大枣中性多糖的化学研究

为 HP - 1037A R I, 柱为 u - Bondagel E - 1000,均为美国惠普公 于 721分光光度计上测定吸收度 ,测定波长为 490 nm ,结果洗脱
司产品 ; 医用冷冻干燥机 LGJ - II型为上海医用仪器厂 。
峰均为单一峰 ,进一步表明两个样品为均一组分 。
2 实验方法
macia产品 ; 测定分子量所用标准糖为 Shodex Standard Pullulan P 2. 2 纯度测定
- 82系列 ; 各种单糖标准品为 M erck出品 ; CF3 COOH 为 Flank 2. 2. 1 HPGPC法 分别取 ZJ - 9, ZJ - 10加水溶解 , 进样 ,流动
ZJ - C进行 DEAE - Cellulose柱层析 , 0～1 mol/L NaAc溶液
结构表征 。
梯度洗脱 ,分部收集流份 ,以苯酚 - 硫酸法测定 ,合并单一峰位 ,
1 材料与仪器
再分别经 Sephacryl s - 300反复柱层析 ,合并主峰部位 ,得到白色
DEAE Cellulose为 W hatman产品 ; Sephacryl S - 300为 Phar2 无定形粉末状的 ZJ - 9, ZJ - 10两个多糖组分 。
( 1. Henan College of T rad itiona l Ch inese M ed icine, Z hengzhou, Henan 450008, Ch inan; 2. People’s Hospita l of
Fan Coun ty, Fanx ian , Henan 457500, Ch ina)
L ISH IZHEN MED IC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2005 VOL. 16 NO. 12
时珍国医国药 2005年第 16卷第 12期
大枣中性多糖的化学研究
杨 云 1 , 弓建红 1 , 冯卫生 1 , 马相斌 2
(1. 河南中医学院 ,河南 郑州 450008; 2. 河南省范县人民医院 457500)
水解产物水溶液 ,进行纸层析 。展开剂 Ⅰ:醋酸乙酯 2吡啶 2乙酸 2 M an (1→3)为主链 ,岩藻糖在末端或支链相联 。
水 (5∶5∶1∶3, V /V ) ;展开剂 Ⅱ:正丁醇 - 乙醇 - 水 ( 4 ∶1 ∶5,
V /V ) 。显色剂 :苯胺 2邻苯二甲酸 。
2. 4. 3 HPLC检测多糖组成 取完全酸水解产物水溶液 ,过 0. 45 μm 滤膜 ,用 HPLC进行分析测定 。同时用鼠李糖 、阿拉伯糖 、甘
收稿日期 : 2005203224; 修订日期 : 2005209219 基金项目 :河南省重大科技攻关资助项目 (No. 984021200)
分子量 。 2. 4 结构研究
作者简介 :杨 云 (19552) ,女 (汉族 ) ,河南南阳人 ,现任河南中医学院药学 2. 4. 1 完全酸水解 取 ZJ - 9, ZJ - 10 各 5 mg,分别加 2 mol/L
核磁共振仪为 B ruker AC - 300; UV - 2201紫外扫描仪为日本岛 10mg溶于 10 m l水中 ,上样于预先平衡好的 Sephacryl s - 300 ( 3
津产品 ; GPC测定仪为 HP - 1090M (带 GPC软件 ) ; 示差折光仪 cm ×60 cm )柱 ,用 0. 2 mol/LNaAc洗脱 , 以苯酚 - 硫酸法显色 ,
露糖 、半乳糖 、木糖 、果糖 、葡葡糖 、岩藻糖 、半乳糖醛酸 、葡萄糖醛
酸进行对照 ,在相同的色谱条件下根据标准糖的保留时间确定单
糖的组成 ,根据峰面积积分得出各组分的摩尔比 。
HPLC条件 :色谱仪用日本岛津公司 LC - 10A; CLASS - LC10
液相色谱工作站 ;检测器用 R ID - 10A;色谱柱用 Shim - pack SCR
院教授 ,硕士生导师 ,主要从事中药有效成分研究及新药开发研究工作.
CF3 COOH溶液 5 m l,封管 , 110℃水解 5 h,减压浓缩 ,以甲醇处理
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时珍国医国药 2005年第 16卷第 12期
L ISH IZHEN MED IC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2005 VOL. 16 NO. 12
关键词 :大枣 ; 多糖 ; 分离纯化 ; 结构测定 中图分类号 : S789. 7 文献标识码 : A 文章编号 : 100820805 (2005) 1221215202
Stud ies on the Neutra l Polysacchar ides of Z izyphus ju jube M ill YANG Yun1 , GONG J ian2hong1 , FENG W ei2sheng1 , MA X iang2bin2
活力 ,降低血浆肝匀浆及脑匀浆中 LPO 水平 ;促进正常及免疫抑 加水溶解 ,以 30% CCl3 COOH脱蛋白 ,静置 ,离心 ,上清液以碱液 制小鼠腹腔巨嗜细胞吞噬功能 , 促进溶血素和溶血空斑形成 ,促 调 pH = 7,减压浓缩 ,浓缩液对水透析 , 将透析袋内的溶液减压
进淋巴细胞转化 ;对大小鼠血虚模型 、气血双虚模型有较好改善 浓缩至适当体积 ,加入 95%乙醇使其含醇量达 85% ,收集沉淀
多次 ,抽干 ,加 1 m l水溶解 ,得完全酸水解产物水溶液 。
动 5. 5 ppm ,说明在 C - 3位发生取代 ,该数据与文献 [2 ]中 - [β2
2. 4. 2 纸层析检测多糖组成 取各单糖标准品及样品的完全酸 M an ( (1→3) ]结构的碳化学位移数据一致 ,说明 ZJ - 9 是以 β2
出品 ; 其它试剂均为国产 AR级 。
wenku.baidu.com
相为 0. 02%NaN3 水溶液 ,流速为 0. 5 m l/m in,示差折光检测 。结
BS - 1OOA 型自动部分收集器及 HL - 2型恒流泵为上海沪 果显示洗脱峰均为单一对称峰 ,说明为均一组分 。
西机电厂产品 ; 721型分光光度计为上海第三分析仪器厂产品 ; 2. 2. 2 Sephacryl s - 300 凝胶柱层析法 取 ZJ - 9、ZJ - 10 各
- 101C (7. 9 mm ×30 cm ) ;柱温 80℃;流动相高纯水 ;流速 10 m l/
m in。 2. 4. 4 NMR 的测定 取 ZJ - 9, ZJ - 10 约 10 mg溶于 0. 5 m l
图 2 ZJ - 10的 13 C NMR谱
D2O , 于常温测定 , TM S为内标 。 3 实验结果 3. 1 分子量测定 HPGPC测定各多糖标准品系列在 μ - Bonda2
为中医临床常用的医疗保健药材 ,具有补中益气 ,养血安神之功 浸提取四次 ,合并提取液 ,浓缩至约 4 000 m1,分别以 20% , 50% ,
效 ,用于脾虚食少 ,乏力便溏 ,妇人脏躁之症 。本课题组的药理研 80%乙醇依次分级沉淀 ,静置 ,虹吸上清液 ,下层沉淀离心 ,收集
究表明 :大枣多糖可以提高衰老模型小鼠血 SOD , CAT, GSH - PX 沉淀物 ,分别得到分级沉淀的褐色粗多糖 。取 80%醇沉粗多糖
2. 3 分 子 量 测 定 称 取 Pullulan P - 82 系 列 多 糖 标 样 , 溶 于
2. 1 提取分离纯化 大枣干燥成熟果肉 ( 4. 0kg) 以 95%乙醇 0. 02% NaN3 中 ,进行 HPGPC分析 ,以 LogMW 对 RT作图得标准 曲线 , 同法测出 ZJ - 9, ZJ - 10的保留时间 ,从标准曲线上求出
作用 。新郑大枣为河南特产 ,对其多糖的研究国内外未见报道 , 物 ,相继以高浓度乙醇 、无水乙醇 、丙酮及无水乙醚处理 ,迅速置
为深入开发大枣这一丰富的自然资源 ,本文对其多糖成分进行了 P2O5 真空干燥器中减压干燥 ,得除去部分杂质的粗多糖 ZJ - C。
较系统研究 ,从中分离得到均一多糖 ZJ - 9, ZJ - 10,并对其进行
摘要 :目的 :对大枣的多糖化学成分进行较系统研究 。方法 :大枣用乙醇回流脱脂 , 80～100℃温水浸取 ,提取液减压浓
缩 ,乙醇分级沉淀 ,三氯乙酸脱蛋白 ,透析 ,透析内液减压浓缩 ,再醇沉得到三个级分 ZJ - A , ZJ - B , ZJ - C; ZJ - C多糖经 DEAE - Cellulose柱 、Sepchcryls - 300柱层析纯化 。结果与结论 :分离提取的大枣多糖 ZJ - 9, ZJ - 10, GPC法测定其相对 分子量为 5 244, 4 615。经光谱和色谱分析 (13 C NMR, HPLC)表明 ZJ - 10是以 β - ( 1→2) - 阿拉伯呋喃糖为主链 ,葡萄 糖 、半乳糖在末端或支链相联的均一组分 , ZJ - 9以 β - (1→3) - 甘露糖为主链 ,岩藻糖在末端或支链相联 。
tein was cleared by CCl3 COOH. Results:W hile ZJ - 9 and ZJ - 10 were obtained by further purification of ZJ - C w ith DEAE Cellulose and Sepchcryls - 300, the molecular weight of ZJ - 9 and ZJ - 10 were estimated to be 5 244, 4 615 with GPC. Spectral analysis (UV , IR , 13C NMR , HPLC) were used to investigated the structural characterization of polysaccharides. Conclusion : The ZJ - 10m’ ain chain is (1→2) - linkedβ - D - anabinofuranose , and its side chains include glucose, galactose. The ZJ - 9’ main chain is (1→3) - linkedβ - D - mannose , and its side chains include fucose.
gel E - 1000柱上的保留时间 ,以 LogMW 对 RT作图得标准曲线
见图 1。同法测出 ZJ - 9, ZJ - 10的保留时间 ,从标准曲线上求出
其分子量为 5 244, 4 615。
图 3 ZJ - 9的 13 C NMR谱
Key words: Z izyphus Ju juba M ill; Polysaccharide; Purification; Structure
大枣为鼠李科植物枣 ( Z izyphus jujube M ill)的干燥成熟果实 , 回流提取三次 ,药渣置于通风处晾干 ,用水于 80 ～100℃连续温
A bstra ct:O bjective: Systematic chem ical studies on polysaccharide , the main activity components in Z izyphus J ujube M ill were done. M ethods: Z izyphus J ujuba M ill was extracted w ith ethanol and 80 - 100℃water, the water elution was concentrated at reduce p ressure, fractions ZJ - A , ZJ - B , ZJ - C were obtained by fractional p recip itation of the water elution w ith ethanol. And then p ro2