一流式细胞仪技术参数
一、流式细胞仪技术参数工作条件：1
50-60HZ、电源要求: 220V (±10%)1.1
℃:16-301.2 环境温度20-80%1.3 湿度：2 用途：免疫分析、淋巴细胞亚群分析；细胞周期分析、凋亡分析；感染分析、肿瘤细胞分析；多重细胞因子分析等。b5E2RGbCAP
技术规格和参数3
激发系统：3.1
3.1.1 激发光源：405nm紫色固态激光器、488nm蓝色固态激光器和640nm红色固态激光器，固定光路，空间立体激发。p1EanqFDPw
椭圆形光斑激光塑形：自动的多棱镜塑形系统，光斑大小：9x65um3.1.2
180x430μm 3.1.3 流动室规格：荧光收集和检测3.2
，大面积收集发射荧光。1.23.2.1 光胶耦合物镜，数值孔径3.2.2 每一激发激光对应一个独立检测单元，光胶耦合物镜自动分开汇集每一激光激发的发射荧光进入相对应检测单元，避免光谱交叉。DXDiTa9E3d
个独立三角型全反射检测系统21个独立八角型全反射检测系统、*3.2.3 配备3.2.4 光学检测系统内部采用全反射检测光路系统，荧光信号到达检测器只经过一个长通滤光片，信号能量损失最小。RTCrpUDGiT
检测系统依次优先检测易衰减的长波长信号，保证弱信号灵敏度。 3.2.5
个散射光探测器。个光电倍增和和2共计*3.2.6 12个信号检测器，包括103.2.7 荧光通道组合：405nm紫色激光器对应3个检测通道，滤光片包括450/50nm、525/50nm、
605/40 nm；488nm蓝色激光器对应4个检测通道滤光片包括530/30nm、575/25nm、695/40nm、780/60 nm；640nm红色激光器对应3个检测通道，检测滤光片包括：670/30nm、712/21nm、780/60 nm。通道之间最低光谱交叉，滤光片带有智能芯片，直接插拔，自动识别。5PCzVD7HxA 1 / 8
*3.2.8 荧光检测灵敏: FITC<100MESF，PE<50MESF(提供英文原版参数)；CFDA检测结果
FITC<5MESF，PE<5MESF（提供检测报告）。jLBHrnAILg
。提供英文原版参数)(>32,000个细胞/秒*3.3 样本分析速率：CV<3%3.4 变异系数：全峰宽。采用正压上样系统，非注射泵或蠕动泵。样本残留量<0.2%*3.5
30ul最小样本量：≤3.6
50μm检测颗粒大小：0.5-3.7
浮点分辨率。动态范围，符合IEEE 32bit3.8 数字信号处理：18bit3.9 脉冲处理系统:能同时分析脉冲信号峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度,可区分多倍体细胞、粘连细胞。xHAQX74J0X
3.10 可溶性蛋白分析：具备多重可溶性蛋白分析功能，包括：细胞因子、炎症因子、趋化因子等；可达单管数十重分析，包括：多重定量及动力学分析。LDAYtRyKfE
*3.11 液流车：独立液流车，避免振动影响仪器主机光路和液流；自动控制所有压力、鞘液、清洗液等，大体积液体储备保证长时间、稳定工作；鞘液桶20L，废液桶10L，清洗液桶5L，关机液桶5L。开关机自动清洗液路，正常状态鞘液消耗<1.10 L/h，待机状态鞘液消耗<1 mL/h。Zzz6ZB2Ltk 配置淋巴细胞亚群自动分析软件，无需手动设置，实现淋巴细胞亚群分型的全自动化。3.12 3.13 主软件：Windows系统，原版专业化流式数据收集及处理软件, 可按用户需求设置条件进行数据分析和报告。dvzfvkwMI1
3.14 临床自动软件：标配临床自动软件，拥有具CFDA认证的4色及6色配套试剂，可自动完成
4色或6色TBNK免疫分型和绝对计数、以及HLA-B27的自动检测，无需人员干预，并确保实验结果准确无误。rqyn14ZNXI
吋液晶显示器，激光彩色打印机。刻录光驱，21计算机：工作电脑3.15 1套：原配，DVD）50-60GHz净化电源（220±5V，3.16 净化电源：≥3KVA认证FDA认证和美国3.17 获得国家食品药品监督管理局的CFDA配置4套。三激光十色流式细胞仪主机：4.1 12 / 8
套。14.2 数据获取分析软件、淋巴细胞亚群自动分析软件：套。14.3 数据获取与处理系统：套。14.4 3千瓦净化稳压电源：桶。14.5 5L清洗液：桶。14.6 5L关机液：桶。14.7 20L鞘液：安装调试及技术培训5合同签定后，卖方派有经验的技术人员无偿到买方现场进行场地等指导。
5.1
5.2 设备到货后，卖方按买方通知时间派有经验的技术人员到买方单位进行设备的安装、调试和试运行，直至设备正常运行。EmxvxOtOco
卖方免费负责对买方操作人员进行现场技术培训。5.3
技术资料6
使用说明书，包括操作手册、软件手册等一套。6.1附件、备用件的使用资料一套。6.2上述资料，如果有中文版本就提供中文版本，没有中文版本提供英文版本6.3
质量保证7
质量保证期7.1
年。质量保证期为验收合格后17.2 质量保证期结束后，卖方有责任对买方的设备提供良好的维保服务，并在投标文件中说明指定维保代理人的情况。SixE2yXPq5
售后服务要求7.37.3.1 设备安装、调试、验收合格并做完设备全部功能项测试合格后，方可进入质量保证期。质量保证期内免费维修。质量保证期后提供终身优惠维修。6ewMyirQFL
7.3.2 质量保证期内的服务：在质量保证期内卖方提供4次保养服务，在国家法定工作日内开机使用合格率应达到95％以上，如果不能达到，按1:2加倍延长质量保证期内。卖方在接到买方维修电话后的24小时内到达用户现场维修或更换已损坏的零部件直至设备运转正常。kavU42VRUs 3 / 8
7.3.3 质量保证期内的服务：卖方在接到买方维修电话后的24小时内到达用户现场维修或更换已损坏的零部件直至设备运转正常。y6v3ALoS89
卖方应在投标文件中声明终身售后服务承诺、售后服务的方式和能力。7.3.4
7.3.5 卖方应在投标文件中声明北京地区或其他地区有技术服务及有经验的技术人员，有备件库，能够提供技术支持和培训。M2ub6vSTnP
包装和运输8
卖方负责设备的包装，包装箱必须坚固，并做到防潮、密封，防水、防火、防锈和防震，同时要配齐必要的支架，便于以后的使用，并防止因运输而发生损坏，适于海、陆、空运输和整体吊装。包装材料必须符合中国进口动植物检验检疫的有关规定。0YujCfmUCw
二、原位杂交仪技术参数：个程序张切片，可储存401、每次可做12分钟30℃，0－2、变性温度：50℃－99小时990－℃－3、杂交温度：3070℃，小时990－30℃－99℃，4、设定温度：分钟℃，2、加热时间：37℃－955分钟54595℃－℃，6、冷却时间：、程序选择：变性与杂交；杂交；调节温度7、杂交与变性可同时进行8、操作简便，按键设置温度和时间，程序设置可保存9））和显色原位杂交（CISHFISH、适用于荧光原位杂交（）、原位杂交（ISH10三、核酸提取仪、主要用途：1DNA从多来源样本中全自动纯化基因组1.1DNA1.2从多来源样本中全自动纯化病毒总核酸及细菌）（包含miRNARNA1.3 从多来源样本中全自动纯化总从动物样本中自动化提取病原微生物核酸1.44 / 8
从粪便样本中自动化提取病原微生物核酸1.5
；，电压：220-240V10-32℃，湿度：40-70%2、工件条件: 温度：、技术指标：3纯化原理：
基于硅胶膜真空抽滤法，并提供仪器原厂生产的硅胶膜纯化试剂盒3.1小时1.5个样本。纯化96个样本，用时*3.2 样品通量和运行时间：一次运行不少于96*3.3 封闭式工作平台，配备原厂仪器外罩，配备原厂HEPA滤膜和UV紫外消毒装置，保护样品，避免交叉污染eUts8ZQVRd
个样本时，无耗材浪费。88道，仅纯化3.4 移液通道数：大于等于活性炭滤器装置净化废气，保护操作人员安全；3.5*3.6机内提取过程中或者不需要使用枪头，如需使用枪头，用过的吸头被弃置于工作平台外部，保证工作环境中没有废弃物的堆积，避免交叉污染sQsAEJkW5T
吸头可回放，重复使用3.7仪器外罩打开时，纯化程序自动暂停，保护操作人员安全，再次关闭时继续原程序3.8盒个样本只需吸头1.53.9每纯化96软件使用简易方便，用户可自行改编、优化运行程序3.10后报告/3.11数据可追溯性：可读取样本条形码信息，生成运行前电脑控制，可以编程，一个试剂盒针对不同应用有不同程序，可升级，可更新。3.12原厂提供专门针对粪便中病原微生物核酸提取的试剂盒3.13原厂提供专门针对多种动物来源病原体提取的试剂盒3.14提取过程中的废液排出在工作台面以外。#3.15
、基本配置：4主机一台4.1
真空泵系统一套4.2
4.3 电脑一台（要求配置高于等于8G内存，1t硬盘容量，处理器：Intel i7，独立显卡2G显存）GMsIasNXkA
份核酸提取试剂耗材4804.4
、技术资料55 / 8
详细的英文操作指南、技术服务和培训6卖方须到买方提供的现场免费安装、调试设备，进行操作试验，直至运行正常，为仪器操作人员提供免费的操作及维护培训TIrRGchYzg
、质量保证7年1测试验收合格后。（须针对本项目开具）8、需提供制造厂商或总代理商针对本项目的授权书以及售后服务承诺书四、生物安全柜质量检测仪（碘化钾法）该测试设备适用于生物安全柜国际标准EN12469:2000及国家医药行业标准YY0569-2005中对生物安全柜的测试规程，用于Ⅰ类和Ⅱ类微生物安全柜防护参数的测试。该测试设备用来评价其防护水平和空间内的交叉污染，用来测试空间内有害物质的泄漏，以确保环境的安全。7EqZcWLZNX
气溶胶发生系统1.
；喷嘴真空压力2000Pa1.1
；达20mL1.2 工作流量9min；雾化转盘转速28000RPM1.3
；喷嘴与转盘间距0.1mm1.4
瓶500mL/溶液为15g/L的乙醇溶液，1.5 KI采样系统2.
；100L/min2.1 采样器采样流量；，直径25mm2.2 滤膜孔径0.3μm干燥用滤纸；2.3.
显色计数系统；3.
培养皿；3.1 55mm倍放大镜；3.2 10瓶。500mL/的PaCl 0.1mol/L的盐酸溶液，3.3 1.0g/L直径金属圆桶，模拟操作安全柜的操作者手臂。模拟手臂为3.4 63mm6 / 8
支架，定位气溶胶发生器、采样器和模拟手臂。3.5
家提供合同复印件。153.6 为保障售后服务，国内计量系统用户不少于由国内总代理商提供现场技术培训。3.7
、需提供制造厂商或总代理商针对本项目的授权书以及售后4五、高精度激光波长计1-5um 波长范围：*1.）10MHz2.被测激光类型：连续激光或者准连续激光（重频＞±0.2 ppm ±0.0002 nm @ 1000 nm *3.绝对精度：±0.002 cm-1 @ 10,000 cm-1±60 MHz @ 300,000 GHz
±0.06 ppm (±0.2 pm @ 3 μm)重复性：*4.
激光器，无需返回原厂校准HeNe*5.内置校准源：内置稳频位96.显示位数：-1, GHz, THznm, μm, cm7.显示单位：750 μW @5 μm550 μW @1 μm 80 μW @3 μm) 最小输入功率：*8.输入方式：准直光输入9.分钟预热时间：小于1510.提供针对本项目的原厂商或总代理商授权
及售后服务承诺书，加盖厂商或总代理商公章彩页。六、电子万能材料试验机主要参数及技术指标：主机1.)(带预应力的单立柱滚珠丝杠和导杠结构1.1机架型式：双立柱台式5kN1,2载荷能力：min／0.01－1000mm1.3试验速度：min／1.4返回速度：1200 mm+/-0.02mm位置测量精度：1.5≥0.06um位置控制分辨率：*1.6％+/-0.21.6速度控制精度：设定速度的％。量程，精度为200+/-0.5*1.7载荷测量精度：从测力计满程至1/。％/50量程，精度为+/-0.51.8应变测量精度：从引伸计满程至1≥1122mm1.9横梁行程：420mm，宽）1.10试验空间：高）1193mm控制测量系统：2.*2.1电气控制：试验机采用先进的32位全数字化控制。控制系统采用数字信号处理器（DSP）技术。*2.2数据采集速率：计算机同步数据采集速率应≥500Hz。（即数字信号处理器(DSP)输出给计算机的4个通道有效数据, 为每个通道≥500Hz）lzq7IGf02E （位移、载荷、应变、时间）个实时显示通道。2.3数据显示：4试验控制方式：速度控制、载荷控制、应变控制和应力控制。2.5载荷和应变测量：*2.67 / 8
)万分之一/500000(50/数转换器, 分辨率为1采用1) 19位模测力计和引伸计的自动识别。2)测力计和引伸计的自动标定和自动平衡。3)*2.7 试验机接口采用以太网接口，能够有效克服接口松动及USB口供电电压不足引起的通讯故障，保障试验过程中试验机的可靠性。zvpgeqJ1hk
试验软件：*3.3.1系统应采用最新版次的WINDOWS7中文界面, 可选用简体中文、英文等8种操作语言，在试验中可任意选择, 软件的试验方法应符合ASTM、ISO、GB等标准。并能进行材料的拉伸、压缩、弯曲、剥离等性能试验。NrpoJac3v1
软件具有试验数据存储、检索和再分析等功能。3.23.3试验报告可选择PDF格式。在屏幕上试验结果的数据和图形可直接粘贴到MS word 和MS
Excel文档上. 原始试验数据可直接存入MS Excel 1nowfTG4KI
软件具有拉伸、弯曲、压缩、模量、极值、平均值、标准偏差计算等功能。3.4*3.5软件应有各种试验方法的html格式中英文解释, 以便用户了解各种试验方法的定义和计算公式。附件4.一套 4.1 1KN传感器度。500到150％的过载保护。温度补赏一套*4.2 1kN气动拉伸夹具双面平推气动夹具，配置脚踏开关进行夹持控制。平面夹面一套，采用磁力吸附方式装配夹面，更换方便。配置25mm×25mm空压机一套4.3
:220V电压:0.6-0.8兆帕,,技术参数:流量:20L/分压力电脑4.4
CPUI7/8G RAM/1t硬盘/ DVD+/-RW /独立显卡2g显存/23宽屏显示器/W7中文专业系统（32位）fjnFLDa5Zo
制造商资质*5.5.1制造商需有校准资质，不需要借助第三方即能够独立出具国际认可的计量校准证书，如符合ISO17025或能够符合CNAS认证要求。提供相关证书文件，以证明制造商能够在试验机使用年限内，始终具有保证试验机初始精度的能力。tfnNhnE6e5
相关配置附件均应够在制造商中英文官方网站直接查询，并有相关技术说明。5.25.3 制造商应提供中华人民共和国计量器具型式批准证书，以确保所提供产品符合国家相关法律法规规定。
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流式细胞仪技术参数
一、流式细胞仪技术参数 1 工作条件： 1.1 电源要求: 220V (±10%)、50-60HZ 1.2 环境温度:16-30℃ 1.3 湿度：20-80% 2 用途：免疫分析、淋巴细胞亚群分析；细胞周期分析、凋亡分析；感染分析、肿瘤细胞分析；多重细胞因子分析等。 3 技术规格和参数 3.1 激发系统： 3.1.1 激发光源：405nm紫色固态激光器、488nm蓝色固态激光器和640nm红色固态激光器，固定光路，空间立体激发。 3.1.2 激光塑形：自动的多棱镜塑形系统，光斑大小：9x65um椭圆形光斑 3.1.3 流动室规格：180x430μm 3.2 荧光收集和检测 3.2.1 光胶耦合物镜，数值孔径1.2，大面积收集发射荧光。 3.2.2 每一激发激光对应一个独立检测单元，光胶耦合物镜自动分开汇集每一激光激发的发射荧光进入相对应检测单元，避免光谱交叉。 *3.2.3 配备1个独立八角型全反射检测系统、2个独立三角型全反射检测系统 3.2.4 光学检测系统内部采用全反射检测光路系统，荧光信号到达检测器只经过一个长通滤光片，信号能量损失最小。 3.2.5 检测系统依次优先检测易衰减的长波长信号，保证弱信号灵敏度。 *3.2.6 共计12个信号检测器，包括10个光电倍增和和2个散射光探测器。
3.2.7 荧光通道组合：405nm紫色激光器对应3个检测通道，滤光片包括450/50nm、 525/50nm、 605/40 nm；488nm蓝色激光器对应4个检测通道滤光片包括530/30nm、 575/25nm、695/40nm、780/60 nm； 640nm 红色激光器对应3个检测通道，检测滤光片包括：670/30nm、712/21nm、780/60 nm。通道之间最低光谱交叉，滤光片带有智能芯片，直接插拔，自动识别。 *3.2.8 荧光检测灵敏: FITC<100MESF，PE<50MESF(提供英文原版参数)；CFDA检测结果FITC<5MESF，PE<5MESF（提供检测报告）。 *3.3 样本分析速率：>32,000个细胞/秒(提供英文原版参数)。 3.4 变异系数：全峰宽CV<3% *3.5 采用正压上样系统，非注射泵或蠕动泵。样本残留量<0.2%。 3.6 最小样本量：≤30ul 3.7 检测颗粒大小：0.5-50μm 3.8 数字信号处理：18bit动态范围，符合IEEE 32bit浮点分辨率。3.9 脉冲处理系统:能同时分析脉冲信号峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度,可区分多倍体细胞、粘连细胞。 3.10 可溶性蛋白分析：具备多重可溶性蛋白分析功能，包括：细胞因子、炎症因子、趋化因子等；可达单管数十重分析，包括：多重定量及动力学分析。 *3.11 液流车：独立液流车，避免振动影响仪器主机光路和液流；自动控制所有压力、鞘液、清洗液等，大体积液体储备保证长时间、稳定工作；鞘液桶20L，废液桶10L，清洗液桶5L，关机液桶5L。开关机自动清洗液路，正常状态鞘液消耗<1.10 L/h，待机状态鞘液消耗<1 mL/h。 3.12 配置淋巴细胞亚群自动分析软件，无需手动设置，实现淋巴细胞亚群分型的全自动化。 3.13 主软件：Windows系统，原版专业化流式数据收集及处理软件, 可按用户需求设置条件进行数据分析和报告。
流式细胞仪论文：流式细胞仪的使用与维护
流式细胞仪论文：流式细胞仪的使用与维护摘要：介绍了流式细胞仪的结构、工作原理及软件的主要功能，在仪器的维护保养方面进行了详细地叙述。结合笔者工作实际，介绍了用流式细胞仪对鸡外周血淋巴细胞亚群分析结果。 关键词：流式细胞仪；流动室；细胞分选系统；淋巴细胞 use and maintenance of flow cytometry wang shujing, hao jianmin, bi jianjie, chang zhongle, cui yanshun shandong agricultural university, tai'an, 271018, china abstract: this article describes the structure of flow cytometry, how it works and the main functionality of the software, in the area of maintenance of the instrument are described in detail. in conjunction with our own actual work, the author analyzed the results by flow cytometric peripheral blood lymphocyte subsets in chicken. key words: flow cytometry; mobile office; cell sorting system; lymphocyte
easycyte mini guava流式细胞仪,适用于各种流式细胞学检测分析,如动物、昆虫、酵母、原代培养、转化细胞、悬浮和贴壁细胞以及荧光微球等。采用固态蓝色或绿色激光,四色、三色或两色荧光检测,前向散射检测,可选配侧向散射；有自冲洗系统,保证流动通路畅通。easycyte mini guava 流式细胞仪采用微毛细管流动技术,无需鞘液,特别适合于 传染性危险生物样品的分析,山东农业大学动物疫病防治重点实验室主要用于细胞绝对计数,cd4/cd8细胞计数,免疫细胞分析,细胞标记蛋白表达检测如gfp等。结合笔者多年使用该仪器的工作经验,对流式细胞仪的工作原理、使用与维护介绍如下： 1流式细胞仪的主要构造和工作原理 流式细胞术(flow cytometry,fcm)是20世纪70年代发展起来的高科技,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体,同时具有分析和分选细胞的功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内dna和rna含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析,在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析；能够分类收集(分选)某一亚群细胞,在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
流式细胞仪的应用
流式细胞仪的应用
流式细胞仪的应用 姓名：学号：2002015002 单位：研究生二队专业：病理学与病理生理学对于一个毕业以后就从来没有进过实验室使用过各种尖端仪器的研究生来说，仪器分析这个课程对我来说显而易见是重要而又陌 生的，就像一个小孩到了游乐园一样，每一种仪器都很吸引我，好奇 心也驱使我特别想尽快操作一下这些仪器，唯一的遗憾是本课程课时 太少，不能把中心实验室的所有仪器都了解一遍。12月4号学习了 流式细胞仪的原理与基本应用方法，虽然没有操作过，但是我想对我 在本次课上的所学的内容做一下总结并谈谈对流式细胞仪的粗浅认 识，由于没有实际基础，不对的地方请老师多多谅解并纠正。 流式细胞仪（Flow cytometry）是对细胞进行分选和快速测的仪器。它可以将分散在液体中的各个细胞的物理性质，生物化 学特征等参数进行快速测量并根据所得参数范围对目的细胞进行分 选并存贮。这些参数可以包括每一个细胞的体积、细胞凋亡及所包含 的可标记的蛋白质或者核酸的快速定量等。与传统的细胞测量方法 （免疫荧光和免疫印迹）相比，其优缺点可总结如下表： 流式细胞仪免疫荧光免疫印迹 优点1、明确阳性细胞比 例 2、同时检测多种蛋 白表达 3、蛋白定量容易 4、速度快，灵敏度 高 5、阳性细胞的 相对数量 6、明确组织和细 胞内定为 1、检测整体 表达情况 2、蛋白定量 较容易 缺点不能在组织和细胞 内定位1、蛋白定量困难 2、仅检测局部表 达情况 1、不能组织或细 胞内定位 2、不能确定阳性 细胞比例
由上表可以看出，与传统的细胞检测方法相比，流式细胞仪具有无可比拟的技术优势和应用前景，甚至可以说流失细胞术完全能够推动医学科研的发展，是一个伟大的发明。 流式细胞仪的原理：将待测的细胞样品制作成单个细胞的混悬液，根据实验目的对需要检测和分选的细胞进行特异性荧光染色并放入样品管，在清洁气体的压力下进入流动室。流动室内含有鞘液，鞘液可以约束样品使之处在喷嘴中心以提高测量精度，并防止样品靠近喷孔壁以导致堵塞。在这种作用下细胞排成单列一个一个地在鞘液包裹下被喷嘴喷出形成液体流柱。流柱流经高度聚焦的激光束时被特异染色的细胞被激发而产生特异性荧光，荧光被检测系统检测并转变成电信号进入计算机分析系统而得到细胞的物理、生物特性。流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的：由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当作废液抽吸掉。 通过原理我们也可以很容易的得到流式细胞仪的基本结构和功能： 1、液流系统。流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。 2、激光系统。经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。激光器又以氩离子激光器为普遍。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤 一、上样前的准备 FACSCalibu可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。 1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。 3L 70%乙醇（用无菌蒸馏水配制） 5L无菌蒸馏水 5L无菌PBS 2、在干净的鞘液筒中加入3L 70%乙醇。盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗 涤。安好鞘液筒。 3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。。 4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。 5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。 6、放上一支装有70 %乙醇的进样管。 7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。 9、从Acquire menu选择SortSetup。在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。按液流控制 键RUN。 10、在Setup 方框中打叉，点击Acquisition Control 菜单中Acquire。。 11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min ），点击Pause, Abort。 12、再重复上述步骤2次，共需要1h。 13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直 至洗净桶内壁残余乙醇。 14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。安好鞘液筒。 15、在收集管接口处安装2支新的收集管。 16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。 17、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。 18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause Abort。 19、再重复上述步骤2次，共需要1h。 20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L无菌PBS盖紧盖子。安好鞘液筒。 21、在收集管接口处安装2支新的收集管。 22、放上一支装有无菌PBS的进样管。 23、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。 24、第一支收集管（最左）中收集15 mL PBS后取下，使PBS由左至右流入下一收集管。重复 操作至2个管都收集了15 mL PBS为止。点击Pause, Abort。 25、在收集管接口处安装2支新的收集管。若要分选动物细胞，则应用无菌技术，用无菌 PBS4 % BSA缓冲液过夜包被50mL锥型管，将包被好的锥型管安置于收集接口。 26、按下述分选步骤分选样本 二、分选细胞
最详细的流式细胞仪实验方法
流式细胞仪实验方法 一、实验准备 1．标本制备： 2．最小化非特异性结合： 二、凋亡 1．凋亡的检测方法：网站和其它 2．PI染色法 3．Annexin V 法 4．TUNNEL法 三、细胞因子 1．激活的细胞因子 2．CBA 四、血小板 1．活化 2．活化检测 3．网织血小板 五、红细胞 1．网织红细胞 2．PNH 3．胎儿红细胞 六、肿瘤学 1．DNA 细胞周期 2．蛋白 3．多药耐药 4．微小残留白血病
第一部分标本处理 一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。 (二)间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。 二、最小化非特异性结合的方法 1．荧光标记的抗体的浓度应该合适，如果浓度过高，背景会因为非特异性的相互作用的增加而增加。 2．在使用第一抗体之前，将样品与过量的蛋白一起培育，如小牛血清蛋白（BSA），脱脂干奶酪，或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。这个步骤通过阻断第一抗体和细胞表面或胞内结构的非特异性的交互作用来降低背景。 3．在使用第一抗体之后，将样品与5%至10%的来自于同一寄主的正常血清和作为标记的第二抗体一起培育。这个步骤会减少不必要的第二抗体与第一抗体、细胞表面或胞内结构之间的交互作用。 通过用来自于同样的样品的血清稀释标记过的抗体可以略过此步骤。此步骤适用于很多方面，但有时候它也会导致已标记的第二抗体和正常血清中的免疫球蛋白的免疫复合体的形成。这种复合体会优先与一些细胞结构进行结合，或者它们最终会导致期望得到的抗体活性的丢失。 4．使用F(ab’)2片段会使背景决定于第一或第二抗体与FC受体的全分子结合。大多数的第二抗体的F(ab’)2片段容易利用。而第一抗体的F(ab’)2片段一般是不能利用或很难制作。因此，在NaN3存在的条件下，将新鲜组织或
流式细胞术原理及功能介绍
流式细胞术详解 一. 流式细胞术概述 流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术 ,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。 国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)。流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B- D公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能 ,多用于科学研究。 二.流式细胞仪主要技术指标 1．流式细胞仪的分析速度： 一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。 2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。 3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。 4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。 5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。 三.流式细胞仪主要构造和工作原理 流动室及液流驱动系统 流式细胞仪主要由以下五部分构成:①流动室及液流驱动系统②激光光源及光束形成系统③光学系统④信 号检测与存储、显示、分析系统⑤细胞分选系统。 流动室（Flow Cell或Flow Chamber）是流式细胞仪的核心部件，流动室由石英玻璃制成，单细胞悬液在细胞流动室里被鞘流液包绕通过流动室内的一定孔径的孔,检测区在该孔的中心，细胞在此与激光垂直相交，在鞘流液约束下细胞成单行排列依次通过激光检测区。流动室里的鞘液流是一种稳定流动，控制鞘液流的装置是在流体力学理论的指导下由一系列压力系统、压力感受器组成，只要调整好鞘液压力和标本管压力, 鞘液流包绕样品流并使样品流保持在液流的轴线方向，能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而使激光激发的荧光信息准确无误。见图12.1流动室示意图。流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、250μm等多种，供研究者选择。小型仪器一般固定装置了一定孔径的流动室。 图12.1流动室示意图(采自Coulter Training Guide) 四. 流式细胞仪主要构造和工作原理 激光光源及光束形成系统
流式细胞仪的应用
流式细胞仪的应用 姓名：学号：2002015002 单位：研究生二队专业：病理学与病理生理学对于一个毕业以后就从来没有进过实验室使用过各种尖端仪器 的研究生来说，仪器分析这个课程对我来说显而易见是重要而又陌 生的，就像一个小孩到了游乐园一样，每一种仪器都很吸引我，好 奇心也驱使我特别想尽快操作一下这些仪器，唯一的遗憾是本课程 课时太少，不能把中心实验室的所有仪器都了解一遍。12月4号学 习了流式细胞仪的原理与基本应用方法，虽然没有操作过，但是我 想对我在本次课上的所学的内容做一下总结并谈谈对流式细胞仪的 粗浅认识，由于没有实际基础，不对的地方请老师多多谅解并纠正。 流式细胞仪（Flow cytometry）是对细胞进行分选和快速测的仪器。它可以将分散在液体中的各个细胞的物理性质，生物化学特征等参 数进行快速测量并根据所得参数范围对目的细胞进行分选并存贮。 这些参数可以包括每一个细胞的体积、细胞凋亡及所包含的可标记 的蛋白质或者核酸的快速定量等。与传统的细胞测量方法（免疫荧 光和免疫印迹）相比，其优缺点可总结如下表：
由上表可以看出，与传统的细胞检测方法相比，流式细胞仪具 有无可比拟的技术优势和应用前景，甚至可以说流失细胞术完全能 够推动医学科研的发展，是一个伟大的发明。 流式细胞仪的原理：将待测的细胞样品制作成单个细胞的混悬液，根据实验目的对需要检测和分选的细胞进行特异性荧光染色并 放入样品管，在清洁气体的压力下进入流动室。流动室内含有鞘液，鞘液可以约束样品使之处在喷嘴中心以提高测量精度，并防止样品 靠近喷孔壁以导致堵塞。在这种作用下细胞排成单列一个一个地在 鞘液包裹下被喷嘴喷出形成液体流柱。流柱流经高度聚焦的激光束 时被特异染色的细胞被激发而产生特异性荧光，荧光被检测系统检 测并转变成电信号进入计算机分析系统而得到细胞的物理、生物特性。流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的：由喷嘴射出 的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路 判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液 滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当 作废液抽吸掉。 通过原理我们也可以很容易的得到流式细胞仪的基本结构和功能： 1、液流系统。流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光 学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是 液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用 下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周 后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装 有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。
流式细胞仪操作步骤(FACSCalibur)
一、开机程序： 1.检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的3/4位 置，可以连续工作3个小时左右）、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足 够空间容纳本批标本排弃的废液。如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中 气压。 2.依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印 机。 3.气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以 排除管路中气泡。 二、运行FACSComp软件、检查仪器状况 1.制备三色标准微球样本。一般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加入 1滴质控小微球，也可以根据实际情况调节浓度。 2.机器预热5 min，打开FACSComp软件，选择保持路径。选择所需校 正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。 3.在软件界面左侧Assay Selection选项中选择质控类型，即实验过 程中是否需要清洗样品。 4.上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。功能键设置在“RUN”。 5.仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。 6.FACSComp软件运行完毕，显示结果通过测试。 7.做Set up。 8.打印校正结果，退出FACSComp程序。 备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是在调节灵敏度（Sens）时，一定要用“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。在使用仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。 三、样品分析软件：CellQuest Pro 软件，选择“联机”。 1.
（2）对实验样本进行命名； （3）对实验通道进行预设（FSC,SSC,FL1-FL4）。 备注：如果界面被关闭，重新调出步骤： 2.调出质控模板。 3.画图 选择画图工具（一般选择散点图），Inspect 界面会自动弹出，对几个常用选项进行设定：将散点图选中（用鼠标点击散点图边框才能够 选中图形），将 更改横纵坐 备注：第一个散点图横坐标为FSC，纵坐标为SSC 。 （1一般获取10000个细胞。 （2 （ 3）将所有补偿调为0 （4）将非 52 （5）FSC和SSC （6 4.上阴性对照 将阴性对照管混匀，上机，功能键设置在“RUN”,散点图出现细胞信 号，第一个图：让细胞信号出现在自己看上去舒服的区域；其他三个 散点图，要将细胞信号调整到阴性区域，即左下角区域。通过移动通
流式细胞仪的原理及应用
山西大学研究生学位课程论文（2013 ---- 2014 学年第一学期） 学院（中心、所）：生物技术研究所 专业名称：微生物学 课程名称： 论文题目：流式细胞仪的原理及其应用 授课教师（职称）：崔晓东 研究生姓名：常姣 年级：研一 学号：201323001003 成绩： 评阅日期： 山西大学研究生学院 年月日
流式细胞仪的原理及其应用 姓名常姣专业微生物学 摘要本文简要论述了流式细胞仪( flowcyt ometry, FCM) 的工作原理, 并对其某些科学领域研究中的应用进行阐述, 包括在生物学、免疫学、临床学中的研究应用。 关键词 FMC；生物学；免疫学；临床学 流式细胞仪( fl o w c y to me tr y, F CM) 研制、发展、革新和应用领域的扩展，都是由生物学、生物技术、计算机科学、电子工程学、流体力学、激光技术、分子生物学、有机化学和物理学等多个学科综合发展和应用而实现的。近代流式细胞仪，由于单克隆抗体技术、定量细胞化学和定量荧光细胞化学的应用，使其在生物学、临床医学等众多研究领域的应用愈来愈广泛和重要，尤其在生物学中对细胞周期的动力学分析、细胞因子、细胞凋亡、信号传导、R N A / D N A 的分析、细胞表面受体及特异性抗原的分析等领域发挥着独特作用，具有操作简单、分析精确、重复性好、费用低廉、分析速度快等优点。 1流式细胞仪的构成及工作原理 流式细胞仪主要由液流系统、光学系统、电子系统、分析系统和细胞分选系统五个部分组成。将待测细胞制成单细胞悬液, 经荧光染料染色后加入样品管, 在一定气体压力下待测样品被压入流动室。待测细胞在鞘液的包裹下单行排列, 依次通过检测区, 被荧光染料染色的细胞受到强烈的激光照射后, 产生散射光和荧光信号。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管(PMT) 接收。散射光分为前向角散射(forwardscatter, FSC) 和侧向角散射(sidescatter, SSC) 。前者主要反映被测细胞的大小, 后者主要反映被测细胞的胞质、胞膜、核膜的折射等, 以及细胞内颗粒的性状。光信号通过波长选择通透性滤片后, 经光电倍增管接收后转为电信号, 再经数/模转换器转换为可被计算机识别的数学信号, 以一维直方图或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来[1,2]。 流式细胞仪还可以对分析中的目的细胞进行分选, 它是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。流动室的喷嘴上安装有超高频的压电晶体, 可以产生高频振荡, 使液流断裂为均匀的液滴, 待测细胞就包含在液滴之中。将这些液滴充上正或负电荷, 当带电液滴通过电场, 便会在电场的作用下发生偏转, 然后落入相应的收集器中, 从而实现细胞分选[2]。 2流式细胞仪的应用 流式细胞术的应用，简单用一句话概括就是，凡能被荧光分子标记的细胞或微粒均能用流式细胞仪检测。其中细胞生物学领域是流式细胞术在基础研究中应用范围最广泛的领域，因为最初这个技术就是为此目的而设计的。 2.1流式细胞仪在生物学中的应用 流式细胞仪在生物学中的应用越来越广泛,如在细胞生物学、细胞遗传学、分子生物学、神经生物学、微生物学、分子免役学、植物学等等许多生物学基础学科的应用和在细胞凋亡、细胞周期调控、细胞因子及细胞分型等研究中的应用[3]。 2.1.1 对凋亡细胞的分析 细胞凋亡是生物体生长发育过程中出现的正常现象, 在生物体形态构成、正常细胞更替以及维持
流式细胞仪操作方法
一、样品制备 1、取样（大约1×106 cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的Rnase（GenScript试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl的PI染液（GenScript试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。每个样品至少获取2×104cells， 二、上流式测细胞 1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。如果需要打印，打开打印机电源。打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。 1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。关闭液流抽屉。执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。 2.1、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。选择单参数图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数选择FL2-H 1024(此属于荧光,根据荧光染料的波长范围选择不同的荧光,本实验使用PI作为荧光染料,故选择FL2-H)
自己总结：流式细胞仪的原理和用途
流式细胞仪（Flow Cytometry） 1 流式细胞仪的概念及其发展历史 1．1 流式细胞仪的基本概念流式细胞仪（flow cytonletry，FCM）是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器，主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术，计算机对数据的采集和分析技术等。流式细胞仪以流式细胞术为理论基础，是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学和计算机等学科知识综合运用的结晶。流式细胞术是一种自动分析和分选细胞或亚细胞的技术。其特点是：测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量，即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性的多参数测量，且在统计学上有效。 1．2 流式细胞仪的发展简史最早的流式细胞仪雏形诞生于1934年，Moldavan提出使悬浮的单个血红细胞流过玻璃毛细管，在亮视野下用显微镜进行计数，并用光电记录装置测量的设想。1953年Crosland-Taylor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。其后又经过Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人的不断改进，设计了光电检测设备和细胞分选装置、完成了计算机与流式细胞仪的物理连接及多参数数据的记录和分析、开创了细胞的免疫荧光染色及检测技术、推广流式细胞仪在临床上的应用。近20年来，随着流式细胞仪及其检测技术的日臻完善，人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面的工作，以扩大FCM的应用领域和使用效果。 宋平根的《流式细胞术的原理和应用》是迄今为止对流式细胞仪及其技术阐述的最为详尽和透彻的中文著作。这本书非常详细地介绍了流式细胞术的历史、结构、原理、技术指标等，例举了其在医学和生物工程中的应用，非常适合从事此方面专业研究的人。由于这本书是13年前出版的，所以基本上没有涉及植物流式细胞仪检测技术。此外对于只需要对流式细胞仪有些基本认识的人士来说，这本书太复杂太深奥。谢小梅主要介绍了流式细胞仪在生物工程中的应用。杨蕊概括了流式细胞仪的工作原理，简单提及了流式细胞仪的应用。本文在分析这三篇论著或文章的优缺点后，用比较通俗的语言介绍了掌握流式细胞仪检测技术必须了解的一些原理，并对目前市场上的主流型号进行了客观的性能概括。 2 流式细胞仪的工作原理和技术指标 2．1 流式细胞仪工作原理除电源外，流式细胞仪主要由四部分组成：流动室和液流系统：激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统，其中流动室是仪器的核心部件。这四大部件共同完成了信号的产生、转换和传输的任务。 流动室和液流系统
流式细胞仪操作方法
—、样品制备 1、取样（大约lx cells）,离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1 ml 70%的冷乙醇固定细胞，-20°C冻存过夜。分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100|j 啲Rnase （GenScript试剂A）, 37°C水浴30min,然后再加入400』的PI染液（GenScript试剂B）,在4°C避光条件下孵ff30min后即可上FCM检测。每个样品至少获取2xl04cells, 二、上流式测细胞 1」、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属扌当板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow）,拧紧鞘液桶盖，安上金属扌当板，保证管路畅通无扭曲。检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。确实盖紧桶盖, 检查所有管路是否妥善安責。 1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBYo如果需要打印，打开打印机电源。打开电脑（密码：BDIS）,等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。 1.3、将压力阀責于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。关闭液流抽屉。执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowce呻的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流岀）。结束后自动STANDBY, 5分钟后即可进行试验。 2.1、从苹果画面中选取CELLQuest,最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis, X参数和丫参数分别取FSC-H、SSC-H （选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。选择单参数图标，打开，Plot type选择Acq-onalysis, X 参数选择FL2-H 1024（此属于荧光,根据荧光染料的波长范围选择不同的荧光，本实验使用PI作为荧光染料，故选择FL2-H） Y Parameter Plot Source： |< Select File... X Parameter Mie：| Acquisition
流式细胞仪使用方法
流式细胞仪的使用方法及相关资料 仪器名称：流式细胞仪 生产厂家：美国贝克曼库尔特有限公司 使用方法： 一．开机程序 1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。 2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡。 4．如果需要打印，打开打印机电源。 5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。 6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。 7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。 做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。 二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files) 1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。 2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。 3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。 三．用CELLQuest进行仪器的设定和调整 1．从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。 2．从屏幕上方Acquire指令栏中，选取Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton Control对话框移至合适位置。3．从Cytometer指令栏中，开启Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status 等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1，2，3，4获得此四个对话框。 4．在Detectors/Amps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifier mode)：线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周
流式细胞仪临床应用手册
目录 第一部分流式细胞术简介 (1) 第二部分流式项目检测列表 (4) 第三部分流式细胞术在各类疾病中的应用 (7) 第一章感染性疾病 (7) 第二章肿瘤、细胞治疗应用 (9) 第三章血液系统疾病 (14) 第四章器官移植检测 (15) 第五章风湿免疫性疾病 (16) 第六章呼吸系统疾病 (18) 第七章消化系统疾病 (20) 第八章泌尿系统疾病 (21) 第九章心脑血管疾病 (22) 第十章妇产科及儿科相关疾病 (24) 第十一章内分泌患者免疫功能检测 (26) 第十二章皮肤科疾病 (27)
第一部分流式细胞术简介 1 流式细胞术定义 流式细胞仪是集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器，为生物医学与临床检验学发展提供了最强有力的工具。 流式细胞分析技术(flow cytometry，FCM)又称流式细胞术，是20世纪70 年代发展起来的一种快速、准确、客观的检测技术，它能够同时检测快速直线流动状态中的单个细胞或微球的多项物理及生物学特性--在极短的时间内高速分析上万个甚至是几十万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，对其加以定性定量分析，还可以对特定群体加以分选。目前，流式细胞术已经广泛用于临床应用与基础研究，在免疫学、遗传学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等医学与生命科学所有领域内发挥着重要的作用。 2 流式细胞仪工作原理 制备成单细胞悬液的标本或单个微粒在上样前进行荧光染色。流式细胞仪检测到上样管后，产生一定的气体压力将待测样本压入流动池。同时鞘液（不含细胞或微粒的缓冲液）在仪器产生的高压作用下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与样本流形成一定的角度，形成一个圆形的鞘液流，包围着细胞或微粒高速流动，使待测细胞在鞘液的包裹下单行排列，逐个地通过流式细胞仪的激光聚焦区（流动池），从而被检测到，并发出散射光及荧光等多种光学信号。光学信号通过光电信号转换器及电子信号处理系统采集及分析后，最后以图形的形式将数据结果显示在电脑屏幕上。 3 流式细胞仪的主要结构 光学系统，液流系统，信号处理及放大系统，计算机系统。
流式细胞仪分析技术及应用题库1-2-10
流式细胞仪分析技术及应用题库1-2-10
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]关于液流系统的鞘液，下述哪项是不正确的（）. A.鞘液是辅助样本作正常检测的基质液 B.鞘液是用来与样本作对比的 C.鞘液是包裹在样本流周围 D.使样本保持处于喷嘴中心位置，保证检测精确性 E.防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞 鞘液是辅助样本作正常检测的基质液，其主要作用是包裹在样本流周围，使样本保持处于喷嘴中心位置，保证检测精确，同时又防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]分选速度与细胞悬液中分选细胞的下述哪项直接相关（）. A.细胞含量 B.细胞性质 C.细胞大小 D.有否胞膜 E.单核或多核 分选速度与细胞悬液中分选细胞的细胞含量直接相关。一般分析速度为5000～10000；分选速度掌握在1000以下。
问题： [单选,A4型题,A3A4型题]流式细胞术是一种对单细胞或其他生物粒子膜表面以及内部的化学成分，进行定量分析和分选的检测技术，它可以高速分析上万个细胞，并能从一个细胞中测得多个参数，是目前最先进的细胞定量分析技术。流式细胞仪的主要组成不包括（）. A.A.液流系统 B.光路系统 C.抗原抗体系统 D.信号测量 E.细胞分选 (天津11选5 https://www.360docs.net/doc/e613042120.html,)
问题： [单选,A4型题,A3A4型题]流式细胞术是一种对单细胞或其他生物粒子膜表面以及内部的化学成分，进行定量分析和分选的检测技术，它可以高速分析上万个细胞，并能从一个细胞中测得多个参数，是目前最先进的细胞定量分析技术。流式细胞仪的技术特点不包括（）. A.A.采用鞘流原理 B.以激光作激发光源 C.使用散射光检测 D.检测荧光信号 E.采用电阻抗及化学染色原理
双激光流式细胞仪参数
双激光流式细胞仪参数 一、设备名称、技术参数及功能要求： 1.设备名称 分析型流式细胞仪 2.设备数量：1套 整套设备应包括：液流系统、光学系统、电子系统、数据采集系统，电脑工作站以及分析软件。 3.设备功能 能够进行细胞周期、细胞凋亡、细胞浓度、细胞绝对计数、免疫分型、药物筛选、抗体测定、细胞活性鉴定等细胞全方位分析。 4.工作条件 4.1 电源：220V, 50Hz交流电 4.2 环境温度：5- 50℃ 4.3 相对湿度：30 % -90 % 4.4 运行：可连续运行。 5.主要技术和性能规格要求 5.1技术指标 5.1.1激光光源：双激光，488nm蓝色固态激光器，640nm红色固 态激光器，同时根据用户需要可以定制375nm、405nm、561nm、730nm 激光器。 5.1.3液流系统：采用流体动力学聚焦技术。
5.1.4液流动力系统：微处理器精确控制的双蠕动泵驱动系统 5.1.5荧光检测通道：FL1：533/30nm；FL2：585/40nm；FL3：>670nm；FL4：675/25nm 5.1.6荧光检测系统，光路稳定，即使搬运也无需调整光路 *5.1.7数据数字采集：不用调电压即可实现一个图上6个数量级的数据动态范围同时显示。信号处理系统:24-bit，并且具有1600万道的数值化数据解析度。 5.1.8样本分析速度：≥10,000事件/秒。 *5.1.9流动室直径：≥200um 5.1.10荧光分辨率:<3% CV 5.1.11荧光线性：2±0.05% (CEN) *5.1.12检测器必须为光电倍增管（PMT） 5.1.13散射光分辨率：可成功分辩人外周血中的粒、单、淋细胞5.1.14单个样本事件收集数：≥100万事件/孔。 *5.1.15细胞流速调节模式，共4种速度模式：低速(14μl/min)；中速(35μl/min)；快速(66μl/min)；用户自定义，样品流速设定：10-100μl/min，可在此范围内自由选择。 5.1.16推荐鞘液：经0.2um过滤器过滤的纯水，无需专门鞘液。 5.1.17光路调校：固定免调校光路设计。 5.1.18管路自动清洗功能：具有，维护方便。 5.1.19试剂与耗材：完全开放,使用通用试剂和耗材,可以使用各种类型的管子，至少能用12x75mm、5ml、2ml、1.5ml、0.5m和PCR