野生软枣猕猴桃多糖抑菌作用

食 品 科 技

FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY

2012年 第37卷 第4期

提取物与应用

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野生软枣猕猴桃产于吉林省长白山区各县，每年8~9月成熟，是长白山区著名的经济野果之一，是珍贵的野生果中之王，被誉为“世界之珍果”[1]。据研究分析，野生软枣猕猴桃可以抑制易引起食品腐败的微生物生长，起到防腐保鲜的作用，同时它的多种保健作用，更能满足人们的健

收稿日期：2011-08-15 *通讯作者

基金项目：公益性行业(农业)科研专项(200903013)。

作者简介：郑煜焱(1976—)，女，博士，讲师，主要从事农产品深加工与转化理论及技术方面的研究工作。

康要求，避免化学防腐剂给人们身体健康造成的危害。已有研究[2-4]显示多糖具有抑菌作用，野生软枣猕猴桃果实中有丰富的多糖，目前国内对野生软枣猕猴桃果实的抑菌活性研究的报道近乎空白，有很广阔的开发潜力。本文旨在初探野生软枣猕猴桃多糖的抑菌活性，实验结果表明，其多

郑煜焱，杨 悦，刘晓禾，张春红*(沈阳农业大学食品学院，沈阳 110161)

摘要：利用实验室自制的野生软枣猕猴桃多糖，进行多糖的抑菌作用研究。结果表明，野生软枣猕猴桃多糖对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、根霉、黑曲霉、米曲霉、青霉、啤酒酵母均有抑制作用，且作用相当。随着多糖浓度的增大，抑制作用增强，最小抑制浓度在10~25 mg/mL 之间；对热带假丝酵母无抑制作用。温度和pH 值对野生软枣猕猴桃多糖的抑菌效果也有一定影响，温度越高，抑菌效果越明显，偏酸性的pH 值更有利于抑菌，在pH 值4~5范围内，野生软枣猕猴桃多糖抑菌效果较好。

关键词：野生软枣猕猴桃；多糖；抑菌作用；抑菌条件

中图分类号：R 285 文献标志码： A 文章编号：1005-9989(2012)04-0171-03

Antimicrobial activities of Actinidia arguta polysaccharides

ZHENG Yu-yan, YANG Yue, LIU Xiao-he, ZHANG Chun-hong *

(College of Food, Shenyang Agriculture University, Shenyang 110161)

Abstract: Make use of polysaccharides in Actinidia arguta in own laboratory, for the research experiment of its antimicrobial activities. The results showed that Actinidia arguta polysaccharides could inhibit the growth of all of the following microorganisms: Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphylosocus aureus, Rhizopus, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Penicillium sp. and Saccharomyces cerevisiae, and the effect is significant, the inhibiting effect enhances along with the increase of concentration of polysaccharides, the corresponding minimal inhibitory concentrations varied from 10 mg/mL to 25 mg/mL. However, no inhibitory effect on G. tropicalis was observed. Temperature and pH value also have certain effect on it, the inhibiting effect enhances along with the temperature up, partial acidic pH value conducive to enhance the inhibiting effect, in range of pH value 4~5, the inhibiting effect is better.Key words: Actinidia arguta; polysaccharides; antimicrobial activities; antimicrobial conditions

野生软枣猕猴桃多糖抑菌作用研究

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提取物与应用

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糖对几种常见致病菌确实有明显的抑制作用，为进一步开发和利用野生软枣猕猴桃资源提供理论和实验依据。1 材料与方法1.1 材料与设备

野生软枣猕猴桃：辽宁省本溪市；野生软枣猕猴桃多糖：实验室自制。

细菌：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )；真菌：根霉(Rhizopus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、青霉(Penicillium sp.)、热带假丝酵母(G.tropicalis)、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；由沈阳农业大学食品学院微生物实验室提供。

供试培养基：细菌3种菌株采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(BPA)，真菌6种菌株采用马铃薯培养基(PDA)。

滤纸圆片为直径6 mm、厚度1.5 mm的定性滤纸。

RE-52旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；5805高速冷冻离心机：INVESTMENT公司；DZF-6050真空干燥箱：上海沪粤明科学仪器有限公司；TU-1810紫外-可见分光光度计：深圳市凯铭杰仪器有限公司；HZP-150型全温振荡培养箱：上海精宏实验设备有限公司；BOXUN超净台：上海优浦科学仪器有限公司；HVE-50高压灭菌锅：HIRAYAMA公司；PB-10型pH计：Sartorius公司。1.2 实验方法

1.2.1 野生软枣猕猴桃多糖样品的制备

1.2.1.1 提取 取冷藏的野生软枣猕猴桃，融化后打成匀浆后，采用料水比1:6(m/v)加水，在80 ℃恒温水浴锅中搅拌浸提5 h。取出后纱布过滤、离心。将上清液旋转蒸发，浓缩至原体积的1/6，加入乙醇，使乙醇体积分数达到75%，静置6 h。离心后将沉淀依次用丙酮、乙醚和乙醇洗涤脱脂，真空干燥得粗多糖。

1.2.1.2 脱色 将制得的粗多糖采用料水比1:3 (以上述野生软枣猕猴桃果实计算)溶于水中，在pH8.0的条件下，加双氧水使体积分数达到50%，放入60 ℃的恒温水浴锅中加热5 h [5]。

1.2.1.3 脱蛋白 将脱色后的多糖溶液与1:8(m/v)的三氯乙酸-正丁醇等体积混合，振荡20 min后静置1 h，弃去上层有机层和中层蛋白层，保留下层多

糖溶液。此步重复操作3次[6]。

1.2.1.4 透析 自来水透析10 h，蒸馏水再透析10 h，每隔1 h换1次蒸馏水。

1.2.1.5 浓缩、干燥 将多糖溶液旋转蒸发，浓缩到最小体积后，真空干燥，得到的则为野生软枣猕猴桃多糖样品。

1.2.2 野生软枣猕猴桃多糖抑菌实验

1.2.2.1 培养基的制备 细菌培养基：牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g、琼脂15~20 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.2~7.4；霉菌及酵母菌培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂15~20 g，水1000 mL。 1.2.2.2 供试菌种的活化及菌悬液的制备 见参考文献[7]。

1.2.2.3 野生软枣猕猴桃多糖的溶解与稀释 取制备好的野生软枣猕猴桃多糖，溶解稀释，得到5个浓度：100、50、25、10、5 mg/mL。

1.2.2.4 抑菌测定法 采用琼脂扩散滤纸片法测定抑菌圈直径，采用菌落直接观察法测定最小抑制浓度。方法见参考文献[7]稍有改动，此文用的滤纸片直径为6 mm，每个平皿贴7片。结果见表1和表2。

1.2.2.5 不同条件对野生软枣猕猴桃多糖抑菌效果的影响 (1)不同温度对野生软枣猕猴桃多糖抑菌效果的影响。分别移取10 mL质量浓度为100 mg/mL的野生软枣猕猴桃多糖供试液于4个小烧杯中，放入直径为6 mm的滤纸片(121 ℃条件下20 min干热灭菌)，在25、50、75、100 ℃水浴中加热浸泡1 h。以枯草芽孢杆菌为代表菌，用琼脂扩散滤纸片法测定不同温度下的抑菌圈直径，重复该操作3次，结果见表3。

(2)不同pH值对野生软枣猕猴桃多糖抑菌活性的影响。取7个小烧杯，分别移取10 mL质量浓度为100 mg/mL的野生软枣猕猴桃多糖供试液，用0.1 mol/L的HCl和0.1 mol/L的NaOH配制成pH值为3、4、5、6、7、8、9的不同溶液。放入上述处理过的滤纸片，浸泡30 min。以枯草芽孢杆菌及米曲霉为代表菌，比较不同pH值对野生软枣猕猴桃多糖抑菌活性的影响，重复操作3次，结果见表4。2 结果与分析

由表1、表2可知，野生软枣猕猴桃多糖对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、根霉、黑曲霉、米曲霉、青霉、啤酒酵母均有一定的抑制效果，且作用相当；随着多糖质量浓度