分析方法验证培训
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ICH － Q2定义： 重现性指不同试验室之间的精密度
2.7.2-什么时候需要作重现性？
是比较实验室间的差异 当一个方法要升级到法规方法时，需要做 这个工作
3 . 0 —准确度
概念 原料药准确度测定 制剂产品准确度测定 杂质准确度测定 推荐准确度测定方法 推荐准确度测定接受标准 AOAC 浓度与回收率关系
Validation of Analytical Procedure 分析方法验证
第二部分:实验设计与操作
1.0－讲座目的 • 掌握验证试验设计 • 掌握验证试验操作 • 了解确定接受标准原则
2 . 0 一精密度
概念 容易混淆的精密度中术语 重复性中间精密度 推荐重复性接受标准 AOAC 浓度与精密度关系 重现性
2 . 1 一概念 1 ：精密度
lCH-Q2 定义： 分析方法的精密度指在规定条件下，对均 质样品，多次取样进行一系列检测结果的 接近程度（离散程度）
2 . 2 一容易混淆的精密度中术语
仪器重复性 相同人员，仪器，日期，标准液方 法重复性 相同人员，仪器，日期，重新配制 标准液 中间精密度 不同日期，不同分析人员，不同仪 器
刚开发的分析方法 修正或建立分析方法用于新的问题 分析方法变更 分析方法在不同实验室，分析人员使用 不同仪器 证明两个分析方法的等效性
验证需要考虑的因素
确认并校验的仪器 文件化的方法 可靠地参数标准品 合格的分析人员 样品完整性
验证基本假设 〔 前提）
专属性得到证明 方法己经是最佳条件 用统计学方法处理数据
分析方法转移验证
分析方法转移方案及程序
精密度 准确度 耐用性
编写并批准的具体测试方法 熟练程度核实 新实验室正式验收
方法再验证
概念 需运行方法再验证的变更情况 方法再验证要求
概念 6 ：方法再验证
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原 则定义：
在某些情况下，如原料药合成工艺改变，制剂处方 改变，分析方法发生改变等，均有必要对分析方法 再次进行全面或部分指标的验证，以保证分析方法 可靠，这一过程称为方法再验证
新方法验证步骤（续2）
确定日常工作中系统适应性测试及/或分析 质量控制检查的类型及频率 将验证过程，结果及结论总结形成完整的 验证报告
概念3：替代分析方法
FDA定义： 目的在于替代法规分析方法的分析方法
基本内容
专属性 检测限 定量限 精密度 线性与范围 准确度 耐用性
依靠变更情况确定重新验证的内容与程度
其它
概念 参考文献
概念 7 ：系统适应性
在一个系统（主要是色谱分离系统）被使 用前，检查其系统性能指标是否满足分析 要求的过程 它是确保色谱系统质量性能的要素
概念8：接受标准
FDA定义： 用于验收分析结果的数字限度，范围，或 其他适当的计量
参考文献
官方认可的标准
USP/NF EP BP ChP JP AOAC
客户提供的，经过验证后的方法 相关实验室经验证后正在使用的方法
转移验证的要求
系统适应性及方法专属性必须验证 方法耐用性可以不验证 杂质测试方法检测限与定量限必须验证 其它验证项目根据实际情况决定，对于项 目的选择与取舍应有详细的讨论
分析方法按特性分类
第一类主成分定量 第二类杂质或降解产物测定 第三类性能特点测定 第四类鉴别试验
USP
ICH
WHO
选择性
选择性
范围 准确度 精密度
选择性
线性度及范围 准确度 精密度
线性度及范围 线性度 准确度 精密度
重复性 中间精密度 重现性
检测限 定量限 耐用性 耐受性
检测限 定量限
3 . 1 —概念 7 ：准确度
ICH—Q2 定义 分析方法的准确性指的是真实值或认可的 参考值与测量值之间相近程度
3 . 2 —原料药准确度测定
用该方法分析已知纯度的分析物 该方法的分析结果与成熟的分析方法相比 较，该成熟方法准确度是已知的 在精密度，线性，专属性建立后，进行推 论
范围
耐用性
±
±
+
±
+
±
WHO要求验证项目
鉴别 准确度 精密度 杂质定量 + + 杂质限度 含量 + + 特性 + +
耐用性 线性和范围
专属性 检测限 定量限
+ + -
+ +
+ +
+ + + -
+ +
+ -
+ +
+ -
方法转移验证
证明经过其它实验室的验证，并可以正式 运行的分析测试过程，是否可以在本实验 室运行，并适应实际的使用情况：
现有验证指南缺陷
仅仅提出了要求验证的项目 没有给出具体的验证方法 没有给出判断标准 一些验证中的实际问题没有指导原则
分析方法验证方案内容
阐明目的和范围 责任 书面的分析方法 使用的物料与仪器目录 每一参数的实验程序 统计方法 每一参数的验证标准
仪器的确认
2 . 3 一重复性
概念 推荐重复性测定方法
2 . 3 . 1 一概念 2 ：重复性
ICH -Q2 定义： 重复性是指在同样的操作条件下，较短时 间间隔的精密度
2 . 3 . 2 一推荐重复性测定方法
在方法规定的线性范围内重复测定 如 3 个浓度，每个浓度 3 次 或 100 ％的测试浓度，测定六次 记录每次测定各组分响应 计算各响应值与平均值之间相对标准偏差
0.001 0.0001 0.00001 0.000001 0.0000001
10-5 10-6 10-7 10-8 10-9
10ppm 1ppm 100ppb 10ppb 1ppb
7.3 11 15 21 30
2.7-重现性
概念 什么时候需要作重现性
2 . 7 . 1 一概念 6 ：重现性
方法重复性
测定结果的相对偏差
仪器分析小于2% 容量分析小于0.3%
2 . 6 －AOAC 浓度与精密度关系
浓度（%） 比率 单位 RSD（%）
100
≥10 ≥1 ≥0.1 0.01
1
10-1 10-2 10-3 10-4
100%
10% 1% 0.1% 100ppm
1.3
2.7 2.8 3.7 5.3
构造，型号和制造商手册 改造 安装确认和运行确认 校准程序 维护保养养计划
不同验证具体要求
验证的范围 新方法验证步骤 方法转移验证 方法重新验证
验证的范围
新方法要求进行完整的验证
药典的方法要求部分进行验证（确证）
重大要的变化需要进行部分再验证
新方法验证步骤
概念2 分析方法验证
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原 则定义： 为使测试结果准确，可靠，必须对所采用 的分析方法的科学性，准确性和可行性进 行验证，以充分表明分析方法符合测试项 目的目的和要求，这就是通常所说的对方 法进行验证
分析方法形成过程
什么情况分析方法需要验证？
分析方法开发和验证
验证前需要考虑的事情
•概念 •分析方法形成过程 •验证需要考虑的因素 •验证基本假设（前提） •现有验证指南缺陷
•分析方法验证方案内容
•仪器的确认
概念 1 ：分析方法
ICH—Q2定义： 分析方法是指进行分析的方式，应详细描 述每一个分析试验所必需的步骤 它包括，但不局限于：样品，参照对照品， 试剂的配制，仪器的使用，标准曲线的绘 制，计算公式的运用等
2 . 3 . 2 . 4 一方法重复性实验
取同一批号均匀样品 按照分析方法规定至少称量出六份 按含量测定方法测定每一份样品含量 计算每一次测定的含量与平均含量之间的 相对标准偏差
2.4-中间精密度
概念 推荐中间精密度测定方法
2 . 4 . 1 一概念 5 ：中间精密度
ICH-Q2 定义 中间精密度指的是试验室内部条件改变， 如：不同日，不同分析者，不同仪器等情 况下的精密度
ICH 一 QZA Text on Validatlon of Analytical Procedure : ( 1994 ) ICH 一 QZB Validation on AnaIytical Procedures : Methodology： ( 1995 ) CDER Reviewer Guidance : Validation of ChromatographicMethod ( 1994 ) CDER Submitting Samples and Analytical Data for MethodValidations （1987 ) CDER Draft Analytical Procedures and Method Validation ( 2000 ) CDER Bioanalytical Method Validation for Human Studles ( 1999 ) USP < 1225 > Vaildation of Compendial Methods ( current revlsion ) 中国药典：药品质量标准分析方法验证
满足相应的测试要求 真实反映被测物相应的特性， 浓度，质量，纯度及效价情况
概念 4 ：法规分析方法
FDA 定义： 是用于评佑原料药或制剂某一个规定特性 的分析方法
概念5 :交叉验证
FDA定义： 在同一个研究或不同交叉研究中，用两种 或多种分析方法进行分析，对验证参数进 行比较
转移验证方法来源
3 . 3 —制剂准确度测定
用该方法去测按处方量制成的混合物（加 入已知量被测物） 在制剂中加入已知量主药或与另一成熟方 法比较 在精密度，线性和专属性建立后得出
2 . 4 . 2 —推荐中间精密度测定方法
应确定随机事件对分析方法精密度的影响， 如不同日期，不同分析人员，不同仪器等 等 没有必要一一考察 用均匀设计，或正交设计方法
2 . 5 一推荐重复性接受标准
系统重复性
S/N>1000,RSD<1% 1000> S/N>100,RSD<2% S/N<10,RSD<4% S/N<10,RSD<8%
检测限 定量限 耐用性
ICH,USP及WHOBaidu Nhomakorabea证要求
FDA要求验证项目
鉴别 杂质限度 杂志定量 含量及溶出度 特性
准确度
重复性
-
-
+
+
+
+
+
+
中间精密度
专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性
+ -
+ + -
+
+ + + + +
+
+ + + +
+
+ +
ICH要求验证项目
鉴别 准确度 重复性 中间精密度 专属性 检测限 定量限 线性 + 杂质限度 + + 杂志定量 + + + + + + 含量及溶出度 + + + + +
Validation of Analytical Procedure 分析方法验证
第一部分：基本要求
Validation of Analytical Procedure 分析方法验证
第二部分：实验设计与操作
1.0－讲座目的
• 掌握验证试验设计 • 掌握验证试验操作 • 了解确定接受标准原则
第一部分:基本要求
开发新方法或从相关实验室获得新方法 制定验证方案，验证规程或验证主计划 确定方法（验证）适用的目标，范围 确定实验参数及可接受的标准 确定验证实验过程 确认验证使用的仪器相关性能
新方法验证步骤（续1）
确认验证所需的人员，试剂及标准 运行预验证试验 如果需要调整方法或接受标准 运行完整的验证试验 建立该方法的SOP用于日常分析工作 确定需要重新验证方法的标准
2.3.2.1-概念3：系统重复性
相同条件下，同一分析人员对同一样品溶 液多次测试结果的接近程度
2 . 3 . 2 . 2 —系统重复性实验
取同一均匀标准样品溶液 连续重复测定六次 记录每次测定各组分响应 计算各响应值与平均值之间相对标准偏差
2.3.2.3-概念4：方法重复性
相同条件下，同一个分析人员对同一个均 匀样品，多次取样测定所得结果的接近程 度
需运行方法再验证的变更情况
改变药物合成工艺 改变制剂组成 改变分析过程
操作过程的更改 改变仪器，色谱柱等硬件 测试条件持续改变以适应系统适应性要求，且改变 程度超出药典规定的方法耐用性验证范围
方法再验证要求
证实相应的变更发生后，原使用的分析测 试过程：
能够继续保持其特有的性质（如专属性） 能够继续真正反映被测物的相应特性（检测限与定 量限）
2.7.2-什么时候需要作重现性？
是比较实验室间的差异 当一个方法要升级到法规方法时，需要做 这个工作
3 . 0 —准确度
概念 原料药准确度测定 制剂产品准确度测定 杂质准确度测定 推荐准确度测定方法 推荐准确度测定接受标准 AOAC 浓度与回收率关系
Validation of Analytical Procedure 分析方法验证
第二部分:实验设计与操作
1.0－讲座目的 • 掌握验证试验设计 • 掌握验证试验操作 • 了解确定接受标准原则
2 . 0 一精密度
概念 容易混淆的精密度中术语 重复性中间精密度 推荐重复性接受标准 AOAC 浓度与精密度关系 重现性
2 . 1 一概念 1 ：精密度
lCH-Q2 定义： 分析方法的精密度指在规定条件下，对均 质样品，多次取样进行一系列检测结果的 接近程度（离散程度）
2 . 2 一容易混淆的精密度中术语
仪器重复性 相同人员，仪器，日期，标准液方 法重复性 相同人员，仪器，日期，重新配制 标准液 中间精密度 不同日期，不同分析人员，不同仪 器
刚开发的分析方法 修正或建立分析方法用于新的问题 分析方法变更 分析方法在不同实验室，分析人员使用 不同仪器 证明两个分析方法的等效性
验证需要考虑的因素
确认并校验的仪器 文件化的方法 可靠地参数标准品 合格的分析人员 样品完整性
验证基本假设 〔 前提）
专属性得到证明 方法己经是最佳条件 用统计学方法处理数据
分析方法转移验证
分析方法转移方案及程序
精密度 准确度 耐用性
编写并批准的具体测试方法 熟练程度核实 新实验室正式验收
方法再验证
概念 需运行方法再验证的变更情况 方法再验证要求
概念 6 ：方法再验证
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原 则定义：
在某些情况下，如原料药合成工艺改变，制剂处方 改变，分析方法发生改变等，均有必要对分析方法 再次进行全面或部分指标的验证，以保证分析方法 可靠，这一过程称为方法再验证
新方法验证步骤（续2）
确定日常工作中系统适应性测试及/或分析 质量控制检查的类型及频率 将验证过程，结果及结论总结形成完整的 验证报告
概念3：替代分析方法
FDA定义： 目的在于替代法规分析方法的分析方法
基本内容
专属性 检测限 定量限 精密度 线性与范围 准确度 耐用性
依靠变更情况确定重新验证的内容与程度
其它
概念 参考文献
概念 7 ：系统适应性
在一个系统（主要是色谱分离系统）被使 用前，检查其系统性能指标是否满足分析 要求的过程 它是确保色谱系统质量性能的要素
概念8：接受标准
FDA定义： 用于验收分析结果的数字限度，范围，或 其他适当的计量
参考文献
官方认可的标准
USP/NF EP BP ChP JP AOAC
客户提供的，经过验证后的方法 相关实验室经验证后正在使用的方法
转移验证的要求
系统适应性及方法专属性必须验证 方法耐用性可以不验证 杂质测试方法检测限与定量限必须验证 其它验证项目根据实际情况决定，对于项 目的选择与取舍应有详细的讨论
分析方法按特性分类
第一类主成分定量 第二类杂质或降解产物测定 第三类性能特点测定 第四类鉴别试验
USP
ICH
WHO
选择性
选择性
范围 准确度 精密度
选择性
线性度及范围 准确度 精密度
线性度及范围 线性度 准确度 精密度
重复性 中间精密度 重现性
检测限 定量限 耐用性 耐受性
检测限 定量限
3 . 1 —概念 7 ：准确度
ICH—Q2 定义 分析方法的准确性指的是真实值或认可的 参考值与测量值之间相近程度
3 . 2 —原料药准确度测定
用该方法分析已知纯度的分析物 该方法的分析结果与成熟的分析方法相比 较，该成熟方法准确度是已知的 在精密度，线性，专属性建立后，进行推 论
范围
耐用性
±
±
+
±
+
±
WHO要求验证项目
鉴别 准确度 精密度 杂质定量 + + 杂质限度 含量 + + 特性 + +
耐用性 线性和范围
专属性 检测限 定量限
+ + -
+ +
+ +
+ + + -
+ +
+ -
+ +
+ -
方法转移验证
证明经过其它实验室的验证，并可以正式 运行的分析测试过程，是否可以在本实验 室运行，并适应实际的使用情况：
现有验证指南缺陷
仅仅提出了要求验证的项目 没有给出具体的验证方法 没有给出判断标准 一些验证中的实际问题没有指导原则
分析方法验证方案内容
阐明目的和范围 责任 书面的分析方法 使用的物料与仪器目录 每一参数的实验程序 统计方法 每一参数的验证标准
仪器的确认
2 . 3 一重复性
概念 推荐重复性测定方法
2 . 3 . 1 一概念 2 ：重复性
ICH -Q2 定义： 重复性是指在同样的操作条件下，较短时 间间隔的精密度
2 . 3 . 2 一推荐重复性测定方法
在方法规定的线性范围内重复测定 如 3 个浓度，每个浓度 3 次 或 100 ％的测试浓度，测定六次 记录每次测定各组分响应 计算各响应值与平均值之间相对标准偏差
0.001 0.0001 0.00001 0.000001 0.0000001
10-5 10-6 10-7 10-8 10-9
10ppm 1ppm 100ppb 10ppb 1ppb
7.3 11 15 21 30
2.7-重现性
概念 什么时候需要作重现性
2 . 7 . 1 一概念 6 ：重现性
方法重复性
测定结果的相对偏差
仪器分析小于2% 容量分析小于0.3%
2 . 6 －AOAC 浓度与精密度关系
浓度（%） 比率 单位 RSD（%）
100
≥10 ≥1 ≥0.1 0.01
1
10-1 10-2 10-3 10-4
100%
10% 1% 0.1% 100ppm
1.3
2.7 2.8 3.7 5.3
构造，型号和制造商手册 改造 安装确认和运行确认 校准程序 维护保养养计划
不同验证具体要求
验证的范围 新方法验证步骤 方法转移验证 方法重新验证
验证的范围
新方法要求进行完整的验证
药典的方法要求部分进行验证（确证）
重大要的变化需要进行部分再验证
新方法验证步骤
概念2 分析方法验证
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原 则定义： 为使测试结果准确，可靠，必须对所采用 的分析方法的科学性，准确性和可行性进 行验证，以充分表明分析方法符合测试项 目的目的和要求，这就是通常所说的对方 法进行验证
分析方法形成过程
什么情况分析方法需要验证？
分析方法开发和验证
验证前需要考虑的事情
•概念 •分析方法形成过程 •验证需要考虑的因素 •验证基本假设（前提） •现有验证指南缺陷
•分析方法验证方案内容
•仪器的确认
概念 1 ：分析方法
ICH—Q2定义： 分析方法是指进行分析的方式，应详细描 述每一个分析试验所必需的步骤 它包括，但不局限于：样品，参照对照品， 试剂的配制，仪器的使用，标准曲线的绘 制，计算公式的运用等
2 . 3 . 2 . 4 一方法重复性实验
取同一批号均匀样品 按照分析方法规定至少称量出六份 按含量测定方法测定每一份样品含量 计算每一次测定的含量与平均含量之间的 相对标准偏差
2.4-中间精密度
概念 推荐中间精密度测定方法
2 . 4 . 1 一概念 5 ：中间精密度
ICH-Q2 定义 中间精密度指的是试验室内部条件改变， 如：不同日，不同分析者，不同仪器等情 况下的精密度
ICH 一 QZA Text on Validatlon of Analytical Procedure : ( 1994 ) ICH 一 QZB Validation on AnaIytical Procedures : Methodology： ( 1995 ) CDER Reviewer Guidance : Validation of ChromatographicMethod ( 1994 ) CDER Submitting Samples and Analytical Data for MethodValidations （1987 ) CDER Draft Analytical Procedures and Method Validation ( 2000 ) CDER Bioanalytical Method Validation for Human Studles ( 1999 ) USP < 1225 > Vaildation of Compendial Methods ( current revlsion ) 中国药典：药品质量标准分析方法验证
满足相应的测试要求 真实反映被测物相应的特性， 浓度，质量，纯度及效价情况
概念 4 ：法规分析方法
FDA 定义： 是用于评佑原料药或制剂某一个规定特性 的分析方法
概念5 :交叉验证
FDA定义： 在同一个研究或不同交叉研究中，用两种 或多种分析方法进行分析，对验证参数进 行比较
转移验证方法来源
3 . 3 —制剂准确度测定
用该方法去测按处方量制成的混合物（加 入已知量被测物） 在制剂中加入已知量主药或与另一成熟方 法比较 在精密度，线性和专属性建立后得出
2 . 4 . 2 —推荐中间精密度测定方法
应确定随机事件对分析方法精密度的影响， 如不同日期，不同分析人员，不同仪器等 等 没有必要一一考察 用均匀设计，或正交设计方法
2 . 5 一推荐重复性接受标准
系统重复性
S/N>1000,RSD<1% 1000> S/N>100,RSD<2% S/N<10,RSD<4% S/N<10,RSD<8%
检测限 定量限 耐用性
ICH,USP及WHOBaidu Nhomakorabea证要求
FDA要求验证项目
鉴别 杂质限度 杂志定量 含量及溶出度 特性
准确度
重复性
-
-
+
+
+
+
+
+
中间精密度
专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性
+ -
+ + -
+
+ + + + +
+
+ + + +
+
+ +
ICH要求验证项目
鉴别 准确度 重复性 中间精密度 专属性 检测限 定量限 线性 + 杂质限度 + + 杂志定量 + + + + + + 含量及溶出度 + + + + +
Validation of Analytical Procedure 分析方法验证
第一部分：基本要求
Validation of Analytical Procedure 分析方法验证
第二部分：实验设计与操作
1.0－讲座目的
• 掌握验证试验设计 • 掌握验证试验操作 • 了解确定接受标准原则
第一部分:基本要求
开发新方法或从相关实验室获得新方法 制定验证方案，验证规程或验证主计划 确定方法（验证）适用的目标，范围 确定实验参数及可接受的标准 确定验证实验过程 确认验证使用的仪器相关性能
新方法验证步骤（续1）
确认验证所需的人员，试剂及标准 运行预验证试验 如果需要调整方法或接受标准 运行完整的验证试验 建立该方法的SOP用于日常分析工作 确定需要重新验证方法的标准
2.3.2.1-概念3：系统重复性
相同条件下，同一分析人员对同一样品溶 液多次测试结果的接近程度
2 . 3 . 2 . 2 —系统重复性实验
取同一均匀标准样品溶液 连续重复测定六次 记录每次测定各组分响应 计算各响应值与平均值之间相对标准偏差
2.3.2.3-概念4：方法重复性
相同条件下，同一个分析人员对同一个均 匀样品，多次取样测定所得结果的接近程 度
需运行方法再验证的变更情况
改变药物合成工艺 改变制剂组成 改变分析过程
操作过程的更改 改变仪器，色谱柱等硬件 测试条件持续改变以适应系统适应性要求，且改变 程度超出药典规定的方法耐用性验证范围
方法再验证要求
证实相应的变更发生后，原使用的分析测 试过程：
能够继续保持其特有的性质（如专属性） 能够继续真正反映被测物的相应特性（检测限与定 量限）