基于微流控芯片的外泌体分离检测及其在乳腺癌诊断和分型中的应用

途
—— 免疫方法
Acknowledgements
商 业 用 考 ， 禁 止 仅 供 学 习 参
Prof. Bingcheng Lin Dalian Institute of Chemical Physics Prof. Yong Luo Dalian University of Technology
超速离心法 100,000 × g 4 ℃条件下离心2 h； 1mlPBS冲洗，再 100,000 × g 离 心3h，弃上清。 蔗糖密度梯度离心 超速离心使蔗糖溶 液形成连续的密度 阶层，外泌体将在 1.13-1.19g/ml的密 度范围富集。
商 业 用
途
免疫磁珠分选法 使磁珠与抗体相结 合，与样品4 ℃共 培养，置于磁力分 选器中冲洗，收集。 试剂盒法分选法 加入exosome precipitation solution离心1500 × gfor 30 min， 弃上清。
仅
供
学
习
参
考
PLOS One, 2016, 11(3): e0150247
途
微流控芯片工作积累
商 业 用
Drug sensitivity test chip 药物活性检测芯片 Tumor multi-organ metastasis chip 肿瘤多器官转移芯片
RSC Advances, 2016, 6 (35), 29598 - 607
2016液体活检产业发展论坛
仅
供
学
习
参
考
A microfluidic chip for exosome isolation and its application on breast cancer diagnosis and subclassification
大连医科大学 2016-07-22
，
禁
止
考
，
Lab chip. 2010, 10(13):1671-7
禁
止
途
3D cell culture chip 细胞三维培养芯片
3D cell co-culture chip 细胞三维共培养芯片
Blood vessel model 微血管模型
Lab chip, 2012, 12： 2837–42
shear stress-loading cell culture chip 流体剪切力加载芯片
基于微流控芯片的外泌体进展
商 业 用
Anal. Chem. 2014, (86): 11125−11132
习
参
考
，
禁
止 仅 供 学
Lab Chip. 2014,(14): 3773-3780 Lab Chip. 2014, (14): 1891-1900 Lab Chip, 2016, (16): 489-496
仅
供
学
习
参
考
，
禁
止
Oncotarget, 2016,
途
外泌体（Exosomes）
是细胞分泌的直径 为50~200 纳米、 由脂质双分子膜包 裹的小囊泡。
仅
供
学
习
参
考
，
禁
止
商 业 用
Ø 外泌体（Exosomes）
外泌体介导细胞பைடு நூலகம்交流
①质膜内吞形成核内体， 核内体内陷,形成内含 外泌体的MVB； ②释放外泌体； ③装载溶酶体； ④通过配体与靶细胞结 合； ⑤与靶细胞质膜融合； ⑥其他膜泡是细胞质膜 直接分泌。
仅
供
学
习
体液 （循环性肿瘤细胞、 肿瘤标志物）
参
考
，
转移灶 （转移器官变 化、瘤细胞克 隆形成）
Science, 2011, 331, 1559-1564
禁
止
仅 供 学 习 参 考 ，
禁
止
基于微流控芯片的肿瘤研究
商 业 用 途
微流控芯片工作积累
商 业 用 参
Electrophoresis. 2009, 30:4285-91
考
受体 蛋白
，
禁
学
习
Ø 特异性标记物：
供
参
生物酶
黏附 因子 HSP70 脂质阀 MHCⅠ、 MHCⅡ
仅
肿瘤来源外泌体的特征与作用
肿瘤来源外泌体的特征: 表达来源肿瘤的蛋白标志物，如 肿瘤抗原和免疫抑制蛋白等。 肿瘤来源外泌体的作用: ①促进肿瘤组织的发生发展； ②进入血液及淋巴循环，作用于 远处靶器官。
途
外泌体表面标志物
途
生物学标记物 Ø 非特异性标记物： CD63、 CD9、 CD81 、CD82、 MHCI、MHCⅡ等。 EpCAM（上皮来源 肿瘤细胞）、 CD41a （血小板）、穿孔蛋 白（淋巴细胞）等。
CD9、CD63、 CD81 、CD82 跨膜蛋白
止
商 业 用
mRNA
细胞骨架蛋白 miRNA
基于微流控芯片的外泌体分离检测及 其在乳腺癌诊断和分型中的应用
商 业 用
途
微流控芯片（Lab on a chip）
微米尺度空间对 控的技术
可控
仅
供
灵活组合、整体
学
习
Ø 特点：规模集成、
参
考
，
禁
流体进行精确操
止
商 业 用
Ø 微流控：一种在
途
肿瘤及其转移过程
商 业 用 途
原发灶 （瘤细胞、间质 细胞、血管新生 以及它们的相互 作用）
途
Group members
Cooperators
仅 供 学 习 参 考 ，
禁
止
大连医科大学欢迎您！
商 业 用 途
仅
供
学
PLoS One. 2014;9(2):e89966
习
微流控芯片工作积累
商 业 用 ， 禁 止
RSC Advances, 2016, 6 (42), 35248-35256
Tumor-induced angiogenesis chip 肿瘤诱导血管新生芯片
Cell invasion chip 细胞侵袭芯片
外泌体的传统分离方法
消耗样品量大（几毫升至几十毫升）；分离检测分开进行
仅
供
学
习
参
考
，
禁
止
基于微流控芯片的外泌体检测进展
商 业 用
Lab Chip, 2007, 7, 1819
仅
供
学
习
Lab Chip, 2012, 12, 5202
参
考
，
禁
止
途
Lab Chip, 2013, 13, 2879
—— 物理方法
习
参
考
，
因此，检查血液中的外泌体 可以作为肿瘤的早期诊断、 快速疗效反馈、监测复发的 手段，是液体活检的指标之 一！
仅
供
学
禁
液体活检: 检测存在于体液中 的、来源于肿瘤组织的物质， 该物质可以提示肿瘤发展进 程及抗药性等信息，指导个 体化精准治疗。
止
商 业 用
途
肿瘤来源外泌体
液体活检指标之一
外泌体的传统分离方法