酶的特性实验
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实验十： 实验十：酶的特性
实验目的： 实验目的：加深对酶的性质的认识。 实验内容： 实验内容：
1. 2. 3. 4.
温度对酶活力的影响 pH对酶活力的影响 酶的激活及抑制剂 酶的专一性
温度对酶活力的影响
一、原理： 原理：
酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶 的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为37－ 40℃，植物酶的最适温度为50－60℃ 。 酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的 干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显改变， 但在100℃的溶液中却很快地完全失去活性。 低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。
二、器材： 器材：
1) 2) 3)
恒温水浴 沸水浴 试管及试管架
三、试剂和材料： 试剂和材料：
1) 2) 3) 4)
5)
2％蔗糖溶液 ％ 150ml 溶于0.3％NaCl的1％淀粉溶液（需新鲜配制） 溶于 ％ 的 ％淀粉溶液（需新鲜配制） 150ml 稀释200倍的新鲜唾液 100ml 稀释 倍的新鲜唾液 100ml 蔗糖酶溶液 将啤酒厂的鲜酵母用水洗涤2－ 次 离心）， ），然后放在滤纸上自然 将啤酒厂的鲜酵母用水洗涤 －3次（离心），然后放在滤纸上自然 干燥。取干酵母100g，置于乳钵内，添加适量蒸馏水及少量细沙， 干燥。取干酵母 ，置于乳钵内，添加适量蒸馏水及少量细沙， 用力研磨，提取约1h，再加蒸馏水使总体积约为原体积的10倍 用力研磨，提取约 ，再加蒸馏水使总体积约为原体积的 倍。离 心，将上清液保存于冰箱中备用。 将上清液保存于冰箱中备用。 Benedict氏试剂 200ml 氏试剂 无水硫酸铜1.74g溶于 溶于100ml热水中，冷却后稀释至 热水中， 无水硫酸铜 溶于 热水中 冷却后稀释至150ml。取柠檬 。 酸钠173g，无水碳酸钠 水共热， 酸钠 ，无水碳酸钠100g和600ml水共热，溶解后冷却并加水至 和 水共热 850ml。再将冷却的150ml硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。 。再将冷却的 硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。 硫酸铜溶液倾入
酶的专一性
一、原理 酶具有高度的专一性。 酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀 粉酶和蔗糖酶的作用为例， 粉酶和蔗糖酶的作用为例，来说明酶的专 一性。 一性。 淀粉和蔗糖无还原性， 淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水 解淀粉生成由还原性的麦芽糖， 解淀粉生成由还原性的麦芽糖，但不能催 化蔗糖的水解。 化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产 生还原性葡萄糖和果糖， 生还原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉 的水解。 试剂检查糖的还原性。 的水解。用Benedict试剂检查糖的还原性。 试剂检查糖的还原性
注：保温时间可根据各人唾液淀粉酶活力调整
1 1.5 0.5 0.5 － － － 2－3 －
2 1.5 0.5 － 0.5 － － 2－3 －
3 1.5 0.5 － － 0.5 － 2－3 －
4 1.5 0.5 － － － 0.5 2－3 －
37 ℃恒温水浴、保温 恒温水浴、保温10min
解释说明，说明本实验第3管的意义
1％淀粉溶液（滴） ％淀粉溶液（ 2％蔗糖溶液（滴） ％蔗糖溶液（ 稀释唾液（ ） 稀释唾液（ml） 煮沸过的稀释唾液 （ml） ） 蒸馏水（ ） 蒸馏水（ml） Benedict试剂（ml） 试剂（ ） 试剂
37 ℃恒温水浴 恒温水浴15min 1 1 1 1
2.
蔗糖酶的专一性： 蔗糖酶的专一性： 1 4 － － － 1 1 2 － 4 － － 1 1 沸水浴2－ 沸水浴 －3min 现象 解释实验结果 3 4 － 1 － － 4 － 4 1 － － 5 4 － － 1 － 6 － 4 － 1 －
1) 2) 1) 2) 3) 4) 5) 6)
四、操作方法： 操作方法：
管号 0.1％的淀粉溶液（ml） ％的淀粉溶液（ ） 稀释唾液（ ） 稀释唾液（ml） 1％硫酸铜溶液（ml） ％硫酸铜溶液（ ） 1％NaCl溶液（ml） ％ 溶液（ ） 溶液 1％硫酸钠溶液（ml） ％硫酸钠溶液（ ） 蒸馏水（ ） 蒸馏水（ml） KI－碘溶液（滴） －碘溶液（ 现象
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四、操作方法： 操作方法：
1.
淀粉酶的专一性：
管号 1 4 － － － 1 1 2 － 4 － － 1 1 沸水浴2－ 沸水浴 －3min 现象 解释实验结果（提示：唾液除含淀粉酶外还含有少量麦芽糖酶） 解释实验结果（提示：唾液除含淀粉酶外还含有少量麦芽糖酶） 3 4 － 1 － － 4 － 4 1 － － 5 4 － － 1 － 6 － 4 － 1 －
取三支试管，编号后按下表加入试剂： 取三支试管，编号后按下表加入试剂：
管号 淀粉溶液（ ） 淀粉溶液（ml） 稀释唾液（ ） 稀释唾液（ml） 煮沸过的稀释 唾液（ ） 唾液（ml）
1 1.5 1 －
2 1.5 1 －
3 1.5 － －
摇匀后， 号两试管放入37 摇匀后，将1号、3号两试管放入 ℃ 恒 号 号两试管放入 温水浴中， 号试管放入冰中，10min后去 温水浴中，2号试管放入冰中，10min后去 ，（将 号管内液体分为两半） KI－ 处，（将2号管内液体分为两半）用KI－碘 溶液来检验1 溶液来检验1、2、3管内淀粉被唾液淀粉酶 水解的程度。记录并解释结果， 水解的程度。记录并解释结果，将2号管剩 下的一半溶液放入37℃ 37℃水浴中继续保温 下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温 10min后 再用碘液实验，结果如何？ 10min后，再用碘液实验，结果如何？
管号 1％淀粉溶液（滴） ％淀粉溶液（ 2％蔗糖溶液（滴） ％蔗糖溶液（ 蔗糖酶溶液（ ） 蔗糖酶溶液（ml） 煮沸过的蔗糖酶溶液 （ml） ） 蒸馏水（ ） 蒸馏水（ml） Benedict试剂（ml） 试剂（ ） 试剂
37 ℃恒温水浴 恒温水浴15min 1 1 1 1
二、器材
1) 2) 3) 4) 5)
试管及试管架 吸管 滴管 50ml锥形瓶 锥形瓶 恒温水浴
三、试剂和材料
1) 2) 3) 4) 5) 6)
新配制的溶于0.3％ 250ml 新配制的溶于 ％NaCl的0.5％淀粉溶液 的 ％ 稀释200倍的新鲜唾液 100ml 稀释 倍的新鲜唾液 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 600ml 磷酸氢二钠溶液 0.1mol/L柠檬酸溶液 400ml 柠檬酸溶液 KI－碘溶液 － 50ml pH试纸： pH=5、 pH=5.8、 pH=6.8、 pH=8四种 试纸： 试纸 、 、 、 四种
pH对酶活性的影响 对酶活性的影响
一、原理
酶的活力受环境pH的影响极为显著。不同酶的最适 值不同 值不同。 酶的活力受环境 的影响极为显著。不同酶的最适pH值不同。本实验观 的影响极为显著 对唾液淀粉酶活性的影响， 约为6.8。 察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适 约为 。 对唾液淀粉酶活性的影响 唾液淀粉酶的最适pH约为
四、操作方法： 操作方法： 取四个标有号码的50ml锥形瓶。用吸管按下表添 锥形瓶。 取四个标有号码的 锥形瓶 磷酸氢二钠溶液和0.1柠檬酸溶液以制备 加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和 柠檬酸溶液以制备 磷酸氢二钠溶液和 pH5.0－8.0的四种缓冲液。 的四种缓冲液。 － 的四种缓冲液 从四个锥形瓶中各取缓冲液3ml，分别注入 支 从四个锥形瓶中各取缓冲液 ，分别注入4支 带有号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5％ 带有号码的试管中，随后于每个试管中添加 ％淀 粉溶液2ml和稀释 和稀释200倍的唾液 倍的唾液2ml。向各试管中加入 粉溶液 和稀释 倍的唾液 。 稀释唾液的时间间隔各为1min。 稀释唾液的时间间隔各为1min。将各试管内容物混 并依次置于37 恒温水浴中保温。 匀，并依次置于37 ℃恒温水浴中保温。 第四管加入唾液2min后，每隔 由第3管取出一 第四管加入唾液 后 每隔1min由第 管取出一 由第 滴混和液，置于白瓷板上， 小滴KI－碘溶液， 滴混和液，置于白瓷板上，加1小滴 －碘溶液，检 小滴 验淀粉的水解程度。待混和液变为棕黄色时， 验淀粉的水解程度。待混和液变为棕黄色时，向所 有试管依次添加1－ 滴 －碘溶液。添加KI－ 有试管依次添加 －2滴KI－碘溶液。添加 －碘溶 液的时间间隔从第一管起，亦均为1min。 液的时间间隔从第一管起，亦均为 。 观察各试管内容物呈现的颜色，分析pH对唾液 观察各试管内容物呈现的颜色，分析 对唾液 淀粉酶活性的影响。 淀粉酶活性的影响。
1) 2) 3) 4)
二、器材： 器材： 试管及试管架 恒温水浴 冰浴 沸水浴
三、试剂和材料： 试剂和材料： 1) 含0.2﹪淀粉的0.3％NaCl溶液150ml，需新鲜 配制 2) 稀释200倍的唾液50ml：用蒸馏水漱口，以清 除事物残渣，再含一口蒸馏水，半分钟后使 其流入量筒并稀释200倍，混匀备用。 3) KI－碘溶液50ml：将KI20g及碘10g溶于100ml 水中。使用前稀释10倍。
锥形瓶 0.2mol/L磷酸氢二 磷酸氢二 钠（ml） ） 号码 1 2 3 4 5.15 6.05 7.72 9.72
0.1 mol/L柠 柠 檬酸（ ） 檬酸（ml） 4.85 3.95 2.28 0.28
pH
5.0 5.8 6.8 8.0
唾液淀粉酶的活化和抑制
一、原理 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶 的活化剂，铜离子为其抑制剂。 的活化剂，铜离子为其抑制剂。 器材： 二、器材： 恒温水浴 试管及试管架 试剂和材料： 三、试剂和材料： 0.1％的淀粉溶液 150ml ％ 稀释200倍的新鲜唾液 150ml 稀释 倍的新鲜唾液 1％NaCl溶液 50ml ％ 溶液 1％硫酸铜溶液 50ml ％ 1％硫酸钠溶液 50ml ％ KI－碘溶液 100ml －
四、操作方法： 操作方法：
淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小， 淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小， 遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。 遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘 不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下， 不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被 唾液淀粉酶水解的程度， 唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色 来判断。 来判断。
实验目的： 实验目的：加深对酶的性质的认识。 实验内容： 实验内容：
1. 2. 3. 4.
温度对酶活力的影响 pH对酶活力的影响 酶的激活及抑制剂 酶的专一性
温度对酶活力的影响
一、原理： 原理：
酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶 的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为37－ 40℃，植物酶的最适温度为50－60℃ 。 酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的 干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显改变， 但在100℃的溶液中却很快地完全失去活性。 低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。
二、器材： 器材：
1) 2) 3)
恒温水浴 沸水浴 试管及试管架
三、试剂和材料： 试剂和材料：
1) 2) 3) 4)
5)
2％蔗糖溶液 ％ 150ml 溶于0.3％NaCl的1％淀粉溶液（需新鲜配制） 溶于 ％ 的 ％淀粉溶液（需新鲜配制） 150ml 稀释200倍的新鲜唾液 100ml 稀释 倍的新鲜唾液 100ml 蔗糖酶溶液 将啤酒厂的鲜酵母用水洗涤2－ 次 离心）， ），然后放在滤纸上自然 将啤酒厂的鲜酵母用水洗涤 －3次（离心），然后放在滤纸上自然 干燥。取干酵母100g，置于乳钵内，添加适量蒸馏水及少量细沙， 干燥。取干酵母 ，置于乳钵内，添加适量蒸馏水及少量细沙， 用力研磨，提取约1h，再加蒸馏水使总体积约为原体积的10倍 用力研磨，提取约 ，再加蒸馏水使总体积约为原体积的 倍。离 心，将上清液保存于冰箱中备用。 将上清液保存于冰箱中备用。 Benedict氏试剂 200ml 氏试剂 无水硫酸铜1.74g溶于 溶于100ml热水中，冷却后稀释至 热水中， 无水硫酸铜 溶于 热水中 冷却后稀释至150ml。取柠檬 。 酸钠173g，无水碳酸钠 水共热， 酸钠 ，无水碳酸钠100g和600ml水共热，溶解后冷却并加水至 和 水共热 850ml。再将冷却的150ml硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。 。再将冷却的 硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。 硫酸铜溶液倾入
酶的专一性
一、原理 酶具有高度的专一性。 酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀 粉酶和蔗糖酶的作用为例， 粉酶和蔗糖酶的作用为例，来说明酶的专 一性。 一性。 淀粉和蔗糖无还原性， 淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水 解淀粉生成由还原性的麦芽糖， 解淀粉生成由还原性的麦芽糖，但不能催 化蔗糖的水解。 化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产 生还原性葡萄糖和果糖， 生还原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉 的水解。 试剂检查糖的还原性。 的水解。用Benedict试剂检查糖的还原性。 试剂检查糖的还原性
注：保温时间可根据各人唾液淀粉酶活力调整
1 1.5 0.5 0.5 － － － 2－3 －
2 1.5 0.5 － 0.5 － － 2－3 －
3 1.5 0.5 － － 0.5 － 2－3 －
4 1.5 0.5 － － － 0.5 2－3 －
37 ℃恒温水浴、保温 恒温水浴、保温10min
解释说明，说明本实验第3管的意义
1％淀粉溶液（滴） ％淀粉溶液（ 2％蔗糖溶液（滴） ％蔗糖溶液（ 稀释唾液（ ） 稀释唾液（ml） 煮沸过的稀释唾液 （ml） ） 蒸馏水（ ） 蒸馏水（ml） Benedict试剂（ml） 试剂（ ） 试剂
37 ℃恒温水浴 恒温水浴15min 1 1 1 1
2.
蔗糖酶的专一性： 蔗糖酶的专一性： 1 4 － － － 1 1 2 － 4 － － 1 1 沸水浴2－ 沸水浴 －3min 现象 解释实验结果 3 4 － 1 － － 4 － 4 1 － － 5 4 － － 1 － 6 － 4 － 1 －
1) 2) 1) 2) 3) 4) 5) 6)
四、操作方法： 操作方法：
管号 0.1％的淀粉溶液（ml） ％的淀粉溶液（ ） 稀释唾液（ ） 稀释唾液（ml） 1％硫酸铜溶液（ml） ％硫酸铜溶液（ ） 1％NaCl溶液（ml） ％ 溶液（ ） 溶液 1％硫酸钠溶液（ml） ％硫酸钠溶液（ ） 蒸馏水（ ） 蒸馏水（ml） KI－碘溶液（滴） －碘溶液（ 现象
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四、操作方法： 操作方法：
1.
淀粉酶的专一性：
管号 1 4 － － － 1 1 2 － 4 － － 1 1 沸水浴2－ 沸水浴 －3min 现象 解释实验结果（提示：唾液除含淀粉酶外还含有少量麦芽糖酶） 解释实验结果（提示：唾液除含淀粉酶外还含有少量麦芽糖酶） 3 4 － 1 － － 4 － 4 1 － － 5 4 － － 1 － 6 － 4 － 1 －
取三支试管，编号后按下表加入试剂： 取三支试管，编号后按下表加入试剂：
管号 淀粉溶液（ ） 淀粉溶液（ml） 稀释唾液（ ） 稀释唾液（ml） 煮沸过的稀释 唾液（ ） 唾液（ml）
1 1.5 1 －
2 1.5 1 －
3 1.5 － －
摇匀后， 号两试管放入37 摇匀后，将1号、3号两试管放入 ℃ 恒 号 号两试管放入 温水浴中， 号试管放入冰中，10min后去 温水浴中，2号试管放入冰中，10min后去 ，（将 号管内液体分为两半） KI－ 处，（将2号管内液体分为两半）用KI－碘 溶液来检验1 溶液来检验1、2、3管内淀粉被唾液淀粉酶 水解的程度。记录并解释结果， 水解的程度。记录并解释结果，将2号管剩 下的一半溶液放入37℃ 37℃水浴中继续保温 下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温 10min后 再用碘液实验，结果如何？ 10min后，再用碘液实验，结果如何？
管号 1％淀粉溶液（滴） ％淀粉溶液（ 2％蔗糖溶液（滴） ％蔗糖溶液（ 蔗糖酶溶液（ ） 蔗糖酶溶液（ml） 煮沸过的蔗糖酶溶液 （ml） ） 蒸馏水（ ） 蒸馏水（ml） Benedict试剂（ml） 试剂（ ） 试剂
37 ℃恒温水浴 恒温水浴15min 1 1 1 1
二、器材
1) 2) 3) 4) 5)
试管及试管架 吸管 滴管 50ml锥形瓶 锥形瓶 恒温水浴
三、试剂和材料
1) 2) 3) 4) 5) 6)
新配制的溶于0.3％ 250ml 新配制的溶于 ％NaCl的0.5％淀粉溶液 的 ％ 稀释200倍的新鲜唾液 100ml 稀释 倍的新鲜唾液 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 600ml 磷酸氢二钠溶液 0.1mol/L柠檬酸溶液 400ml 柠檬酸溶液 KI－碘溶液 － 50ml pH试纸： pH=5、 pH=5.8、 pH=6.8、 pH=8四种 试纸： 试纸 、 、 、 四种
pH对酶活性的影响 对酶活性的影响
一、原理
酶的活力受环境pH的影响极为显著。不同酶的最适 值不同 值不同。 酶的活力受环境 的影响极为显著。不同酶的最适pH值不同。本实验观 的影响极为显著 对唾液淀粉酶活性的影响， 约为6.8。 察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适 约为 。 对唾液淀粉酶活性的影响 唾液淀粉酶的最适pH约为
四、操作方法： 操作方法： 取四个标有号码的50ml锥形瓶。用吸管按下表添 锥形瓶。 取四个标有号码的 锥形瓶 磷酸氢二钠溶液和0.1柠檬酸溶液以制备 加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和 柠檬酸溶液以制备 磷酸氢二钠溶液和 pH5.0－8.0的四种缓冲液。 的四种缓冲液。 － 的四种缓冲液 从四个锥形瓶中各取缓冲液3ml，分别注入 支 从四个锥形瓶中各取缓冲液 ，分别注入4支 带有号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5％ 带有号码的试管中，随后于每个试管中添加 ％淀 粉溶液2ml和稀释 和稀释200倍的唾液 倍的唾液2ml。向各试管中加入 粉溶液 和稀释 倍的唾液 。 稀释唾液的时间间隔各为1min。 稀释唾液的时间间隔各为1min。将各试管内容物混 并依次置于37 恒温水浴中保温。 匀，并依次置于37 ℃恒温水浴中保温。 第四管加入唾液2min后，每隔 由第3管取出一 第四管加入唾液 后 每隔1min由第 管取出一 由第 滴混和液，置于白瓷板上， 小滴KI－碘溶液， 滴混和液，置于白瓷板上，加1小滴 －碘溶液，检 小滴 验淀粉的水解程度。待混和液变为棕黄色时， 验淀粉的水解程度。待混和液变为棕黄色时，向所 有试管依次添加1－ 滴 －碘溶液。添加KI－ 有试管依次添加 －2滴KI－碘溶液。添加 －碘溶 液的时间间隔从第一管起，亦均为1min。 液的时间间隔从第一管起，亦均为 。 观察各试管内容物呈现的颜色，分析pH对唾液 观察各试管内容物呈现的颜色，分析 对唾液 淀粉酶活性的影响。 淀粉酶活性的影响。
1) 2) 3) 4)
二、器材： 器材： 试管及试管架 恒温水浴 冰浴 沸水浴
三、试剂和材料： 试剂和材料： 1) 含0.2﹪淀粉的0.3％NaCl溶液150ml，需新鲜 配制 2) 稀释200倍的唾液50ml：用蒸馏水漱口，以清 除事物残渣，再含一口蒸馏水，半分钟后使 其流入量筒并稀释200倍，混匀备用。 3) KI－碘溶液50ml：将KI20g及碘10g溶于100ml 水中。使用前稀释10倍。
锥形瓶 0.2mol/L磷酸氢二 磷酸氢二 钠（ml） ） 号码 1 2 3 4 5.15 6.05 7.72 9.72
0.1 mol/L柠 柠 檬酸（ ） 檬酸（ml） 4.85 3.95 2.28 0.28
pH
5.0 5.8 6.8 8.0
唾液淀粉酶的活化和抑制
一、原理 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶 的活化剂，铜离子为其抑制剂。 的活化剂，铜离子为其抑制剂。 器材： 二、器材： 恒温水浴 试管及试管架 试剂和材料： 三、试剂和材料： 0.1％的淀粉溶液 150ml ％ 稀释200倍的新鲜唾液 150ml 稀释 倍的新鲜唾液 1％NaCl溶液 50ml ％ 溶液 1％硫酸铜溶液 50ml ％ 1％硫酸钠溶液 50ml ％ KI－碘溶液 100ml －
四、操作方法： 操作方法：
淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小， 淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小， 遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。 遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘 不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下， 不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被 唾液淀粉酶水解的程度， 唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色 来判断。 来判断。