黄芪多糖的提取和含量测定研究

黄芪多糖的提取和含量测定研究

黄芪为豆科植物，是蒙古黄芪或膜荚黄芪的干

燥根，主要药理成分是黄芪多糖（APS）和黄芪甙。APS在医学和兽医临床上研究应用较为广泛，可作

为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗应激、抗氧化等作用（张立洲，1996；郭小清等，2004）。目前APS的提取主要采用水提取和CaO提取两种工艺，水提取分离工艺不成熟，效率

较差，提取成本较高，严重影响了APS的研究开发

利用。李红民等（2000）报道，用pH9~10的CaO水溶液提取APS，得率显著提高，成本下降。我们用水提取法和CaO溶液提取法进行APS的提取并测定

含量，以便从中筛选出较好的提取方法，为生产实

践提供参考。

1材料与方法

1.1材料与试剂

黄芪根：购自平凉市某中药材门市部。

葡萄糖、苯酚、浓硫酸、95%乙醇、丙酮，均为分

析纯。21分光光度计，TN型托盘式扭力天平，容量瓶，水浴锅，干燥器，粉碎机等。

1.2方法

1.2.1黄芪多糖的提取。水提取法用蒸馏水煮

沸提取，CaO溶液提取法用pH9~10的CaO溶液煮

沸提取，浓缩时调至pH6.5,以后两法步骤相同。

①称取黄芪根1kg，去掉杂质和泥土，粉碎成

粉末。②黄芪根粉末中加以6~7倍的蒸馏水（或

CaO溶液），煮沸1.5h，用4层纱布过滤，滤渣用同

样方法煮沸3次。③合并滤液，调pH至6.5左右，

加热浓缩至一定量。④将浓缩液以2 000r/min离心

10min，上清液中加3倍量95%乙醇沉淀。⑤倾去

上清液，沉淀物中再加入95%的乙醇至浓度为

80%，静置，倾出上清。⑥滤渣用丙酮洗涤2次，过滤。将滤渣放入干燥器中，-20℃冷冻真空干燥，即

得到APS。

1.2.2黄芪多糖的含量测定：①葡萄糖标准溶

液的制备。取经105℃干燥至恒重的葡萄糖

100mg，置100mL容量瓶中加水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取10mL，置10mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成0.1mg/mL的葡萄糖标准溶液。

②标准曲线的绘制。准确吸取葡萄糖标准溶液

0.1~0.6mL共6份,分别置25mL容量瓶中，加蒸馏

水补充至2mL，再加入5%苯酚溶液1.0mL，摇匀，

迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀，放置5.0mL，置80℃水浴中加热15min，取出，迅速冷却至室温。另以

2.0mL蒸馏水同上平行操作作为空白对照，在

490nm波长处测定吸光度，并求出回归方程：C=

0.21216A-6.37×10-3，r=0.997057。其中C︰葡萄糖

浓度，A︰吸光度。③黄芪多糖含量测定。取提取并经105℃干燥至恒重的APS 50mg，置于50mL容量

瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇匀，准确吸取10mL，置100mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，

配成0.1mg/mL的APS溶液。

吸取上述溶液0.5mL，置25.0mL容量瓶中，加

蒸馏水补充至2mL，依法测定吸光度值，并代入回

归方程计算，求得APS的相对含量。

2结果与分析

2.1黄芪多糖的物理性状

提取的APS为灰白色粉末，易溶解于水，溶液

呈乳白色，无杂质。

2.2黄芪多糖的收率

从表1可见，水提取法APS收率为3.6%~4.0%，

平均为3.8%；CaO溶液提取法APS收率为5.9%

~7.75%，平均为7.05%；CaO溶液提取法比水提取

法APS收率提高85.5%。，差异极显著（P＜0.01）。2.3黄芪多糖含量测定结果

从表2可见，水提取法APS含量为65.2%~

67.8%，平均为66.5%；CaO溶液法APS含量为

78.6%~85.0%，平均为82.1%；CaO溶液提取法比水提取法平均提高15.6%，差异显著（P＜0.05）。

表1不同提取方法黄芪多糖收率

批次原生药重量提取方法多糖重量收率

021108 1kg水提取法36g 3.60%

030516 1kg水提取法40g 4.0%

040309 1kg CaO溶液法59g 5.90%

040315 2kg CaO溶液法150g 7.50%

040323 2kg CaO溶液法155g 7.75%

表2黄芪多糖粗提物相对含量

批次提取方法吸光度A浓

度C

（mg.mL-1）相

对含量

021108水提取法0.185 0.0326 65.2%

030516水提取法0.188 0.033 67.8%

040309 CaO溶液法0.230 0.0425 85.0%

040305 CaO溶液法0.215 0.0393 78.6%

040323 CaO溶液法0.225 0.0414 82.8%