抗体的系统性检测方法
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获得 了 １ ９ ８ ４年 的诺 贝尔医学和 生理学 奖 。目前 单克 隆抗体 的
研究 已深入到医学 和生 物学的各个 领域 ， 成为 一种必 不可少 的
２ 特异 性检 测
抗体 的特 异性高 ， 它 的识别 能力 就强 ， 经 典 的抗 体特 异性
检测方法 有有 双向免疫扩散 、 免疫 电泳等方法 。免疫磁珠 技术
四川生 理科 学 杂志 ２ ０ １ ３ ； ３ ５ （ ３ ）
１ ２ １
抗 体 的 系统 性 检 测 方 法 ＊
杨靖 孙卫 兵。 邝 玉。 △
（ １ ．湖 北 医 药学 院基 础 医学 院微 生物 学教研 室 ， 湖 北 十堰 ４ ４ ２ ０ ０ ０ ； ２ ．四川 Ｉ 大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室， 四川 成都 ６ １ ０ ０ ４ １ ； ３ ．湖 北省 十堰 市 西苑 医院呼 吸 内科 ， 湖北 十 堰 ４ ４ ２ ０ ０ ０ ）
优 生优 育等方 面均有 不可替代的 重要作 用 。虽然抗体 的制备技 术 日趋完善 ， 但用 于诊 断和 治疗的抗体 必须符合 高纯度 、 高效价、 高
可 用性 的要 求 ， 对抗体 的制备 、 分 离和鉴 定就显得 尤为重要 。本文简要 阐述 了抗体 工程 药物 制备 中对抗体 成分的 系统性检测 方法 ，
Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ａ ｄｖ ａ ｎｃ ｅ ｏ ｆ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍａ ｔ ｉ ｃ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｏ ｆ ａ ｎｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙ
Ｙａ ｎ ｇ Ｊ ｉ ｎ ｇ ，Ｓ ｕ ｎ Ｗｅ ｉ － ｂ ｉ ｎ ｇ ３ ，Ｋｕ ａ ｎ ｇ Ｙｕ △
（ １ ． Ｄｅ ｐ ａ ｍｎ ∞ｔ ｏ ｆ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｈｕ ｂ ｅ ｉ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ，Ｈｕ ｂ ｅ ｉ Ｓ ｈ ｉ ｙ ａ ｎ ４ ４ ２ ０ ０ ０ ； ２ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｗ ｅ ｓ ｔ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ｏ ｆ Ｐ ｒ ｅ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｎ ｓ ｉ ｃ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ，Ｓ ｉ ｃ ｈ ｕ ａ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｓ ｉ ｃ ｈ ｕ ａ ｎ Ｃ ｈ ｅ ｎ ｇ ｄ ｕ ６ １ ０ ０ ４ １ ； ３ ． Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｍ￣ ｔ ｆ ｏ Ｒｅ ｓｐ ｉ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ，Ｘｉ ｙ ｕ ａ ｎ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ，Ｈｕ ｂ ｅ ｉ Ｓ ｈ ｉ ｙ ｎ ａ ４ ４ ２ Ｏ ０ Ｏ ）
工具 ， 具有极 为重要的理论研究 价值 和实用 价值 ］ 。在过去 的 几十年 里 ， 对抗 体的大量需求就 要求我 们对新 的抗体 纯化策 略 进行探 索 ， 学术 界和产业上 的进 步共 同推动 了抗体分 离纯化 技 术 的发 展 。对制备 的抗 体进 行 系统 的鉴 定是一 项 尤为 重要 的 工作 ， 判断所得抗 体 质量 优 劣的 主要指 标包 括 对抗 体 的纯 度、
苗评价等 领域 的关 键技 术 ［ 。多 克 隆抗 体 来 源 广 泛 ， 制 备 容 易， 作用 全面 ， 但其特异性 不高 、 易发生交叉 反应 等缺点 也是显
而易见 的。通过小 鼠杂 交瘤 技术 生产 的单 克隆 抗体 作 为第 二 代抗 体制 备 技 术使 规 模化 制备 高 特异 性 、 均 质 性抗 体成 为 可
可采 用 等 电 聚 焦 电泳 （ Ｉ ｓ ｏ ｅ ｌ ｅ ｃ －ｔ ｒ ｉ ｅ ｆ ｏ ｃ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ， Ｉ Ｅ Ｆ ） ［ 。此时 ， 纯抗 体表现为靠拢 的 ３ ～７条带 ， 这是 由于纯抗 体糖化 的异质性所 致 ， 而 宿主 的污染 则表 现为 Ｐ Ｈ ５ ～８处 背景 的增强或散 在的模糊 的多条带 。
摘 要 ２ １ 世纪随着现代生物技术、 信息技术在生物医学工程学等研究领域的不断深入 ， 以细胞工程技术和基 因工程技术
为主体 的抗体 工程 药物 近年来取得 了突破 性进展 ， 其应 用 已涉及 医学、 农 业、 食 品、 环境等 众 多领域 。当前生物 医药正在成 为发展
潜 力无 限的产业 ， 而生物 医药领 域 中发展最 快的是 抗体工程 药物 ， 在基础研 究、 蛋 白纯化、 环 境与食 品监测 、 疾病诊 断预 防及 治疗和
包括 纯度检 测 、 特异性检测 、 亲和 力检 测、 效价检 测等 ， 并对抗 体这种特殊蛋 白的常用定量检 测方 法进行 了比较 。
关键词 ： 抗体； 鉴定 ； Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ； Ｌ ｏ ｗ ｒ ｙ 法； Ｂ Ｃ Ａ法
特异性抗 体制备 和检 测技术在 医学 临床实践 、 工农 业生 产 及生物制 品质量控制 中意义重大 ， 是疾病 预 防、 诊 断、 治 疗和疫 下， 在检 测抗体纯 度 时 ， 多 采用 Ｓ ＤＳ － 聚丙 酰胺 凝胶 电泳 （ Ｓ Ｄ Ｓ － Ｐ ＡＧＥ ） ， 如果 目的蛋 白条带未发现 任何 杂蛋白带则可认 为其 纯 度８ Ｏ ～９ ５ 。Ｓ ＤＳ － Ｐ ＡＧＥ可 鉴定其 它杂 蛋 白的污 染而 不能 检出宿主 污染 的程度 。在上样量大 的情况 下 ， 如未发现任何 杂蛋 白带则可认 为 的纯 度大于 ９ ５ 。为检 查宿 主 Ｉ ｇ污 染 ，
能， 单 克隆抗体 的制 备技 术包 括嵌 合抗 体技 术 、 噬菌 体表 面 展 示技术 、 核糖体表 面展示技术等 。 由于单 克隆抗 体在生 命科 学
领域 的 巨大 贡献 ， １ ９ ８ ４年 Ｃ Ｍｉ ｌ ｓ ｔ ｅ ｉ ｎ 、 Ｇ Ｋｏ ｈ ｌ ｅ ｒ 和 Ｎ．Ｊ ｅ ｒ ｎ ｅ
获得 了 １ ９ ８ ４年 的诺 贝尔医学和 生理学 奖 。目前 单克 隆抗体 的
研究 已深入到医学 和生 物学的各个 领域 ， 成为 一种必 不可少 的
２ 特异 性检 测
抗体 的特 异性高 ， 它 的识别 能力 就强 ， 经 典 的抗 体特 异性
检测方法 有有 双向免疫扩散 、 免疫 电泳等方法 。免疫磁珠 技术
四川生 理科 学 杂志 ２ ０ １ ３ ； ３ ５ （ ３ ）
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抗 体 的 系统 性 检 测 方 法 ＊
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（ １ ．湖 北 医 药学 院基 础 医学 院微 生物 学教研 室 ， 湖 北 十堰 ４ ４ ２ ０ ０ ０ ； ２ ．四川 Ｉ 大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室， 四川 成都 ６ １ ０ ０ ４ １ ； ３ ．湖 北省 十堰 市 西苑 医院呼 吸 内科 ， 湖北 十 堰 ４ ４ ２ ０ ０ ０ ）
优 生优 育等方 面均有 不可替代的 重要作 用 。虽然抗体 的制备技 术 日趋完善 ， 但用 于诊 断和 治疗的抗体 必须符合 高纯度 、 高效价、 高
可 用性 的要 求 ， 对抗体 的制备 、 分 离和鉴 定就显得 尤为重要 。本文简要 阐述 了抗体 工程 药物 制备 中对抗体 成分的 系统性检测 方法 ，
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而易见 的。通过小 鼠杂 交瘤 技术 生产 的单 克隆 抗体 作 为第 二 代抗 体制 备 技 术使 规 模化 制备 高 特异 性 、 均 质 性抗 体成 为 可
可采 用 等 电 聚 焦 电泳 （ Ｉ ｓ ｏ ｅ ｌ ｅ ｃ －ｔ ｒ ｉ ｅ ｆ ｏ ｃ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ， Ｉ Ｅ Ｆ ） ［ 。此时 ， 纯抗 体表现为靠拢 的 ３ ～７条带 ， 这是 由于纯抗 体糖化 的异质性所 致 ， 而 宿主 的污染 则表 现为 Ｐ Ｈ ５ ～８处 背景 的增强或散 在的模糊 的多条带 。
摘 要 ２ １ 世纪随着现代生物技术、 信息技术在生物医学工程学等研究领域的不断深入 ， 以细胞工程技术和基 因工程技术
为主体 的抗体 工程 药物 近年来取得 了突破 性进展 ， 其应 用 已涉及 医学、 农 业、 食 品、 环境等 众 多领域 。当前生物 医药正在成 为发展
潜 力无 限的产业 ， 而生物 医药领 域 中发展最 快的是 抗体工程 药物 ， 在基础研 究、 蛋 白纯化、 环 境与食 品监测 、 疾病诊 断预 防及 治疗和
包括 纯度检 测 、 特异性检测 、 亲和 力检 测、 效价检 测等 ， 并对抗 体这种特殊蛋 白的常用定量检 测方 法进行 了比较 。
关键词 ： 抗体； 鉴定 ； Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ； Ｌ ｏ ｗ ｒ ｙ 法； Ｂ Ｃ Ａ法
特异性抗 体制备 和检 测技术在 医学 临床实践 、 工农 业生 产 及生物制 品质量控制 中意义重大 ， 是疾病 预 防、 诊 断、 治 疗和疫 下， 在检 测抗体纯 度 时 ， 多 采用 Ｓ ＤＳ － 聚丙 酰胺 凝胶 电泳 （ Ｓ Ｄ Ｓ － Ｐ ＡＧＥ ） ， 如果 目的蛋 白条带未发现 任何 杂蛋白带则可认 为其 纯 度８ Ｏ ～９ ５ 。Ｓ ＤＳ － Ｐ ＡＧＥ可 鉴定其 它杂 蛋 白的污 染而 不能 检出宿主 污染 的程度 。在上样量大 的情况 下 ， 如未发现任何 杂蛋 白带则可认 为 的纯 度大于 ９ ５ 。为检 查宿 主 Ｉ ｇ污 染 ，
能， 单 克隆抗体 的制 备技 术包 括嵌 合抗 体技 术 、 噬菌 体表 面 展 示技术 、 核糖体表 面展示技术等 。 由于单 克隆抗 体在生 命科 学
领域 的 巨大 贡献 ， １ ９ ８ ４年 Ｃ Ｍｉ ｌ ｓ ｔ ｅ ｉ ｎ 、 Ｇ Ｋｏ ｈ ｌ ｅ ｒ 和 Ｎ．Ｊ ｅ ｒ ｎ ｅ