灵芝多糖的研究及其提取工艺

灵芝多糖提取工艺

1、灵芝多糖简介

灵芝多糖是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质。不溶于高浓度的酒精 , 微溶于低浓度的酒精及冷水 , 在热水中能全部溶解。目前已分离到的有200多种，其中大部分为β–葡聚糖，少数为α–葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成，是一种螺旋状立体构形物，其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间主要以氢键固定，分子量从数百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。

灵芝多糖都存在于灵芝的细胞壁内壁。灵芝多糖中除含有葡萄糖外 , 大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖 , 但含量较少。单糖间糖苷键连接有1,3、 1,4 和 1, 6 数种。大多为β型结构 , 少数为α- 型结构。α-型多糖没有药理活性 ( 药效 ) 。多数多糖链有分枝 , 部分多糖链含有小分子肤链。多糖链分枝密度高或含有肤链的其药理活性也高。灵芝多糖在水溶液中多糖链一般由三股糖链组成 , 在 o. 1 摩 / 升氢氧化纳溶液中时多糖链的三股糖链离解为单股单糖链。

多糖的药理活性与单糖间糖苷键的结合形式有关。单糖间以β- 1 , 3 、 1, 6 或β-1,4 、 1, 6-糖苷键连接是有效的即具有药理活性 , 而纯β_-1 ,4- 糖背键连接的则没有药理活性。此外 , 多糖的药理活性还与其立体构形有关 , 若螺旋形立体结构被破坏 , 其活性则大大下降。淀粉、纤维素、糊精也是多糖 , 但其构形与灵芝多糖 ( 或其他真菌多糖 ) 不同。淀粉、纤维素等多糖没有螺旋形立体结构 , 单糖间的连接全是β- 1,4-连接。纤维素是β-型多糖 , 淀粉、糊精是α-型多糖。由于其构形不同 , 所以淀粉、糊精、纤维素都没有药理活性。

灵芝多糖是灵芝的最有效成分之一 ,已分离到的灵芝多糖有 200 多种 , 其中有数十种的结构已被搞清 , 分子量已被测定。

现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤、抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白

质能力，延长寿命，灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性的特性。多糖分子量大于1×104时显示强抑制肿瘤活性，活性强弱还与多糖链分叉的程度及支链上羟基的数量有关。灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关。

2、灵芝多糖提取工艺

2．1、灵芝菌丝体多糖的提取及含量检测

2.2.1、灵芝菌丝体多糖的提取

取适量的灵芝湿菌体，用乙醇等有机溶剂进行处理，以除去湿菌体中的脂类物质，同时使糖苷酶失去活性，防止多糖的降解。

用热水提取多糖。取上面经预处理的灵芝湿菌体，放人1：20的热水（95℃）中浸提，一次3小时，连续浸提3次，合并3次的水浸提液减压、浓缩至一定体积，再用3倍体积的95%乙醇混合，静置10－12小时，再离心，最后加入75%的乙醇反复洗涤，以沉淀多糖。此沉淀物为粗多糖，其中混杂有蛋白质、色素、低聚糖等小分子杂质，一般要经过纯化。

多糖的纯化，去蛋白质和deae纤维素柱层析。去蛋白质一般采用sevag法：加入0.2倍多糖溶液体积的氯仿和0.04倍体积的正丁醇混合振荡半小时进行分离，直至氯仿与水的界面无沉淀为止，且要重复处理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白质。多糖纯化一般采用硼酸型deae纤维素柱层析法：取脱蛋白后的多糖，分别以0.025mol/l、0.1mol/l的硼砂，0.1mol/l的氢氧化钠溶液进行洗脱，然后用0.2%恿铜硫酸液比色测定吸收度，收集有多糖的洗脱液，再浓缩脱盐即得所需的多糖。

2.2.2、多糖纯度的鉴定

可用电泳法进行鉴定，如果存在单一带，说明为纯多糖。

2.3.3、多糖与多糖中蛋白质含量的测定

取一定量菌丝体粗多糖，加水煮沸溶解，用sevag方法脱去蛋白考马斯亮兰法测其粗多糖中蛋白质和多糖的含量。一般菌丝体中粗多糖含17.01%、多糖含5.43%、蛋白质含量2.16%。

2.2、灵芝子实体多糖的提取及含量检测

2.2.1、灵芝子实体多糖的提取

取适量的灵芝子实体，捣碎成粉末，用80目筛过筛，然后用热水提取法进行提取。具体操作同菌丝体多糖的提取。提取出的粗多糖含有色素、蛋白质等小分子杂质，也须除去。

子实体粗多糖去除蛋白质也采用se阴法。去除色素，目前尚未发现很理想的方法。一般用乙醇进行反复冲洗，但效果不很理想。

2.2.2、多糖纯度的鉴定

同菌丝体多糖纯度的鉴定。

2.2.3、子实体粗多糖、多糖及蛋白质含量的测定。

具体方法同菌丝体多糖及蛋白质含量的测定。测得子实体中粗多糖7.5%、多糖1.5%，蛋白质0.6%，其含量均低于菌丝体中的含量。可见菌丝体阶段就形成了灵芝多糖的有效成分，为灵芝液体深层发酵生产菌丝体提供了科学依据。