第四章 海洋真菌

第四章海洋真菌

一、概况

海洋真菌是一类具有真核结构，能形成孢子，营共生、腐生或寄生生活的海洋生物。

一些来源于海洋的称为专性海洋真菌；另一些来源于陆地或淡水，但能在海洋环境中生长与繁殖者，称为兼性海洋真菌。

许多真菌，具有像藻类那样多种多样的繁殖方式，既有产生无性抱子进行繁殖的，也有产生能运动的有性配子进行有性生殖的。

通常为菌丝状或多细胞，只有酵母菌在发育阶段中有单细胞出现。营养方式除黏菌为摄食外，多为吸收式。

●海洋真菌包括海洋酵母菌和海洋霉菌。海洋酵母呈圆形、卵形或椭圆形；内有细胞核、液泡和颗粒体物质，为单细胞真核

生物。

●海洋霉菌是生长在营养基质上能形成绒毛状，蜘蛛网状或絮状菌丝体的一类真菌，亦是海洋丝状真菌的通称。

二、分类

海洋真菌种类很少，仅为陆地的1％，总共不超过500种。包括丝状高等海洋真菌209多种，海洋酵母菌类约177种，低等海洋藻状菌类约70种。丝状真菌包括子囊菌类（As－comycetes）、担子菌类（Basidiomycetes）和半知菌类（Deuteromycetes）等。海洋酵母菌也主要归属于上述三类中。藻状菌类大多属于水霉菌目、链壶菌目，以及霜霉菌目等。

三、分布

海洋真菌广泛分布于海洋环境中，从潮间带高潮线或河口到深海，从浅海沙滩到深海沉积物中都有它们的踪迹。

海洋真菌的分布按海洋从上到下可被分为几个垂直带：①由海面到200m深处为第一带，目前报道的真菌大多分离自这一带；②200 - 2000m为第二带；③2000 - 4000m为第三带；④4000 - 6000m为第四带；⑤6000m以下为第五带。

四、生态习性

大多数海洋真菌依赖栖住某种基物而生活，只有少数真菌不依赖基物而自由生活。根据海洋真菌的栖生习性可划分为如下几种生态类型：

1. 木生真菌

木生真菌是能强烈地分解木材和其他纤维物质、数量最多的一类高等海洋真菌。

由于木质在海岸和深海地区都是很普遍的基质，因此在海洋环境条件下，木生真菌也是丝状高等海洋真菌中分布最广的。

2. 附生藻体真菌

在海洋真菌中，约有1/3的种与藻类有关系，其中以子囊菌类居多。目前大约有几十种子囊菌是海藻的寄生菌，其中可寄生在褐藻和红藻藻体上的各有十几种，但寄生在绿藻上的仅有数种，这可能同大多数绿藻寿命较短有关。子囊菌对藻体的寄生侵染可引起多种藻类病害。

3. 红树林真菌

红树是热带、亚热带潮间带盐泽地的挺水陆生植物。栖生在红树林的海洋真菌多半是腐生菌，其中有子囊菌类20余种，半知菌类约20种，担子菌类很少。

浸在海水中的红树树干、枝条和根部的表皮易被真菌侵入而造成腐烂，而埋在泥中的根部，则不易受真菌侵害；海洋真菌能分解红树叶片。

在红树林植物组织内部也正常地生长着微生物，称为内生菌（endphytes)。内生菌是指生长在健康植物组织或细胞内部、不引起植物出现病症的微生物。海洋植物内生菌是寻找新的化学结构和生物活性物质的主要来源。

4. 海草真菌

海草是生活在沿岸海区底部的有根开花植物。海草真菌数量较少。某些海草能被真菌严重侵染，如网黏菌属真菌引起海草细胞的光合作用组织解体，使北美、欧洲沿岸的大叶藻场大面积衰退，造成了严重的后果。

5. 寄生动物体真菌

此类真菌可寄生在动物外骨骼、壳等处。海洋真菌在分解动物体中的纤维素、甲壳素、蛋白质和碳酸钙等过程中起重要作用。低等海洋真菌是引起海洋鱼类和无脊椎动物病害的重要致病菌。

如研究表明链壶菌（La－genidium sp.）、镰刀菌（Fusarium sp.）是海产对虾真菌病的病原菌；绞纽伤壳菌(Ostracoblabe implexa）是欧洲属牡蛎壳病病原菌；霍氏鱼醉菌（Ichthyophonushoferi）可使多种海产鱼类致病。

五、海洋真菌的分离和培养

海洋真菌的分离需要无菌环境，特别是要避免空气中陆地微生物的污染。因此，真菌的分离操作要在无菌室或超净台中进行，实验桌面最好用75%乙醇擦过，操作时要靠近酒精灯或煤气喷灯火焰。

●样品采集的范围包括海水和海底沉积物、浸泡于海水中的木头及其他纤维物质、浮木、诱饵木片、植物根部、红树林、藻

类、海草、含有孢子的海水泡沫、海洋动物等。

●对于海水和海泥，可用采样器采集

2. 样品的保存

采集的样品最好立即或尽快进行目的菌的分离，如果没有条件，则要将样品暂时保存于4一8℃的低温环境下。

3. 海洋真菌的分离和培养

①培养基成分

a. 人工海水。分离培养基制备所用的水可以是陈海水或人工海水（artificial sea water)。

一般人工海水代替天然海水能够方便实验室条件下对真菌的培养，特别对海洋真菌的生理学研究。

b.通用的分离培养基

葡萄糖l0g，蒸馏水400m1，蛋白胨2g，人工海水600m1（pH为7.5) （或陈海水），酵母膏1g。

用锥形瓶分装后于115℃灭菌25min，冷却待用。如果要制备固体培养基，则加1.5%--2.0%的琼脂注意要加人适当的抗生素及生长抑制剂。

c.其他分离培养基

与陆生真菌分离培养基大致相同，只是用海水来配制。

②分离培养基的制备

●目前已开发了数百种培养基来进行真菌的分离和保藏。只要稍微改变一下培养基的配方，就能用来进行海洋真菌的分离。

●酸性的培养基较适合真菌，但是很多细菌也可以生长。所以在真菌选择性培养基中往往要加入各种抗生素或其他细菌的生

长抑制剂。

4. 常用的抗生素和抑制剂

①有机酸

0.5%苹果酸或0.1%乳酸均可有效抑制细菌的生长，一般要在培养基灭菌后加人。需要注意的是如果pH过低，有些培养基则不会凝固。

②抗生素

主要有以下三大类：链霉素、新霉素和卡那霉素，这3种抗生素主要抑制革兰阴性杆菌的生长，使用浓度从30 - 2666mg/L, 一般用100一200mg/L, 或0.03％（链霉素），以上三种抗生素耐热性差，要在灭菌后培养基温度下降到55℃左右再加人；

青霉素，抑制革兰阳性杆菌和革兰阴性球菌细胞壁的合成，使用浓度为12.5-1500mg/L,灭菌后加人，常与四环素同时使用，需要注意的是青霉素不适合用于高酸性的培养基。

③其它

结晶紫，抑制革兰阳性菌，使用浓度为l0mg/L；亚碲酸钾，抑制革兰阳性菌，使用浓度为100mg/L；以上两者都可以和培养基一起灭菌。

④真菌生长抑制剂

虽然许多海洋真菌在人工培养基上都生长得十分缓慢，但是也有生长得很快的种类，如一些青霉和曲霉。为了抑制这些真菌的过快生长，我们可以在培养基中加入一些生长抑制剂。

●Dichloran是2,6一二氯一4一硝基苯胺的商品名称，主要用来抑制青霉和曲霉的快速生长，使用浓度为25mg/L。

●邻苯酚(o-phenylphenol)，主要用来抑制污染的木霉（Trichoderma）的快速生长，使用浓度为6mg/L 。

●牛胆汁（oxgall），完全抑制腐霉和疫霉的生长，部分抑制其他真菌和细菌的生长，常用浓度为0.5%或1.5%

●孟加拉红（Rose Bengal)，抑制细菌和其他真菌（如木霉）的快速生长，但对放线菌无效，使用浓度为30一700mg/L,孟加

拉红在有光的情况下对真菌有毒害，所以要将分离培养基放在黑暗中培养；

●脱氧胆酸钠（Sodium deoxy-cholate），一种阴离子去污剂，抑制真菌菌落的扩展，但不影响孢子的形成，使用浓度为1g/L。

5. 注意事项

①表面消毒

对于从海水中采集到的浮木或活组织，动物等，在分离之前最好进行表面消毒。一般是用无菌吸水纸将样品表面的水分吸干，然后用75％的乙醇擦拭或泡在其中约15min。然后可在解剖镜下观察子座形成的情况，或进行孢子的分离。

②富集

有些海水样品中真菌的含量较少，所以要进行浓缩或过滤。方法是用无菌的0.45um孔径的硝酸纤维素滤膜将海水过滤，然后直接将滤膜放在培养基上培养，或将滤膜上的沉淀洗下，悬浮在一定的培养液中，再涂布到培养基上。