血液学一般检查
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实验一
原
血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被
高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化为高铁血红蛋白
（Hi），后者与氰离子（CN-）结合生成稳定
的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在特
理
定波长（540nm）和光径（比色杯内径
1.0cm）条件下具有一定的吸光度，通过用标
准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。
K3Fe(CN)6
Hb
Hi+ CN-
HiCN
[器材]
[标本来源]
1.血红蛋白吸管，5ml吸管 EDTA-K2抗凝全血
2.大试管
或毛细血管采血
3.722分光光度计
[试剂]
血红蛋白转化液（文齐氏液）：
氰化钾（KCN）
0.05g
高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]
0.20g
无水磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.14g
实验一
3.于722分光光度计上以转化液为 空白进行比色测定，波长540nm, 光径1.0cm。
4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量
吸光度 0.100 0.105 0.110 0.115 0.120 0.125 0.130 0.135 0.140 0.145 0.150 0.155 0.160 0.165 0.170 0.175 0.180 0.185 0.190 0.195
实验一 血液学一般检查(一)
[内容] 血红蛋白测定（氰 化高铁血红蛋白测 定法） 白细胞计数 （White Blood Cell Count）
实验一
1.血红蛋白测定---氰化高铁血红蛋白（HiCN） 测定法
该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保 存等优点，被国际血液学标准化委员会(ICSH)推 荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。
0.480
183.2
0.580
221.4
146.9
0.485
185.1
0.585
223.3
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0.490
187.0
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225.2
150.8
0.495
188.9
0.595
227.1
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浓度
100
100
吸光度
50
50
0
0.130 0.260 0.400 0.530
1
标准浓度 50 100 150 200
标准吸光度 0.120 0.260 0.400 0.530
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浓度
100
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吸光度
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实验一
[报告方式] 吸光度： Hb：__g/L（小数点后留一位）
[参考值] 成年男性：（120～160）g/L（130-170） 成年女性：（110～150）g/L（115-150） 新生儿： （170～200）g/L [注意事项] 1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、
0.420
160.3
0.520
198.5
124.0
0.425
162.2
0.525
200.4
126.0
0.430
164.1
0.530
202.3
127.9
0.435
166.0
0.535
204.2
129.8
0.440
167.9
0.540
206.1
131.7
0.445
169.8
0.545
208.0
133.6
使用中需妥善。废液倒入玻璃缸中。 2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。 3.722分光光度计的使用：转化液作空白(可共用)。透
射比模式，开盖调0，闭盖调100；吸光度模式比色。
实验一
2.白细胞计数
[原理] 血液用白细胞稀释液（2%醋酸溶液）稀释，使红细 胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数 池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换 算求出每升血液中的白细胞数量
2
3
4
[附]HiCN标准曲线绘制和K值计算：
将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150g/L、 200g/L） 后,在所用的分光光度计上 540nm处，光径 1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准 品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准 曲线。通过待测标本吸光度值查标准曲线。
准 浓 度 （g/L）
比色杯直径 1cm 仪器号: 20000448
浓度
吸光度
浓度
吸光度
浓度
114.5
0.400
152.7
0.500
190.8
116.4
0.405
154.6
0.505
192.7
118.3
0.410
156.5
0.510
194.7
120.2
0.415
158.4
0.515
196.6
122.1
血 红蛋白标
波长 540nm
浓度
吸光度
浓度
38.2
0.200
76.3
40.1
0.205
78.2
42.0
0.210
80.2
43.9
0.215
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45.8
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49.6
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87.8
51.5
0.235
89.7
53.4
0.240
91.6
55.3
0.245
93.5
Triton X—100
1.0ml
蒸馏水
加至1000ml
上述试剂为淡黄色 溶液，贮存于棕色 瓶中室温保存，其 中非离子表面活性 剂可加速溶血，缩 短转化时间，防止 因血浆蛋白改变引 起的混浊
[操作]
1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大 试管中。
2.用血红蛋白吸管吸取全血20µl， 轻拭管尖外余血，并准确调节血柱 液面至20µl。加入到准备好的血红 蛋白转化液底部，并用上清液吸、 吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血 液，充分混匀，静置5分钟。
0.450
171.8
0.550
209.9
135.5
0.455
173.7
0.555
211.8
137.4
0.460
175.6
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143.1
0.475
181.3
0.575
219.5
145.0
ห้องสมุดไป่ตู้
57.3
0.250
95.4
59.2
0.255
97.3
61.1
0.260
99.2
63.0
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110.7
74.4
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吸光度 0.300 0.305 0.310 0.315 0.320 0.325 0.330 0.335 0.340 0.345 0.350 0.355 0.360 0.365 0.370 0.375 0.380 0.385 0.390 0.395
原
血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被
高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化为高铁血红蛋白
（Hi），后者与氰离子（CN-）结合生成稳定
的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在特
理
定波长（540nm）和光径（比色杯内径
1.0cm）条件下具有一定的吸光度，通过用标
准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。
K3Fe(CN)6
Hb
Hi+ CN-
HiCN
[器材]
[标本来源]
1.血红蛋白吸管，5ml吸管 EDTA-K2抗凝全血
2.大试管
或毛细血管采血
3.722分光光度计
[试剂]
血红蛋白转化液（文齐氏液）：
氰化钾（KCN）
0.05g
高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]
0.20g
无水磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.14g
实验一
3.于722分光光度计上以转化液为 空白进行比色测定，波长540nm, 光径1.0cm。
4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量
吸光度 0.100 0.105 0.110 0.115 0.120 0.125 0.130 0.135 0.140 0.145 0.150 0.155 0.160 0.165 0.170 0.175 0.180 0.185 0.190 0.195
实验一 血液学一般检查(一)
[内容] 血红蛋白测定（氰 化高铁血红蛋白测 定法） 白细胞计数 （White Blood Cell Count）
实验一
1.血红蛋白测定---氰化高铁血红蛋白（HiCN） 测定法
该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保 存等优点，被国际血液学标准化委员会(ICSH)推 荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。
0.480
183.2
0.580
221.4
146.9
0.485
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188.9
0.595
227.1
250
200
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150
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浓度
100
100
吸光度
50
50
0
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200
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浓度
100
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吸光度
50
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实验一
[报告方式] 吸光度： Hb：__g/L（小数点后留一位）
[参考值] 成年男性：（120～160）g/L（130-170） 成年女性：（110～150）g/L（115-150） 新生儿： （170～200）g/L [注意事项] 1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、
0.420
160.3
0.520
198.5
124.0
0.425
162.2
0.525
200.4
126.0
0.430
164.1
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202.3
127.9
0.435
166.0
0.535
204.2
129.8
0.440
167.9
0.540
206.1
131.7
0.445
169.8
0.545
208.0
133.6
使用中需妥善。废液倒入玻璃缸中。 2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。 3.722分光光度计的使用：转化液作空白(可共用)。透
射比模式，开盖调0，闭盖调100；吸光度模式比色。
实验一
2.白细胞计数
[原理] 血液用白细胞稀释液（2%醋酸溶液）稀释，使红细 胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数 池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换 算求出每升血液中的白细胞数量
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4
[附]HiCN标准曲线绘制和K值计算：
将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150g/L、 200g/L） 后,在所用的分光光度计上 540nm处，光径 1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准 品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准 曲线。通过待测标本吸光度值查标准曲线。
准 浓 度 （g/L）
比色杯直径 1cm 仪器号: 20000448
浓度
吸光度
浓度
吸光度
浓度
114.5
0.400
152.7
0.500
190.8
116.4
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118.3
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156.5
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120.2
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158.4
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122.1
血 红蛋白标
波长 540nm
浓度
吸光度
浓度
38.2
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0.210
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53.4
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91.6
55.3
0.245
93.5
Triton X—100
1.0ml
蒸馏水
加至1000ml
上述试剂为淡黄色 溶液，贮存于棕色 瓶中室温保存，其 中非离子表面活性 剂可加速溶血，缩 短转化时间，防止 因血浆蛋白改变引 起的混浊
[操作]
1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大 试管中。
2.用血红蛋白吸管吸取全血20µl， 轻拭管尖外余血，并准确调节血柱 液面至20µl。加入到准备好的血红 蛋白转化液底部，并用上清液吸、 吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血 液，充分混匀，静置5分钟。
0.450
171.8
0.550
209.9
135.5
0.455
173.7
0.555
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175.6
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0.570
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143.1
0.475
181.3
0.575
219.5
145.0
ห้องสมุดไป่ตู้
57.3
0.250
95.4
59.2
0.255
97.3
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0.260
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64.9
0.270
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66.8
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70.6
0.285
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吸光度 0.300 0.305 0.310 0.315 0.320 0.325 0.330 0.335 0.340 0.345 0.350 0.355 0.360 0.365 0.370 0.375 0.380 0.385 0.390 0.395