脑脊液标本细菌学检验

脑脊液标本细菌学检验

关键词：分枝杆菌淋巴细胞脑膜炎奈瑟菌细胞菌种保藏中心 ATCC

一、检验程序

脑脊液标本的细菌学检验程序见图35-1。

二、检验方法

(一)显微镜检查

实验室应尽快进行涂片检查以防标本凝固，影响细胞计数和涂片结果。

1．一般细菌涂片如脑脊液标本外观为明显红色或混浊，可直接涂片，如果标本量超过1ml，应以相对离心力20000g离心10分钟，取沉淀物涂片，涂片作革兰染色。如果脑脊液标本有薄膜形成，则应取薄膜涂片染色和培养可提高阳性检出率。

2．结核分枝杆菌涂片取脑脊液的离心沉淀物涂片(如果脑脊液标本有薄膜形成，则应取薄膜涂片)，抗酸染色镜检。

3．隐球菌涂片取脑脊液的离心沉淀物涂片，墨汁或优质碳素墨水负染色，镜检。

(二)培养和鉴定

1．一般细菌培养取混浊脑脊液或经离心的沉淀物接种5％的血琼脂平板、不含抗生素的巧克力色琼脂平板、麦康凯或中国蓝平板，含无菌血清的增菌

环境培养18～24小时，若无可见生长，继续培养肉汤。置35℃、5％～10％CO

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48小时，增菌肉汤需转种于血琼脂平板和不含抗生素的巧克力色琼脂平板上作次代培养。根据菌落特点、形态、染色及生化反应进行鉴定，并进行药敏试验。

2．真菌培养取混浊脑脊液或经离心的沉淀物接种沙保弱培养基，35℃环境培养2～5同，根据菌落特性、涂片染色镜检进行初步鉴定，必要时可做进一步鉴定。

3．分枝杆菌培养除了从艾滋病患者采集的标本外，一般只在脑脊液淋巴细胞增多或蛋白、葡萄糖水平异常而脑脊液为无色透明或毛玻璃样时进行分枝杆菌培养。脑脊液标本先以相对离心力20000g离心30分钟，取沉淀接种罗氏培养基或商品化的分枝杆菌培养瓶，35～37℃环境培养6～8周。

一般情况下，脑脊液培养可使用肉汤增菌，也可采用商品化的血培养瓶进行增菌，但临床怀疑为脑膜炎奈瑟菌引起的感染(社区感染)时不能使用血培养瓶增菌，因为其中含有的聚茴香胺硫酸钠(SPS)对脑膜炎奈瑟菌有毒性，此时应接种于无SPS的培养基上。

(三)免疫学检验(乳胶凝集试验)

乳胶凝集试验检测新生隐球菌荚膜多糖抗原，是一种简便、快速、有效诊断隐球菌感染的实验室方法，它以胶乳颗粒为载体，表面连接有抗新生隐球菌荚膜多糖抗体，形成致敏胶乳悬液，如脑脊液中含有一定量的隐球菌荚膜多糖抗原，则可产生肉眼可见的凝集反应。该方法操作简单，具有较好的敏感性和特异性，可用于隐球菌脑膜炎的快速诊断。脑膜炎很少由厌氧菌引起，因此不需要对脑脊液常规进行厌氧培养。除非有脑脓肿、硬脑膜下积液或硬脑膜外脓肿形成的情况，此时可进行厌氧培养。