结核分枝杆菌thyA基因突变与对氨基水杨酸钠耐药关系的研究

ｒｓｓ ｎ ｔ ｎ ｒ ４８ １／１， ５８ ８３ ）ａｄ３ ．％（３６ ）１ ．％（／５ ｉ ｅｓｎｉｖ ｔ ｎ． ｏ ｃｕｉｎＴ ｙ ｇ ｎ ｏ ｌ ｅａｐ ｔ ｔ ｅｉａ ｔ ｒ ｓ ｅ５ ．％（７３ ） ２ ．％（／１ ｎ ５５ ２ ／５， ２３ ８６ ）ｎｔ ｅ ｓ ｉｅｓ ａ ｓ Ｃ ｎ ｌｓ ｈ Ａ ｅｅｃｕｄｂ ｏｅ ｉ ｔ ｓ ａ ｗｅ ｉ ｈ ｔ ｒ ｉ ｏ ｎａ ｌ
Ｎａｏｒｐ ０ ０核 酸 分 析 仪 （ 国 Ｔ ｅｍｏ公 司 ） ｎ ｄｏ ２０ 美 ｈｒ ， Ｅ Ｃ Ｉ Ｓ Ｏ Ｉ生物 安 全柜 （ 加坡 Ｅ Ｃ 新 Ｓ Ｏ公 司 ） 。 １２ 方 法 ． １ ． 细菌 基 因组 Ｄ ．１ ２ ＮＡ 的抽提 ： 用酚 ／ 采 氯仿 抽提
的方法 。
（ 少 对 Ｉ Ｈ、Ｒ Ｐ耐 药 的 结 核 病 ） 的 患者 的 增 多 至 Ｎ Ｆ
及 结核 病 防控 的 困难 。２ １ ００年我 国的 结核 患者 中有 ５ ％ 为 ＭＤ Ｔ 患 者 。 由 于 结 核 分 枝 杆 菌 对 一 ． ４ Ｒ—Ｂ ”
线药物的耐药， 人们开始更多关注二线抗结核药物 ，
况 。结 果 分 离得到 的 ９ 株 Ｍｔ ，６ 株为 Ｐ Ｓ敏感菌株 和 ３ 株 为 Ｐ Ｓ耐药菌株 。以 Ｍｔ ６ ｂ中 ５ Ａ １ Ａ ｂ标准菌株 Ｈ ７ ｖ为对 照，筛选敏 感和耐药 菌 ３Ｒ
株 中的 ｔｙ ｈ Ａ突变 率分别是 ４ ．％ （０６ ） １ （ ２３ ） ６１ ３ ／５ 、７ ％ ２ ／１ ，突变 多为单个碱基 的缺 失和插入突变 ，其 中又 以第 １ 密码 子缺失 Ｃ、第 １８位 ９位 ６ 密码子缺失 Ｃ为主 ， 在耐药 中所 占比率分别是 ５ ．％ （７３ ） ５８ （／１ ，其在敏感菌株中的比率也分别是 ３ ．％ （ ３６ ） ２３ （ ／５ 。 ４８ １／１ 、２ ．％ ８３ ） ５５ ２ ／５ 、１ ． ％ ８６ ）
线 抗 结 核 病 药物 之 一 ，但 对 其 作用 机 制 及 耐 药机 制
尚不十 分清 楚 。
Ｐ Ｓ对 Ｍｔ Ａ ｂ有抑 制作用 ，一 般认 为 Ｐ ＡＳ与对 氨 基 苯 甲酸 （ Ａ Ａ）近似 ，通 过对 叶酸 合成 的竞争 抑 ＰＢ
制 作 用 而 抑 制 Ｍｔ ｂ的生 长 繁 殖 。Ｒ ｎ ａａ ｎ等 ｅ ｇｒ ａ ｊ
ＬｉＣｈｕ ｎ ｏ ａｙｕ
Ｉ ｐ ｒ ｎ ｆ ｃｅｉｌｇ ｎ ａｔ ｔ ｔ ｏｏ ｙａ ｄＩ Ｄｅ ｍｅ ｏ Ｂａ ｒ ｍｍｕ ｏｏ ｙ Ｂ ｉｎ ｕ ｅｃ ｌｓ ｎ ｈ ｒｃ ｕ ｕ ｅｅｒｈＩｓｔｔ， ｎ ｌｇ ， ｅ ｉｇＴ ｂ ｒｕｏｉ ａ ｄ ｏａｉ Ｔ ｍｏ ｒ ｓａｃ ｔｕｅ ｊ ｓ Ｔ ｃ Ｒ ｎｉ Ｂ ｉｎ ０ ９ Ｃ ｉａ ｅ ｉｇ１ １４ ， ｈｎ ． ｊ １
【 ｙｗｏ ｄ 】 Ｍｙ ｏ ａ ｔｒ ｍ ｂ ｒ ｕｏ ｉ； ａａ ａ ｎ ｓｌ ｙｉ ｃ Ｄ ｕ ｓ ｔ ｃ ； ｈ ｍｉｙａｅｓ ｎｈ ｓ Ｋｅ ｒ ｓ ｃ ｂ ｃｅｉ ｔ ｅｃ ｌｓｓ Ｐ ｒ —ｍｉｏ ａ ｃ ｌ ａ ｉ ｒ ｇｒ ｉ ａ ｅＴ ｙ ｄ ｌｔ ｙ ｔａ ｅ ｕ ｕ ｉ ｃ ｄ； ｅ ｓｎ
结论 ｔ Ａ基 因可能是 Ｐ Ｓ耐药潜在靶 点，但本研 究未发现其特异性突变位 点。 ｈ ｙ Ａ 【 关键 词】 分枝杆 菌，结核 ； 氨基水杨 酸钠 ； 对 耐药 ； 胸苷酸合成酶
Ａ ｔ ｄ ｆＲｅａ ｉ ｎ ｈ ｐ ｂ ｔ ｅ ｙ ｏ ａ ｔ ｒｕ ｔ ｂ ｒ ｕ ｏ ｉ ｔ ｙ Ｍ ｕ ａ ｉ ｎ ａ ｄ Ｓ ｕ ｙｏ ｌ ｔ ｓ ｉ ｅ ｗｅ ｎ Ｍ ｃ ｂ ｃ ｅ ｉ ｍ ｕ ｅ ｃ ｌｓｓ ｈ Ａ ｔ ｔｏ ｎ ｏ
基金项 目 ： 首都 医学发展基金 （ ０ —０ ５ ２ ９ １５ ） ０
作者单位 ：１ １４ ０ １９北京 ，首都医科大学 附属北京胸科医 院细菌免疫学研究室 （ 孙勇 、刘毅 、任卫聪、李传友 ） ，胸外科 （ 绍发 ） 许
１０ ３ 北京 ，北京结核病控制研究所 （ ００５ 洪峰、王 民 ） ；
ｄ ｌ ｔｏ ｄ ｉ ｓ ｒｉ ｎ ｍｕ ａ ｏ ｓ ｅ ｅ ｎ ａ ｎ ｅ ｔｏ ｔ ｔ ｎ ，ｗｈ ｃ ｉｎｌ ｒ ｓ ｎ ｅ ｓ ｉ ｇ ａ ｏ ｏ ９ Ｃ ｄ ｄｅｅ ｉ ｎ ａ ｏ ｏ ６ Ｔｈ ｅ ｃ ｎ ａ ｅ ｏ ｔ ｔ ｎ ｉ ｅ ｄ ｕ ｉ ｎ ｉ ｉ ｈ ｍａ ｙ ｐ ｅ ｅ ｔ ｄ ｍｉｓ ｎ ｔｃ ｄ ｎ １ ａ ｌ ｔ ｔｃ ｄ ｎ １ ８ Ｃ． ｅ ｐ ｒ ｅ ｔ ｇ ｆ ｍｕ ａ ｉ ｎ ｔ ｒ ｇ ｎ ｏ ｏ ｈ
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１ ８・
结 核病 与 胸部 肿瘤 ２ １ 年 第 １ ０２ 期
Ｔ ｂｒ ｈ ｒ ｕ ｏ， ｒ２ １， ｏ１ ｕ ｅ ＆Ｔ ｏ ｍ ｒ Ｍａ ０ ２ Ｎ ． Ｔ
结核分枝杆菌ｔｙ 基 因突变 与对氨基水杨酸 钠耐药 ｈＡ 关系的研 究
孙 勇 洪峰 许 绍发 刘毅 任卫聪 孙照 刚 高铁 杰 张治 国 王廷 民 李传友
Ｒｅ ｉｔ ｎｔ ｎｃ ｏ Ｐａ ａ ａ ｉ ｓ ｌｃ ｌｃＡｃ ｄ ｓｓａ ａ ｅｔ ｒ － ｍ ｎｏ ａ ｉｙ ｉ ｉ
Ｓ ｎＹｏ ｇ， ｎ ｅ ｇ ＸｕＳ ａ ｆ， ｉ ， ｅ ｉｏ ｇ Ｓ ｎ ｈ ｏ ａｇ Ｇ ｏＴ￣ ｅ Ｚ ａ ｇＺ ｉｕ ， ａｇＳ ｍｉ， ｕ ｎ Ｈｏ ｇＦ ｎ ， ｈ ｏａ ＬｕＹｉＲ ｎＷｅｃ ｎ ， ｕ ａ ｇ ｎ ， ａ ｉ ｉ， ｈｎ ｈｇ ｏ Ｗ ｎ ｕ ｎ Ｚ
水 杨 酸 钠 ｐ ｒ．ｍｉｏａｉ ｌ ｃｄ（ＡＳ ａａａ ｎ ｓｌ ｙｉ ａ ｉ Ｐ ）是 重要 的二 ｃ ｃ
Ｂ ｏｒｄＳ ０ ０基 因 扩 增 仪 （美 国 Ｂ ｏｒｄ公 ｉ— １０ ａ ｉ． ａ 司 ） Ｆ Ｔ ＤＹ ， ｏ ｏ ＮＥ凝 胶成 像系 统 （ 国 Ｉ ｇ 美 ｍａ ｅ公司 ） ，
１２０ ０ ２ ０北京 ，北京市 昌平区结核病防治所 （ 高铁杰 、张治国 ） 通讯作者 ：李传友 ，Ｅ ｉｌｌ ｈ ａｙ ｕ ６ ８＠ ｈｔ ｉｌｃ ｍ； ｍａ ：ｉ ｕ ｎ ｏ ６ ８ ｃ ｏｍａ ．ｏ 王筵 民，Ｅｍａ ：ｕ ｎ ａ ｇ ８ ＠１６ｃ ｍ — ｉ ｓｍｉｗ ｎ ０ ５ ２ ． ｌ ｏ
ｔｂ ｒｕｏ ｉｗａ ｓ ｏ ｔ ｌｔｙ ｇ ｎ ｍｆ ｎｒｔｓ ｆ ｅｓｎｉｖ ｎ ｓｓ ｎ ｔ ｎ ｒ ６１ ３ ／５ ａｄ７ ％（２３ ）ｍｏｔ ｔ ｎ ｌｂ ｓ ｕ ｅｃ ｌｓｓ ｓ ｃ ｎ ｏ， Ａ ｅ ｅ ａａ ｒ ｈ ｍｕ ｉ ａ ｓｉｅ ｄｒ ｉｔ ｔ ｒ ｓ ｅ ．％（０６ ） １ ２ ／１， ｓ ｙｗｉ ｓ ｇｅ ａｅ ｏ ｅ ｏ ｔ ｅ ｔ ａ ｅ ａ ｓ ａ ｗｅ ４ ｈ ｉ ｎ ｌ ｈ ｉ
在 卡 介 苗 菌株 中利 用 转座 子 插 入 的方法 ，发现 编 码
胸 苷酸 合成 酶 （ ｙ ｉｙａ ｎｈ ｓ，ｔｙ 的基 因突 ｔ ｍ ｄ ｌｔ ｓ ｔａｅ ｈ Ａ） ｈ ｅｙ
变 抑 制 了酶 的活 性 导 致 细胞 内 叶酸水 平 的下 降 ，其 认 为 ｔｙ 基 因突 变 不仅 导致 Ｐ ｈＡ ＡＳ耐 药 而 且 还 是 其 他 和 叶酸 代 谢 相 关 药物 的靶 点 。Ｒ ｔ ｄｅ等 口认 为 ａｅｇ ｌ Ｐ ＡＳ抑 制 了 Ｍｔ ｂ对铁 离 子 的吸 收 ，从 而 导致 Ｍｔ ｂ生 长 受 限及 毒 力 的减 弱 。 由于 Ｐ ＡＳ不是 临床 首 选 药 ，
ｔ ｒ ｅ ｒｄ ｖ ｌ ｐ ｎ ｆＰ ｅ ｉｔ ｎ ｅ ｂ ｔ ｐ ｃ ｆｃｍ ｕ ａ ｏ ｉ ａ ｏ ｅ ｎ ｆ ｕ ｄ ｉ ｈ ｓ ｓｕ ｙ ａ ｇ ｔ ｅ ｅ ｏ ｍｅ ｔ ＡＳ ｒ ｓｓ ｃ ， ｕ ｓ ｅ ｉ ｔｔ ｎ ｓｔ ｈ ｓｎ ｔｂ ｅ ｏ ｎ ｎ ｔｉ ｔ ｄ ． ｏ ｆ ｏ ａ ａ ｉ ｉ ｅ
结核 病 与 胸部肿 瘤 ２ １ 年 第 １ ０２ 期
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并 与 一 线 抗 结核 药 联 合应 用 ，但 随着 应 用 的 二线 药 物 如 喹 诺 酮类 药 物 、 卡那 霉 素 、卷 曲霉 素 等二 线 药 物 的耐 药 出现 ，人 们 又 开始 寻 找那 些 对 Ｍｔ 抑 制 ｂ有 或 杀 菌 作 用而 应 用 不 是很 广 泛 的药物 ，其 中对 氨 基
【 ｓｒｃ】 Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｔｄ ｈ ｅｉｔｎｅｒｔｓ ｆｃｉｉａ ｉｏａｅ ｃｂ ｃｅｉｍ ｕｅｃｌｓｓｓ ａ ｓｔ ａａ ａ ｎ ｓｌ ｙｉ ａｉ Ｐ ） Ａｂ ｔａ ｔ ｊｃｉ ｏｓｕ ｙｔｅｒｓｓ ｃ ａｅ ｌ ｃｌ ｓｌ ｄＭｙ ｏ ａ ｔ ｕ ｔｂｒ ｕｏｉ ｔ ｉ ｐｒ－ ｍｉｏａｉ ｌ ｃｄ（ ＡＳ ｖ ａ ｏ ｎ ｔ ｚ ｒｎ ｏ ｃ ｃ
【 要 】 目的 摘
了解 Ｍｔ 临床分离菌株 中对氨基水杨 酸钠 （Ａ ）的耐药 率及 Ｐ Ｓ ｂ ＰＳ Ａ 耐药性与 ｔ Ａ wenku.baidu.com 因突变 的关系 。 方 法 从肺结 核患 ｈ ｙ
者的痰液或咽拭子标本中分离并鉴定 Ｍｔ ６株 ，采用 比例法 、Ｐ ｂ９ ＣＲ的方法检测上述 Ｍｔ ｂ临床菌 株对 Ｐ ＡＳ的耐药性情况及其 ｔｙ ｈ Ａ基 因突变情
目前 ，结 核病 仍 是 最 常见 的传染 病 之 一 ，全世 界 约有 ２亿 人 感染 结核 分枝 杆菌 ，其 中仅 ２ １ ０ ０年新 增 ８０万 患 者 ， １０万 人 死 于 结 核 病 。 近 年 来 ， ８ ４ ”
由于 不 合 理 的用 药 及新 药研 发 的缓 慢 导致 ＭＤＲ Ｔ —Ｂ
ａ ｄ ｔ ｅ ｒ ｌ ｔｏ ｓ ｉ ｅ ｗｅ ｎ Ｐ ｅ ｉｔ ｎ ｅ ｗｉ ｙ ｇ ｎ ｕ ａ ｏ ． ｅ ｈ ｓ ６ ｓｒ ｉ ｓ ｌ ｔ ｄ ａ ｄ ｉ ｅ ｔ ｅ ｐ ｔ ｍ ｒｔ ｒ ａ ｗａ ｐ ｃ ｍｅ ｓ ｎ ｈ ｅ ａ ｎ ｈ ｐ ｂ ｔ ｅ ＡＳ ｒ ｓｓ ａ ｃ ｔ ｔ Ａ ｅ ｅ ｍ ｔｔ ｎ Ｍ ｔ ｏｄ ９ ｔａｎｓｉｏ ａｅ ｄ ｎ ｆ ｄ ｉ ｓ ｕ ｕ ｏ ｏ ｔｓ ｂ ｓ ｅ ｉ ｎ ｉ ｈｈ ｉ ｎ ｉ ｉ ｎ ｈ ｆｏｍ ｕ ｅ ｃ ｌ ｉ ｔｅ ｔ ｒ ｎ ｌ ｚ ｄ ｆ ｒＰＡＳ ｒ ｓ ｓａ ｃ ｉ ｔｏ ｎ ｈ Ａ ｅ ｅ ｍｕ ａｉ ｎ ｕ ｉ ｇ ｐ ｏ ｏ ｔ ｎ ｔ ｏ ｎ ｒ ｔ ｂ ｒ ｕ ｏｓｓｐａ ｉ ｎ ｓ ｗｅ ｅ ａ ａ ｙ ｅ ｏ ｅ ｉ ｔ ｅ ｓｔ ｉ ｎ ａ ｄ ｔ ｙ ｇ ｎ ｔ ｔｏ ｓｎ ｒ ｐ ｒｉ ａ ｍｅ ｈ ｄ ａ ｄ ＰＣＲ ｅｈ ． ｓ ｔ ｎ ｕａ ｏ ｍ ｔ ｏｄ Ｒｅ ｕｌｓ Ａｍｏ ｇ ９ ｄ ｎ ｆｅ ｔａｎｓｏ Ｍｙｃ ｂ ｃ ｅ ｉ ｍ ｔ ｂ ｒ ｕ ｏ ｉ ， ５ｗｅ ｅＰＡＳ ｓ ｎ ｉ ｖ ｔａ ｎ ｎ ｄ ３ ｎ ６ｉ ｅ ｔ ｄ ｓｒ ｉ ｆ ｉ ｉ ｏ ａ ｔｒｕ ｕ ｃ ｌｓｓ ６ ｅ ｒ ｅ ｓｔ ｅ ｓｒ ｉ ｓａ １ＰＡＳ ｒ ｓｓａ ｃ ｔａ ｎ ． ｅ ｓ ａ ｄ ｔａ ｎ ｉ ｅ ｉｔ ｅ ｓ ｉ ｓ Ｔｈ ｔ ￣ｄ ｓｒ ｓＨ３ ＲｖＭ ． ｎ ｒ ｎ ｉ ７
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