卵磷脂的提取

生命科学与技术系

生化技术综合实验报告

设计〔论文〕题目鸡蛋中卵磷脂的提取与鉴定

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电子

指导教师

电子

年月

摘要

卵磷脂是甘油、胆碱、磷酸、饱和及不饱和脂肪酸组成的一种磷脂类物质，它是构成细胞膜、核膜、质体膜等生物膜的本成份、研究发现卵磷脂具延缓衰老、促进神经传导、提高大脑活动、增强记忆力，促进脂肪代谢、防止出现脂肪肝、降低血清胆固醇等方面的作用。被英国科学家喻为“健脑的黄金、养心的极品〞。在西方国家卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素〞。卵磷脂在动植物体内分布广泛．其中以蛋黄中含量最为丰富。

卵磷脂按照其纯度的上下，一般分为 PC50、PC 60 、PC 70、PC80、PC 90、PC95等产品形式。最高可以提纯到98%，因为其纯度越高，氧化性能越强，故提纯到98%的卵磷脂需要做氢化处理。然后保存。未经过氢化处理的卵磷脂，一般要求在充氮的密封容器中。

纯洁的卵磷脂常温下为一种无色无味的白色固体，由于制取或精制方法、储存条件不同而呈现淡黄色至棕色。

利用95％乙醇在蛋黄溶液里进展浸提取，再参加乙醚过滤，参加一定量的丙酮在旋转枯燥仪器中把乙醇蒸发出来，取溶胶性的物质，参加丙酮冲洗除杂，冲洗屡次取得粗品，让后再参加无水乙醇溶解，参加金属沉淀剂进展精提取，取出少量精品，在碱性条件下溶解，分别用钼酸铵，斐林试剂，滤纸，氢氧化钠，对卵磷脂进展定性检测

关键词：蛋黄卵磷脂；提取；纯化；鉴定。

卵磷脂的提取与鉴定

卵磷脂(lecithin) 是一种含磷的类脂类生理活性物质, 同时又是一种天然外表活性剂 [1～2], 化学名称为磷脂酰胆碱，它是构成细胞膜、核膜、质体膜等生物膜的根本成份，空间构造的卵磷脂分子是由一个极性的“头部〞(甘油和胆碱磷酸脂局部) 和两条非极性的“尾巴〞(两个依附于甘油主框架上的脂肪酸) 组成, 它是典型的两性电解质 [3]主要集中在大脑、神经系统、免疫系统及心、肝、肾、生殖腺等重要器官内) ,是人体必需的胆碱和必需脂肪酸的重要来源[4] 纯洁的卵磷脂常温下为一种无色无味的白色固体，由于制取或精制方法、

储存条件不同而呈现淡黄色至棕色。

目前, 我国已经有10余家企业生产大豆卵磷脂, 而且均是小规模的生产装置, 还未形成工业化生产规模, 技术水平也落后于世界先进水平 [5], 生

产蛋黄卵磷脂的厂家那么更少。国内的卵磷脂产量远远不能满足市场需要,

因此大局部卵磷脂特别是高纯度卵磷脂仍然依靠进口。动物性原料中蛋黄含卵磷脂最多, 达干物质总重的8%～10%。

一．实验目的意义：

1.1掌握卵磷脂的提取方法及其鉴定方法，对卵磷脂进展定性检

测，了解卵磷脂的性质，

1.2掌握离心枯燥技术，熟练应用提纯技术

1.3 掌握抽滤等的根本操作

二．实验原理

1.1卵磷脂在脑、神经组织、肝、肾上腺和红细胞中含量较多。卵磷脂易溶于乙醇、乙醚等脂溶剂，可利用此溶剂提取。由于卵磷脂不溶于丙酮，可以用丙酮屡次冲洗除去一局部杂质，金属离子复合沉淀法进展精提纯，新提取的卵磷脂为白色蜡状物，新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。甘油与硫酸氢钾共热，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用，生成黄色的磷钼酸沉淀；胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。这样通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进展鉴定。

三．实验材料和方法

1试验材料与试剂

新鲜鸡蛋、无水乙醇、95％乙醇、乙醚、丙酮、甲醇.会属沉淀剂(ZnCI2)、丙酮、蒸馏水、溴的四氯化碳、氢氧化钠、红色石蕊试纸、钼酸铵、硫酸氢钾

2试验仪器

三角瓶、烧杯、试管、真空冷冻枯燥箱、磁力搅拌器、玻璃棒、

电子天平、冷冻枯燥器、冰箱、离心机、水浴锅试管夹、量筒、滤布、漏斗。

3试验方法

〔1〕蛋黄卯磷脂的粗提、

首先将鸡蛋打破，称量鸡蛋300克除去蛋白，，将蛋黄放人干净的带塞的三角瓶中．在称量蛋黄

参加95％乙醇(用量12m]，g)浸取，于磁力搅拌器搅拌60min后，静置15min．然后加

人乙醚(用量为乙醇用量的1／3)，搅拌15min后静置15min，过滤三次，将

滤液收集放旋转蒸发器中低温、减压浓缩

．

参加一定量的丙酮除杂．卵磷脂即沉淀出来．过滤，用丙酮冲洗几次，至冲洗液无色．即得蛋黄卯磷脂粗晶存放于冰箱里保存。[6]

图一，过滤除杂

图二，卵磷脂的粗提取

(2) 蛋黄卵磷脂的纯化

金属离子复合沉淀法

把卵磷脂粗品溶于无水乙醇中．参加金属沉淀剂40％的zncl2水

溶液．待生成沉淀后，别离出沉淀物．而后参加丙酮洗涤，然后放于真空中冷冻枯燥仪中枯燥．最终得到精制的卵磷脂．[7]

更改试剂，由于实验室里没有zncl2，所以用znso4代替，由于丙酮不能除去znso4，所以在过滤后采用氯仿把卵磷脂溶解沉淀的方法，离心除去znso4，然后在真空冷冻枯燥仪中枯燥得到纯品。

图三，离心提纯别离

〔3〕、卵磷脂的鉴定

〔3.1〕三甲胺的检验：

取枯燥试管一支，参加少量提取的卵磷脂以及2～5mL 10% 氢氧化钠溶液，放沸水浴试管中加热10min，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味。将加热过的溶液过滤，滤液供下面检验。

〔3.2〕、脂肪酸的检测：

取棉花上固体少许，滴加20%NaOH一滴，另加5mL蒸馏水，观察结果。

〔3.3〕、磷酸的检验：

取干净试管一支，参加10滴上述滤液和5～10滴95%乙醇溶液，然后再参加5~10滴钼酸铵试剂，观察现象；最后将试管放入热水浴中加热5～10min，观察有何变化。

〔3.4〕、甘油的检验：

取干净试管一支，取1％CuSO4,两滴20％NaOH,无沉淀，即加1mL水解液，振摇。四．实验结果〔现象〕

1.4.1卵磷脂粗提结果：

500mL烧杯重166.96g,三百克鸡蛋去壳后于烧杯中重244.12g，鸡蛋黄重量77.16g。

实验完毕后以小烧杯盛装，小烧杯重23.94g，加粗品卵磷脂后重29.11g，得粗品卵磷脂共5.17g。占总中量的6.7％。

1.4.2 卵磷脂精提结果：

烧杯总重71.25g，取出卵磷脂后，净重69.15g，净取得卵磷脂2.1g。占粗提取比例40.62％，占鸡蛋黄总重比例2.72％。

1.4.3检测结果：

a、三甲胺的检验结果：管口红色石蕊试纸变蓝，于管口围其气味有浓重的鱼腥味

b、脂肪酸的检测结果：脂肪酸碱性水解，成细小颗粒。

c、磷酸的检验结果：加钼氨酸后溶液后显黄色，在水浴锅水浴加热后溶液显蓝色。

d、甘油的检验结果：生成砖红色沉淀。

五．分析讨论

1.1实验考前须知

实验过程中乙醇、氯仿、丙酮和乙醚用量一定要控制好，在使用这些有毒的试剂一定要做好平安准备，防止实验过程中中毒的发生，在做综合实验的所有过程中必须把每一步所用的试剂清晰的列出来，