病原菌分离培养与鉴定
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菌落的大小、形态、颜色、表面性状、透明 度和溶血性等对细菌做出初步的识别
细菌分离培养与鉴定
细菌学诊断的一般程序
脓/痰/尿
涂片、染色、镜检
标本
分离培养
纯培养
血、脑脊 液等
增菌
生化反应 血清学鉴定 药敏试验 动物实验
11
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
性能特点
自动化程度较高 、检测速度快、 可鉴定细菌种类 及药敏试验种类18
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
动物试验：细菌毒力的测定 * LD50 * ID50
小 鼠
豚鼠
家兔
细 菌 专性厌氧菌
细菌感
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
（四）生物芯片技术
将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织 等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上 在一定的条件下进行生化反应。 用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果， 通过特定的仪器读取与收集数据，并用软件进行数据 分析，从而判断样品中靶分子的种类和数量。
Staphylococcus aureus
G- Neisseria meningitidis Escherichia 7coli
（二）病原菌的分离培养与鉴定
inoculation and identification for isolation
临床标本
clinical specimen 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
（三）病原菌抗原的检测
原理： 细菌或其抗原成分（未知）＋特异性抗体（已知） 肉眼可见结果或可检测的信号
适用于：细菌培养不易成功，患者使用了抗生素 常用方法：
凝集试验（玻片、协同和乳胶等） 免疫标记技术 （酶、荧光素、同位素） 病原菌（抗原）核酸的检测(见分子生物学诊断）
collection and transportation of specimen
避免杂菌污染
标本的采集和送检六原则
不同期不同标本 用抗生素以前
采集病变明显部位
标本必须新鲜
运送注意保存
细菌感
（二）病原菌分离培养与鉴定：形态学检查
不染色检查法 压滴法 悬滴法 暗视野显微镜法
检查用仪器 普通光学显微镜 light microscope 暗视野显微镜 dark-field microscope 荧光显微镜 fluorescence microscope ……
Medical Microbiology and Parasitology
Chapter 6 Methods for Identification
and Principle of Prevention and cure of Bacterial Infection
Deptertment of medical Microbiology and Parasitology
生化试验
肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应
13
细菌的生化反应
糖发酵试验
H2S 试验
枸橼酸盐利用实验
抗生素敏感性试验
Antimicrobial susceptibility test
最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC） 最低杀菌浓度（minimum bactericidal cencentration，MBC）
2
细
菌
感
染
的
检
16SrRNA序列分析
测
生物芯片技术
生化模式转变为数学模式
自动微生物鉴定和药敏分析系统
细菌感染的检查方法
一、细菌学诊断
• 标本的采集与送检 • 病原菌的分离培养与鉴定 • 病原菌抗原的检测
二、血清学诊断
有凝集试验、ELISA、沉淀试验、中和试验等。
三、分子生物学诊断
（一）标本采集与送检
抗生素连续梯度法（E-test法）
将稀释法和扩散法的原理相结合，使用预先设定的 稳定且连续的抗菌药物浓度梯度，采用琼脂培养基培养 以确定不同抗菌药物对微生物的最低抑菌浓度（MIC）。
16
自动微生物鉴定及药敏分析系统
将培养基上分离的可疑致病菌配制成纯菌液，放入自 动微生物鉴定及药敏分析系统中，通过计算机自动扫描、 读数、分析、最后报告鉴定及药敏结果。
摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社
17
自动微生物鉴定及药敏分析系统
微生物数码鉴定原理
系统组成
计算并比较数据库内每
个细菌条目对系统中每
个生化反应出现的频率
总和
自动微生物鉴
药敏检测原理
定及药敏分析
微型化的肉汤稀释试验
系统
根据CLSI标准得到相应敏
感度：敏感、中度敏感和
耐药
测试卡（板）、菌液接 种器、培养和监测系统 、数据管理系统
inoculation for isolation
挑取单菌落
pick up single colony
纯培养
pure culture
鉴定(成分检测）
identification
分离培养最重要的是得到单菌落！
三划线法分离单菌落 three streaks
agar plate
细菌的菌落
Bacterial colonies
.
CONTENTS KEY TERMS
一、细菌学诊断 • 标本的采集与送检 • 病原菌的分离培养
与鉴定 • 病原菌抗原的检测 二、血清学诊断 三、分子生物学诊断
• Intrinsic resistance
• Acquired resistance
• Biochemical mechanisms of bacterial drugresistance
染色检查法 革兰染色法 Gram’s stain 抗酸染色 acid-fast stain 特殊染色 special stain 荧光染色 fluorescence stain
直接涂片镜检标本： 脓性分泌物、米泔水样粪 便、痰液、分离培养物 分离培养物涂片镜检
（2）形态学检查:染色法
革兰染色 抗酸染色 荧光金胺染色 特异性荧光抗体 其他 特殊染色
细菌分离培养与鉴定
细菌学诊断的一般程序
脓/痰/尿
涂片、染色、镜检
标本
分离培养
纯培养
血、脑脊 液等
增菌
生化反应 血清学鉴定 药敏试验 动物实验
11
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
性能特点
自动化程度较高 、检测速度快、 可鉴定细菌种类 及药敏试验种类18
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
动物试验：细菌毒力的测定 * LD50 * ID50
小 鼠
豚鼠
家兔
细 菌 专性厌氧菌
细菌感
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
（四）生物芯片技术
将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织 等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上 在一定的条件下进行生化反应。 用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果， 通过特定的仪器读取与收集数据，并用软件进行数据 分析，从而判断样品中靶分子的种类和数量。
Staphylococcus aureus
G- Neisseria meningitidis Escherichia 7coli
（二）病原菌的分离培养与鉴定
inoculation and identification for isolation
临床标本
clinical specimen 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
（三）病原菌抗原的检测
原理： 细菌或其抗原成分（未知）＋特异性抗体（已知） 肉眼可见结果或可检测的信号
适用于：细菌培养不易成功，患者使用了抗生素 常用方法：
凝集试验（玻片、协同和乳胶等） 免疫标记技术 （酶、荧光素、同位素） 病原菌（抗原）核酸的检测(见分子生物学诊断）
collection and transportation of specimen
避免杂菌污染
标本的采集和送检六原则
不同期不同标本 用抗生素以前
采集病变明显部位
标本必须新鲜
运送注意保存
细菌感
（二）病原菌分离培养与鉴定：形态学检查
不染色检查法 压滴法 悬滴法 暗视野显微镜法
检查用仪器 普通光学显微镜 light microscope 暗视野显微镜 dark-field microscope 荧光显微镜 fluorescence microscope ……
Medical Microbiology and Parasitology
Chapter 6 Methods for Identification
and Principle of Prevention and cure of Bacterial Infection
Deptertment of medical Microbiology and Parasitology
生化试验
肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应
13
细菌的生化反应
糖发酵试验
H2S 试验
枸橼酸盐利用实验
抗生素敏感性试验
Antimicrobial susceptibility test
最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC） 最低杀菌浓度（minimum bactericidal cencentration，MBC）
2
细
菌
感
染
的
检
16SrRNA序列分析
测
生物芯片技术
生化模式转变为数学模式
自动微生物鉴定和药敏分析系统
细菌感染的检查方法
一、细菌学诊断
• 标本的采集与送检 • 病原菌的分离培养与鉴定 • 病原菌抗原的检测
二、血清学诊断
有凝集试验、ELISA、沉淀试验、中和试验等。
三、分子生物学诊断
（一）标本采集与送检
抗生素连续梯度法（E-test法）
将稀释法和扩散法的原理相结合，使用预先设定的 稳定且连续的抗菌药物浓度梯度，采用琼脂培养基培养 以确定不同抗菌药物对微生物的最低抑菌浓度（MIC）。
16
自动微生物鉴定及药敏分析系统
将培养基上分离的可疑致病菌配制成纯菌液，放入自 动微生物鉴定及药敏分析系统中，通过计算机自动扫描、 读数、分析、最后报告鉴定及药敏结果。
摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社
17
自动微生物鉴定及药敏分析系统
微生物数码鉴定原理
系统组成
计算并比较数据库内每
个细菌条目对系统中每
个生化反应出现的频率
总和
自动微生物鉴
药敏检测原理
定及药敏分析
微型化的肉汤稀释试验
系统
根据CLSI标准得到相应敏
感度：敏感、中度敏感和
耐药
测试卡（板）、菌液接 种器、培养和监测系统 、数据管理系统
inoculation for isolation
挑取单菌落
pick up single colony
纯培养
pure culture
鉴定(成分检测）
identification
分离培养最重要的是得到单菌落！
三划线法分离单菌落 three streaks
agar plate
细菌的菌落
Bacterial colonies
.
CONTENTS KEY TERMS
一、细菌学诊断 • 标本的采集与送检 • 病原菌的分离培养
与鉴定 • 病原菌抗原的检测 二、血清学诊断 三、分子生物学诊断
• Intrinsic resistance
• Acquired resistance
• Biochemical mechanisms of bacterial drugresistance
染色检查法 革兰染色法 Gram’s stain 抗酸染色 acid-fast stain 特殊染色 special stain 荧光染色 fluorescence stain
直接涂片镜检标本： 脓性分泌物、米泔水样粪 便、痰液、分离培养物 分离培养物涂片镜检
（2）形态学检查:染色法
革兰染色 抗酸染色 荧光金胺染色 特异性荧光抗体 其他 特殊染色