂反复轻摇混匀，再3000转/分钟离心15分钟。

5.5如果样品没有在8小时内测定，应将其保存于2℃-8℃。

如果样品不能在7天内测定，
应将血清或血浆与血细胞分离，-20℃保存，避免反复冻融。

6．分析系统
6.1分析仪器：Thermo Mk3型酶标仪，检测波长450nm，参考波长630nm。

6.2 37℃恒温箱。

6.3 振荡器用于样品、试剂的混匀。

6.4 微量加样枪。

6.5 试剂准备：
试剂盒于冰箱保存，使用前应取出置37℃。

取试剂盒内洗涤液用蒸馏水作25倍稀释，置洗瓶中备用。

6.6 质控试剂：-20℃保存，溶解后随试剂一起冷藏，每天随样品一起检测并保存质控结果，每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。

7、分析步骤
7.1 样品编号：从6号开始编号。

7.2设阴性对照3孔，Anti-HIV-1阳性对照1孔，Anti-HIV-2阳性对照1孔，分别加入阴、阳对照各50微升。

7.3每个标本待测孔加入标本血清50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育60分钟。

7.4手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30~60秒，甩干，重复6次后拍干。

7.5每孔加酶标工作液50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。

7.6手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30~60秒，甩干，重复6次后拍干。

7.7 每孔加显色剂A液，显色剂B液各50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育10分钟。

7.8 每孔加入终止液50微升，混匀。

7.9 选取相应的程序号，用酶标仪双波长比色。

8、计算
Cutoff值=阴性对照平均A值+0.15。

9、参照区间
9.1 阴性对照A值应≤0.12
9.2 Anti-HIV-1阳性对照A值应≥0.8
9.3 Anti-HIV-2阳性对照A值应≥0.8
10.临床意义
样品A值≥临界值为HIV抗体阳性
样品A值＜临界值为HIV抗体阴性
11.注意事项
11.1 从冷藏环境中取出试剂盒应置37℃平衡30分钟后方可使用，余者应按前述方法保存和使用。

在平衡试剂的同时，待测样品需置室温平衡30分钟后再行测试。

11.2使用前试剂应摇匀。

11.3须确保样品加样量准确，如果加样量不准确，可能会导致错误的结果，建议使用微量移液器加所有组份；用滴瓶滴加时，应先弃去1~2滴，垂直匀速地滴加。

避免在加样过程中，将液体接触到或溅到微孔边缘上。

11.4 封片不能重复使用。

11.5 结果判断须在反应终止后10分钟内完成。

11.6 不同批号的试剂不可混用。

11.7 本试剂盒应视为有传染物质，请按传染病实验室检查规程处理。

12.支持性文件
12.1全国临床检验操作规程（第3版）
12.2 刘锡光，祁自柏等，病毒性肝炎实验诊断学。

人民卫生出版社，1999,357
12.3 李金明，等。

临床酶免疫测定技术。

人民军医出版社，2005,87
12.4 人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒说明书。