第十八章 HPLC.
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29
2. 弱极性键合相：
醚基和二羟基等键合相 用于反相或正相色谱，应用较少
3. 极性键合相：
常用氨基﹑氰基键合相（氰乙硅烷基 ≡Si(CH2)2CN)键合硅胶 一般用于正相色谱,有时也用于反相色谱
特殊用途的键合相
30
（二）键合相的性质和特点
1. 键合反应
硅氧烷（Si－O－Si－C）型：氯硅烷与 硅胶进行硅烷化反应
分离柱 抑制柱
25
离子色谱的应用
阴离子分析:
双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱 (250×3mm), 流动相：0.003mol/L NaHCO3 / 0.0024 mol/L Na2CO3，流量: 138 ml/h。 七种阴离子在20min内基本上得到完全分离， 各组分含量在3～50 ppm。
氨来自百度文库酸分析仪
1、溶质的分子结构（极性）---K→ k
极性越弱，疏水性越强，k 越大，tR 也越大。
同系物碳数越多，极性越弱，k 越大； 引入极性取代基，降低疏水性，k 变小。
2、固定相---K，Vs → k
键合烷基碳链的延长，疏水性随而增加， k 也增大。 硅胶表面键合烷基的浓度(含碳量：C％, Vs)越 大，则溶质的 k 越大。
17
离子抑制色谱法
H3PO4 HAc, NH3, 乙二胺
用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调 节流动相的pH，抑制有机弱酸、弱 碱的离解(中性分子极性小)，增加 疏水缔合作用，使k 变大。峰对称。
适用于 3≤pKa≤7的弱酸、 7≤pKa≤8的弱碱
18
（三）反相离子对色谱法 paired ion chromatography；PIC ion pair chromatography；IPC
S相
离子对
极性小易进入S相
通式
+ B +A
(B + A ) m
( B+ A )s
[B A ]s [B A ]s A m A m KB EBA B [B ]m [B ]m [A ]m B B
C=B·[B+]
提取常数
20
适用范围和离子对试剂的选择
余硅醇基。
32
3. 键合相的特点
使用过程中不流失；
注意
化学稳定性好；
适于梯度洗脱；
载样量大
注意： 流动相的pH一般应在2～8，否则会引 起键合基团脱落或硅胶溶解； (也有适用宽pH范围2～11的键合相)BDH。
33
二、BPC 的流动相
对流动相的要求：
①与固定相不发生化学反应。
②对试样有适宜的溶解度，使 k 1~10 。
③与检测器相适应。例如用UV检测器时，
选溶剂截止波长小于检测波长。
④纯度高，粘度小。低粘度流动相如甲醇﹑
乙腈等可以降低柱压，提高柱效。
34
（一）流动相对分离的影响
n α -1 k2 R 4 α 1 k2
见p403 图19-7
n 由色谱柱（固定相）性能决定，---柱效
α 主要受溶剂种类的影响，
---选择性
k 主要受受溶剂配比的影响。---洗脱能力
35
（二）流动相的强度和选择性
1. 溶剂的极性与强度 BPC 类别 正相 反相 极性参数 溶剂 洗脱 表20-1,20-2 极性 能力 P’大 强 (18-2)式 强 S小 弱 p425 溶剂 强度 大 (强) 保留 行为 K 小
16
3、流动相
极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的 k 越大
溶剂种类：水为弱溶剂，
甲醇、乙腈为强溶剂 溶剂比例：水的比例增加，使 k 增大 中性盐的加入：使中性溶质的 k 增大 一般RP-HPLC
pH：影响弱酸、弱减的离解
流动相的pH降低，弱酸组分 k变大， tR变大；弱碱组分 k 变小。 离子抑制RP-HPLC
1. 适用范围
有机酸、碱、盐，离子型和非离子型化合物的混合物。
2.离子对试剂的选择
分析酸类或带负电荷物质： 用季铵盐: 四丁基铵磷酸盐（TBA）和溴化十六烷基三甲
基铵（CTAB）等
分析碱类或带正电荷的物质： 用烷基( nc =5～8、12)磺酸盐或硫酸盐:
磺酸钠、正己基（C-6）磺酸钠、
正戊基（C-5）
6
二、化学键合相色谱法(BPC)
以化学键合相为固定相的色谱法
-----简称键合相色谱法
(bonded phase chromatography；BPC)
化学键合相：采用化学反应的方法将官能团 键合在载体表面所形成的固定相 . -----与普通LLC固定相比
7
BPC的优点：
①固定相的均一性和稳定性好，在使用过程 中不易流失，柱寿命长；
阳离子交换法分离 茚三酮柱后衍生化
可见光度法检测
7 种标准阴离子的HPLC图
26
第二节
HPLC的固定相和 流动相及其选择
固定相应符合下列要求： 颗粒细且均匀； 传质快； 机械强度高，能耐高压； 化学稳定性好，不与流动相发生化学 反应。
27
一、 BPC法的固定相
（一）键合相的种类
反相
正相 键合型离子交换剂 化学键合相
R1 Si OH + Cl Si R2 C18 H37 H Cl Si O R1 Si R2 C18 H 37
YWG－C18H37 无定形 硅胶上键合了十八烷基硅烷； 如： YQG－C18H37 球形
Spherisorb ODS，球形硅胶上键合了ODS。 31
2. 键合相的性质
含碳量：含碳百分数(C%=5～40，C18) VS 覆盖度 ：已反应的硅醇基(-Si-OH) 数目 占硅胶表面硅醇基总数的比例(50→98%) 覆盖度 ，疏水性 ，吸附性 。机理复杂， 拖尾 ODS 封尾（end-capping）：在键合反应后， 用三甲基氯硅烷等进行钝化处理，减少残
---δA或δB大 4.固定相 、流动相极性（同一般RP-HPLC）---EAB。
22
分析碱类或带正电荷的物质
C↑, k ↓
用长链离子对试
剂，当离子对试剂 浓度超过一定值时， k 反而减小，溶质的 k出现极大值的现象。 这是由于离子对试 剂形成胶束的结果。
C↑, k ↑
(k)
23
(四) 离子交换色谱法（IEC）
按分离机制
手性固定相
亲和色谱固定相等 按键合基团 的极性 非极性 弱极性
极性
28
按键合基团的极性(常用3类)
1. 非极性键合相 ---最常用
非极性烃基，如C18﹑C8﹑C1与苯基等 键合在硅胶表面； ODS 用于反相色谱(RP-HPLC) 长链烷基可使溶质的 k ？，选择性 改善，载样量提高，稳定性更好。
流动相： 水+极性调整剂+pH缓冲剂+离子对试剂
在流动相中组分离子与离子对试剂的反
离子（counter ion）生成中性离子对(极性
减少)，增加溶质与非极性固定相的作用，
使 k 增加，改善分离效果。
19
离子对模型---以有机碱B为例
m相
B + H+ RSO 3Na BH + + RSO 3 + Na+ (BH + RSO 3 ) m (BH + RSO 3) s
联用技术：LC-MS(DAD，FTIR，NMR)
现代液相色谱分析方法(HPLC)
2
HPLC与经典LC法相比
①填料dp小（一般为10, 5m）、规则, 均匀
化学键合的固定相，高压匀浆装填，渦流扩散小， (键合相)传质阻抗小，柱效高
②HPLC和经典LC的根本区别：
用减少填料粒度和提高装填均匀性以提高柱效
化学键合相色谱法
5
其他色谱类型
亲合色谱法（affinity chromatography；AC） 手性色谱法（chiral chromatography；CC） 胶束色谱法（micellar chromatography；MC） 电色谱法（electrochromatography；EC）
极性越弱，疏水性越强，k 越？，tR 也越？。
同系物碳数越多，极性越弱，k 越？； 引入极性取代基，降低疏水性，k 变？。
2、固定相---K，Vs → k
键合烷基碳链的延长，疏水性随而 ?， k 也？。 硅胶表面键合烷基的浓度(含碳量：C％, Vs)越 大，则溶质的 k 越？。
14
保留行为的主要影响因素
流动相：水+极性调整剂+其他试剂
常用甲醇－水、乙腈－水等
应用：最广。非极性至中等极性的 组分，（还有有机酸、碱及盐等）
11
按流动相不同，RP-HPLC分为： 水+极性调整剂 一般RP-HPLC
水+极性调整剂+酸、碱或pH缓冲剂
离子抑制RP-HPLC 水+极性调整剂+pH缓冲剂+离子对试剂 离子对RP-HPLC
氢键和定向作用
分离选择性 ？？？ 组分:极性强的k？， tR ？，？洗脱出柱。 流动相:极性增强，洗脱能力 ？， 使组分k ？，tR ？。
10
（二）反相键合相色谱法(RP-HPLC)
(解决80%以上分离问题)
固定相：非极性键合相—主要
如: 十八烷基硅烷（C18，ODS）、 辛烷基（C8）、苯基等键合硅胶
第十八章 高效液相色谱法
压 速
(HPLC)
high performance liquid chromatography pressure(HPLC) speed (HSLC) 主讲人 彭新君
1
经典LC为基础， 引入GC的理论和实验技术， 高压输送流动相，短柱 高效固定相及高灵敏度检测器， 将分离和检测集于一体
③高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度快
④高灵敏度检测器------检测限( g/ml)
UV检测器可达1010， 荧光检测器可达1013
3
蒸发光散射检测器 109 , MS检测器 109 g/s
HPLC与气相色谱法相比
①不受试样的挥发性和热稳定性的限 制，应 用范围广； ②流动相种类多，对分离的选择性有很大作 用，选择性高； ③一般柱温为室温，不需要高柱温 (Tc≤65℃)。
21
影响容量因子的因素
K B E AB
A
m
B
KB大，则tR大 1.离子对试剂的种类:碳链长度增加，溶质的 k 增大； ---EAB大 2.离子对试剂的浓度：在一定范围内试剂的浓度升高， 溶质的 k 增大----[A-]m大 图18-3
3.流动相的pH：有利于组分和离子对试剂离子化时 （离子对的形成），组分的 k 值最大
HPLC的特点:
高效化: n=103～104，R大, 灵敏
高速化: 分析速度快(tR小，操作自动化)
4
第一节 HPLC 的主要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法
分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
24
离子色谱的特点
（1）分析速度快
可在数 min 内完成一个试样的分析
（2）分离能力高
在适宜的条件下，可使常见的各种阴离子混合物 分离；例：使用双柱法，在十几min内，可使七种阴 离子完全分离。
(3) 分离对象：
无机和有机阴、阳离子， 以及氨基酸、糖类和DNA、RNA水解产物等。 抑制型(双柱型) (4) 离子色谱法 可分为两大类 非抑制型(单柱型)
流动相：非极性(或弱极性)溶剂 + 极性调整剂 如:烷烃加醇类（与水不混溶的溶剂） 适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性的
分子型化合物
如:一些在硅胶柱上分离的物质
9
正相键合相色谱法(NP-BPC)
分离机制 ？？？ 分配：把有机键合层作为一个液膜看待，
溶质在两相的溶解
吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、
15
3、流动相
极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的 k 越？
溶剂种类：水为弱溶剂， 甲醇、乙腈为强溶剂
溶剂比例：水的比例增加，使 k 增？
中性盐的加入：使中性溶质的 k 增？ 一般RP-HPLC pH：影响弱酸、弱减的离解
流动相的pH降低，弱酸组分 k变？，
tR变？；弱碱组分 k 变？。 离子抑制RP-HPLC
②柱效高；重现性好； ③能使用的流动相和键合相的种类多，分离 的选择性高 根据化学键合相与流动相极性的相对强弱:
正相（normal phase，NP） BPC
反相（reversed phase，RP）BPC 如： RP-HPLC
8
（一）正相键合相色谱法 (NP-BPC)
固定相：极性键合相 如:氰基（－CN）、氨基（－NH2）或 二羟基键合硅胶。（经典：水饱和的硅胶）
12
保留机制 疏溶剂理论
溶质的保留主要是溶 质分子与极性溶剂分子间 的排斥力，促使溶质分子 与键合相的烃基发生疏水 缔合。 不是溶质分子与键合相 间的色散力×.
疏溶剂缔合作用图
1.键合烃基
2.溶剂膜 3.溶质极性端
4.溶质非极性端
13
保留行为的主要影响因素
1、溶质的分子结构（极性）---K→ k
2. 弱极性键合相：
醚基和二羟基等键合相 用于反相或正相色谱，应用较少
3. 极性键合相：
常用氨基﹑氰基键合相（氰乙硅烷基 ≡Si(CH2)2CN)键合硅胶 一般用于正相色谱,有时也用于反相色谱
特殊用途的键合相
30
（二）键合相的性质和特点
1. 键合反应
硅氧烷（Si－O－Si－C）型：氯硅烷与 硅胶进行硅烷化反应
分离柱 抑制柱
25
离子色谱的应用
阴离子分析:
双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱 (250×3mm), 流动相：0.003mol/L NaHCO3 / 0.0024 mol/L Na2CO3，流量: 138 ml/h。 七种阴离子在20min内基本上得到完全分离， 各组分含量在3～50 ppm。
氨来自百度文库酸分析仪
1、溶质的分子结构（极性）---K→ k
极性越弱，疏水性越强，k 越大，tR 也越大。
同系物碳数越多，极性越弱，k 越大； 引入极性取代基，降低疏水性，k 变小。
2、固定相---K，Vs → k
键合烷基碳链的延长，疏水性随而增加， k 也增大。 硅胶表面键合烷基的浓度(含碳量：C％, Vs)越 大，则溶质的 k 越大。
17
离子抑制色谱法
H3PO4 HAc, NH3, 乙二胺
用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调 节流动相的pH，抑制有机弱酸、弱 碱的离解(中性分子极性小)，增加 疏水缔合作用，使k 变大。峰对称。
适用于 3≤pKa≤7的弱酸、 7≤pKa≤8的弱碱
18
（三）反相离子对色谱法 paired ion chromatography；PIC ion pair chromatography；IPC
S相
离子对
极性小易进入S相
通式
+ B +A
(B + A ) m
( B+ A )s
[B A ]s [B A ]s A m A m KB EBA B [B ]m [B ]m [A ]m B B
C=B·[B+]
提取常数
20
适用范围和离子对试剂的选择
余硅醇基。
32
3. 键合相的特点
使用过程中不流失；
注意
化学稳定性好；
适于梯度洗脱；
载样量大
注意： 流动相的pH一般应在2～8，否则会引 起键合基团脱落或硅胶溶解； (也有适用宽pH范围2～11的键合相)BDH。
33
二、BPC 的流动相
对流动相的要求：
①与固定相不发生化学反应。
②对试样有适宜的溶解度，使 k 1~10 。
③与检测器相适应。例如用UV检测器时，
选溶剂截止波长小于检测波长。
④纯度高，粘度小。低粘度流动相如甲醇﹑
乙腈等可以降低柱压，提高柱效。
34
（一）流动相对分离的影响
n α -1 k2 R 4 α 1 k2
见p403 图19-7
n 由色谱柱（固定相）性能决定，---柱效
α 主要受溶剂种类的影响，
---选择性
k 主要受受溶剂配比的影响。---洗脱能力
35
（二）流动相的强度和选择性
1. 溶剂的极性与强度 BPC 类别 正相 反相 极性参数 溶剂 洗脱 表20-1,20-2 极性 能力 P’大 强 (18-2)式 强 S小 弱 p425 溶剂 强度 大 (强) 保留 行为 K 小
16
3、流动相
极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的 k 越大
溶剂种类：水为弱溶剂，
甲醇、乙腈为强溶剂 溶剂比例：水的比例增加，使 k 增大 中性盐的加入：使中性溶质的 k 增大 一般RP-HPLC
pH：影响弱酸、弱减的离解
流动相的pH降低，弱酸组分 k变大， tR变大；弱碱组分 k 变小。 离子抑制RP-HPLC
1. 适用范围
有机酸、碱、盐，离子型和非离子型化合物的混合物。
2.离子对试剂的选择
分析酸类或带负电荷物质： 用季铵盐: 四丁基铵磷酸盐（TBA）和溴化十六烷基三甲
基铵（CTAB）等
分析碱类或带正电荷的物质： 用烷基( nc =5～8、12)磺酸盐或硫酸盐:
磺酸钠、正己基（C-6）磺酸钠、
正戊基（C-5）
6
二、化学键合相色谱法(BPC)
以化学键合相为固定相的色谱法
-----简称键合相色谱法
(bonded phase chromatography；BPC)
化学键合相：采用化学反应的方法将官能团 键合在载体表面所形成的固定相 . -----与普通LLC固定相比
7
BPC的优点：
①固定相的均一性和稳定性好，在使用过程 中不易流失，柱寿命长；
阳离子交换法分离 茚三酮柱后衍生化
可见光度法检测
7 种标准阴离子的HPLC图
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第二节
HPLC的固定相和 流动相及其选择
固定相应符合下列要求： 颗粒细且均匀； 传质快； 机械强度高，能耐高压； 化学稳定性好，不与流动相发生化学 反应。
27
一、 BPC法的固定相
（一）键合相的种类
反相
正相 键合型离子交换剂 化学键合相
R1 Si OH + Cl Si R2 C18 H37 H Cl Si O R1 Si R2 C18 H 37
YWG－C18H37 无定形 硅胶上键合了十八烷基硅烷； 如： YQG－C18H37 球形
Spherisorb ODS，球形硅胶上键合了ODS。 31
2. 键合相的性质
含碳量：含碳百分数(C%=5～40，C18) VS 覆盖度 ：已反应的硅醇基(-Si-OH) 数目 占硅胶表面硅醇基总数的比例(50→98%) 覆盖度 ，疏水性 ，吸附性 。机理复杂， 拖尾 ODS 封尾（end-capping）：在键合反应后， 用三甲基氯硅烷等进行钝化处理，减少残
---δA或δB大 4.固定相 、流动相极性（同一般RP-HPLC）---EAB。
22
分析碱类或带正电荷的物质
C↑, k ↓
用长链离子对试
剂，当离子对试剂 浓度超过一定值时， k 反而减小，溶质的 k出现极大值的现象。 这是由于离子对试 剂形成胶束的结果。
C↑, k ↑
(k)
23
(四) 离子交换色谱法（IEC）
按分离机制
手性固定相
亲和色谱固定相等 按键合基团 的极性 非极性 弱极性
极性
28
按键合基团的极性(常用3类)
1. 非极性键合相 ---最常用
非极性烃基，如C18﹑C8﹑C1与苯基等 键合在硅胶表面； ODS 用于反相色谱(RP-HPLC) 长链烷基可使溶质的 k ？，选择性 改善，载样量提高，稳定性更好。
流动相： 水+极性调整剂+pH缓冲剂+离子对试剂
在流动相中组分离子与离子对试剂的反
离子（counter ion）生成中性离子对(极性
减少)，增加溶质与非极性固定相的作用，
使 k 增加，改善分离效果。
19
离子对模型---以有机碱B为例
m相
B + H+ RSO 3Na BH + + RSO 3 + Na+ (BH + RSO 3 ) m (BH + RSO 3) s
联用技术：LC-MS(DAD，FTIR，NMR)
现代液相色谱分析方法(HPLC)
2
HPLC与经典LC法相比
①填料dp小（一般为10, 5m）、规则, 均匀
化学键合的固定相，高压匀浆装填，渦流扩散小， (键合相)传质阻抗小，柱效高
②HPLC和经典LC的根本区别：
用减少填料粒度和提高装填均匀性以提高柱效
化学键合相色谱法
5
其他色谱类型
亲合色谱法（affinity chromatography；AC） 手性色谱法（chiral chromatography；CC） 胶束色谱法（micellar chromatography；MC） 电色谱法（electrochromatography；EC）
极性越弱，疏水性越强，k 越？，tR 也越？。
同系物碳数越多，极性越弱，k 越？； 引入极性取代基，降低疏水性，k 变？。
2、固定相---K，Vs → k
键合烷基碳链的延长，疏水性随而 ?， k 也？。 硅胶表面键合烷基的浓度(含碳量：C％, Vs)越 大，则溶质的 k 越？。
14
保留行为的主要影响因素
流动相：水+极性调整剂+其他试剂
常用甲醇－水、乙腈－水等
应用：最广。非极性至中等极性的 组分，（还有有机酸、碱及盐等）
11
按流动相不同，RP-HPLC分为： 水+极性调整剂 一般RP-HPLC
水+极性调整剂+酸、碱或pH缓冲剂
离子抑制RP-HPLC 水+极性调整剂+pH缓冲剂+离子对试剂 离子对RP-HPLC
氢键和定向作用
分离选择性 ？？？ 组分:极性强的k？， tR ？，？洗脱出柱。 流动相:极性增强，洗脱能力 ？， 使组分k ？，tR ？。
10
（二）反相键合相色谱法(RP-HPLC)
(解决80%以上分离问题)
固定相：非极性键合相—主要
如: 十八烷基硅烷（C18，ODS）、 辛烷基（C8）、苯基等键合硅胶
第十八章 高效液相色谱法
压 速
(HPLC)
high performance liquid chromatography pressure(HPLC) speed (HSLC) 主讲人 彭新君
1
经典LC为基础， 引入GC的理论和实验技术， 高压输送流动相，短柱 高效固定相及高灵敏度检测器， 将分离和检测集于一体
③高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度快
④高灵敏度检测器------检测限( g/ml)
UV检测器可达1010， 荧光检测器可达1013
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蒸发光散射检测器 109 , MS检测器 109 g/s
HPLC与气相色谱法相比
①不受试样的挥发性和热稳定性的限 制，应 用范围广； ②流动相种类多，对分离的选择性有很大作 用，选择性高； ③一般柱温为室温，不需要高柱温 (Tc≤65℃)。
21
影响容量因子的因素
K B E AB
A
m
B
KB大，则tR大 1.离子对试剂的种类:碳链长度增加，溶质的 k 增大； ---EAB大 2.离子对试剂的浓度：在一定范围内试剂的浓度升高， 溶质的 k 增大----[A-]m大 图18-3
3.流动相的pH：有利于组分和离子对试剂离子化时 （离子对的形成），组分的 k 值最大
HPLC的特点:
高效化: n=103～104，R大, 灵敏
高速化: 分析速度快(tR小，操作自动化)
4
第一节 HPLC 的主要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法
分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
24
离子色谱的特点
（1）分析速度快
可在数 min 内完成一个试样的分析
（2）分离能力高
在适宜的条件下，可使常见的各种阴离子混合物 分离；例：使用双柱法，在十几min内，可使七种阴 离子完全分离。
(3) 分离对象：
无机和有机阴、阳离子， 以及氨基酸、糖类和DNA、RNA水解产物等。 抑制型(双柱型) (4) 离子色谱法 可分为两大类 非抑制型(单柱型)
流动相：非极性(或弱极性)溶剂 + 极性调整剂 如:烷烃加醇类（与水不混溶的溶剂） 适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性的
分子型化合物
如:一些在硅胶柱上分离的物质
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正相键合相色谱法(NP-BPC)
分离机制 ？？？ 分配：把有机键合层作为一个液膜看待，
溶质在两相的溶解
吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、
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3、流动相
极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的 k 越？
溶剂种类：水为弱溶剂， 甲醇、乙腈为强溶剂
溶剂比例：水的比例增加，使 k 增？
中性盐的加入：使中性溶质的 k 增？ 一般RP-HPLC pH：影响弱酸、弱减的离解
流动相的pH降低，弱酸组分 k变？，
tR变？；弱碱组分 k 变？。 离子抑制RP-HPLC
②柱效高；重现性好； ③能使用的流动相和键合相的种类多，分离 的选择性高 根据化学键合相与流动相极性的相对强弱:
正相（normal phase，NP） BPC
反相（reversed phase，RP）BPC 如： RP-HPLC
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（一）正相键合相色谱法 (NP-BPC)
固定相：极性键合相 如:氰基（－CN）、氨基（－NH2）或 二羟基键合硅胶。（经典：水饱和的硅胶）
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保留机制 疏溶剂理论
溶质的保留主要是溶 质分子与极性溶剂分子间 的排斥力，促使溶质分子 与键合相的烃基发生疏水 缔合。 不是溶质分子与键合相 间的色散力×.
疏溶剂缔合作用图
1.键合烃基
2.溶剂膜 3.溶质极性端
4.溶质非极性端
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保留行为的主要影响因素
1、溶质的分子结构（极性）---K→ k