细胞培养方法介绍

开始细胞培养

此程序基于200mL Thermo Scientific

HyQShpere微载体旋动培养。推荐以每升

20克为起始，因此对于200mL的培养体

系，需要用4 g微载体。

1.为了避免细胞附着在玻璃器皿上，需要用硅

树脂溶液进行处理。硅化时用Sigmacote ®，

货号SL-2，或同等产品。根据厂商的说明，

概括如下。

2.将4g 微载体重悬于细胞培养级水

（SH30259）或磷酸盐缓冲液（PBS），

无钙镁离子（SH30526），然后121℃高

压灭菌至少30分钟。

3.去除高压灭菌后的液体，如果需要可冲洗

一下，然后将微载体重悬于培养基中，置

于培养箱中平衡至少60分钟。

4.细胞接种量一般在1.5-4.0×105个细胞/毫

升范围内，对于200 mL的培养体系，使用

2.0×105个细胞/毫升的接种密度，需要

4.0×107个细胞。

5.将细胞加入到预热的微载体-培养基悬液中，加入预热的培养基至体积200 mL。 利用HyQSphere 微载体进行细胞培养

此方法适用于HyQSphere FACT 102L, CGEN 102L, Pro-F 102L, P Plus 102L 和P 102L 微载体。a.对于高接种率的细胞，根据细胞类型确定能够使细胞达到均匀分布的最佳搅拌速率。•在整个培养期间，以45-60 rpm的转速旋转转瓶（使用MDCK，Vero，原代CEFs和其他稳健的传代细胞系时）。b.对于低接种率或者使用不含动物蛋白培养基的培养物，培养初期使用间歇式搅拌，在保持微载体悬浮的情况下，尽量缓慢搅拌。•例如，以45-60rpm的转速搅拌1分钟，停7-10分钟。避免细胞缺氧。细胞贴壁后，用预热的培养基将体积补足。6.根据细胞生长特点需要进行维持培养。有时可能需要进行换液。 a.使用洁净的玻璃器皿。

b.使用Sigmacote产品，将所有将要暴露

于微载体的玻璃器皿的表面进行充分的

包被处理。

c.控干玻璃器皿中多余的Sigmacote，使其

风干（一般18-24个小时）。

d.再次洗涤和冲洗玻璃器皿，最后用去离

子水充分冲洗干净。