免疫组化检查在病理诊断中的应用及其意义

免疫组化检查在病理诊断中的应用及其意义

免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。石蜡切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。常用的抗原修复方法有微波修复法，高压加热法，酶消化法，水煮加热法等，常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。免疫组化常用的染色方法根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法最常用。

一、病理外检中常用抗体标记

上皮类标记

AE1/AE3最常用，胞浆阳性着色，细丝状，与低、中分子量角蛋白反应，肝细胞为阴性，而胆管细胞阳性，用于确定肿瘤为上皮源性；CAM5.2胞浆阳性着色，细丝状，包含CK8 和CK18，主要染色神经内分泌细胞和腺上皮，正常鳞状上皮阴性，用于染小细胞癌、胸腺瘤和梭形细胞癌、肝细胞癌：AE1/AE3（-）CAM5.2 （+），用于乳腺外的Paget’s病；CK34BE 胞浆阳性着色，鳞状上皮和鳞状细胞癌阳性，用于染前列腺的基底层细胞，鉴别浸润癌，染涎腺肿瘤的肌上皮，用于染Mallory小体；EMA细胞膜/细胞浆阳性着色，上皮标记的替代品，浆细胞阳性，很好的内对照，用于染滑膜肉瘤、大细胞分化不良性淋巴瘤、L&H 富于淋巴细胞的结节状何杰金、脑膜瘤EMA（+）AE1/AE3（–）、浆细胞瘤；CK7和CK20

胞浆阳性着色，两者联合应用可鉴别很多种癌的原发部位，CK7 常常在胃肠道的癌为阴性，CK20 只有胃肠道癌和Merkel 细胞癌阳性。

间皮细胞标记

Calretinin细胞核和细胞浆阳性着色，核阳性着色为必需，间皮强阳性，Sertoli和肥大细胞阳性，用于鉴别间皮瘤（+）和腺癌（-），常加CEA，鉴别梭形细胞间皮肉瘤（+）和其他的浆膜腔肉瘤（-），鉴别胸、腹水中的癌细胞和间皮细胞，确定为间皮细胞，如大网膜内陷入的一团细胞或腺瘤样瘤，神经元分化标记，如中枢神经细胞瘤，帮助确诊心脏粘液瘤，几乎全为（+）。

白细胞标记

非何杰金淋巴瘤大致分类

CD20（L26），CD3怀疑T 细胞淋巴瘤者加UCHL-1（CD45RO），怀疑浆细胞瘤者LCA （CD45RB）,CD79a, CD138，小B 细胞淋巴瘤者，CD79a, CD43（MT1）；LCA（CD45RB）几乎所有的白细胞（+），有些淋巴母细胞淋巴瘤、大细胞分化不良性淋巴瘤、外周T 细胞淋巴瘤（- ），经典Hodgkin 的R-S 细胞（-），以往浆细胞瘤（-），现（+），HE 下明确的淋巴瘤不必要染LCA。

B细胞相关标记

CD20（L26）胞膜阳性着色，浆阳者不可判为阳性，各阶段B 细胞阳性，除了原始的前B 和非常成熟的浆母、浆细胞，用于染B 细胞淋巴瘤，除了小细胞、淋巴母细胞（不恒定）和浆细胞瘤常（-），梭形细胞胸腺瘤（+）；CD79a胞浆阳性着色，有/无核周聚集，全B 细胞标记，包括浆母和浆细胞，标记滤泡中心比mantle和滤泡间B要弱，比CD20贵得多，用于鉴别淋巴母细胞淋巴瘤/白血病，弥漫性小B 细胞淋巴瘤/白血病，浆细胞瘤常CD20(–)而CD79a >50% (+)。

T细胞相关标记

CD3（polyclonal）胞浆阳性着色，核周凝聚，有时高尔基体也阳性，极好的T 细胞标记，与CD43 不同，髓系细胞和组织细胞不着色，极好的T 细胞和NK 淋巴瘤标记，虽然有些大细胞型T 细胞淋巴瘤阴性；CD43 （MT1）只有膜阳性才能判为阳性，T 细胞、T 细胞淋巴瘤、真性组织细胞肿瘤、粒细胞肉瘤阳性，一部分浆细胞瘤阳性，小B 细胞淋巴瘤阳性，这一特点可辅助表明增生的小淋巴细胞为肿瘤性！EBV 感染的B 细胞阳性；UCHL-1

（CD45RO）细胞膜阳性着色，有时Golgi 阳性，弥漫性胞浆阳性者非真阳性，阳性：正常/ 反应性的T 细胞，组织细胞、粒细胞肉瘤和T 细胞淋巴瘤，罕见情况下B 细胞淋巴瘤阳性；CD5细胞膜阳性着色，T 细胞阳性，但极少B 细胞也阳性，尤其用于慢性淋巴细胞性白血病和Mantle 淋巴瘤，而MALToma 和Marginal Zone 淋巴瘤阴性，用于鉴别胸腺癌（CD5+）和其他癌瘤。

与激活相关的标记

CD30（Ki-I，Ber-H2）只有膜染色和Golgi体染色才是真阳性，正常淋巴滤泡周单个的大细胞为阳性，激活的淋巴细胞阳性：如传单、弓浆虫感染、Kikuchi淋巴结炎等、浆细胞也阳性，用于大细胞分化不良性淋巴瘤、一些传统的大细胞淋巴瘤、外周T和B细胞淋巴瘤中的一些单个大细胞、经典何杰金病中的R-S细胞，但非L&H细胞、淋巴瘤样丘疹病等皮下CD30+的淋巴增生疾病、一些浆细胞瘤、胚胎性癌。

组织细胞标记

CD68（PGM1）胞浆内颗粒状阳性着色，较好的组织细胞和单核细胞（包括浆样单核细胞）及其肿瘤的标记，有些非组织细胞也可阳性，包括：肾小管、粒细胞肉瘤、恶黑、血管瘤样恶纤组等，髓系细胞标记；Myeloperoxidase胞浆阳性着色，常呈颗粒状，髓系细胞及其肿瘤的高度特异且敏感的标记，奇怪的是在Kikuchi 淋巴结炎和狼疮性坏死性淋巴结炎中，其中的组织细胞myeloperoxidase 也为阳性。

与淋巴瘤相关的标记

ALK-1(Anaplastic lymphoma kinase-1)胞核+ 胞浆阳性着色用于大细胞分化不良性淋巴瘤，不能证实ALK1+ 与良好预后有关，一种罕见的大B 细胞细胞瘤，ALK1 阳性而CD20 阴性，但IgA 阳性；Bcl-2在核周围区阳性着色，在正常淋巴结，生发中心阴性，但mantle 和滤泡间细胞强阳性，在滤泡性淋巴瘤，（>80% 病例）生发中心强阳性，阴性不能排除滤泡性淋巴瘤，也用于鉴别单核样B 细胞增生（-）和单核样B 细胞淋巴瘤（+），有人用于诊断孤立性纤维性肿瘤；Cyclin-D1核阳性着色，主要用于Mantle 区淋巴瘤，几乎所有病例均为阳性，有些可能为弱阳性。

与分化阶段相关的标记