精制抗蛇毒血清制造及检定规程

精制抗蛇毒血清制造及检定规程

本品系蛇毒或脱毒蛇毒免疫马的血浆，经胃酶消化后用硫酸铵盐析法制成的抗蛇毒球蛋白制剂，能中和相应蛇毒，用于治疗被相应毒蛇咬伤之患者。

1 制造

1.1 对血浆的要求

1.1.1 用于制造精制抗蛇毒血清的血浆应符合附录1《抗蛇毒血清生产用马匹免疫方法》的规定。

1.1.2对血浆效价的最低要求如下：

血浆种类每瓶血浆效价（U/ml）

蝮蛇150

五步蛇50

银环蛇200

眼镜蛇12

1.2 制造程序

按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.2项进行。

1.3 对制造工艺的要求及规定

按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.3项进行。

1.4 半成品检定

由制造部位进行理化检定、无菌试验、安全试验、热原质试验、类A血型物质测定及效力试验。热原质试验、类A血型物质测定及效力试验可与质量检定部门会同进行。检定方法及要求同成品检定。

2 成品检定

由质量检定部门进行全面检定，半成品已会同检定的项目可抽检。

2.1 鉴别试验

按《精制抗毒素制造及检定规程》2.1项进行。

2.2 理化检定

按《精制抗毒素制造及检定规程》中2.2项进行

2.3 无菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行。

2.4 安全试验

按《精制抗毒素制造及检定规程》2.4项进行。

2.5 热原质试验

按《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量为3ml/kg。判定标准按该规程4.1项要求进行。

2.6 类A血型物质测定

按《精制抗毒素制造及检定规程》2.6项进行。

2.7 效价测定

2.7.1 效价测定方法见附录2。

2.7.2对各种抗蛇毒血清成品的最低效价要求如下：

抗血清种类血清效价（U/ml）

蝮蛇500

五步蛇180

银环蛇800

眼镜蛇100

3 保存与效期

保存在2～8℃。自效价测定合格之日起，液体血清效期为3年，冻干血清效期为5年。

附录1 抗蛇毒血清生产用马匹免疫方

法

1 马匹

1.1 用于免疫采血之马匹必须符合《生物制品生产用马匹检疫及管理规程》的规定。

1.2 马匹开始免疫前可做破伤风预防注射。

1.3抗蛇毒血清生产用马匹，如解剖确诊为蛇毒中毒死亡者，应将尸体焚毁或深埋。

2 抗原与佐剂

2.1 免疫用蛇毒抗原选用蛇毒或脱毒蛇毒。

2.2 用作免疫之蛇毒毒素必须经除菌处理。

2.3 蛇毒应于2～8℃真空干燥保存。免疫抗原为配制稀释成一定浓度的蛇毒液。

2.4凡接触蛇毒之用具，用前用后都应煮沸消毒，手有创伤者，操作时应有保护措施。

2.5 免疫用佐剂应符合《精制抗毒素制造及检定规程》附录1中的有关要求。

3 免疫与采血

3.1 马匹免疫采血按《抗毒素生产马匹免疫方法》中的要求及规定进行。

3.2 基础免疫、超免疫

根据基础免疫情况，制定超免疫计划。免疫注射量应逐渐递增，可视注射反应而定。

3.3 采血

经试血效力试验合格之马匹可进行采血，其血清的效价不得低于下列要求。分离之血浆加适宜防腐剂（如0.5%苯酚）。

抗血清种类采血要求最低效价（U/ml）

抗蝮蛇毒180

抗五步蛇毒60

抗银环蛇毒300

抗眼镜蛇毒15

4 效价测定

效价测定方法见附录2。

附录2 抗蛇毒血清效价测定方法（小

白鼠试验法）

1 试剂

1.1 标准抗蛇毒血清

由中国药品生物制品检定所分发。标准抗蛇毒血清应保存于2～8℃。

1.2 蛇毒

由检定所分发。试验用的蛇毒须以检定所分发的标准抗蛇毒血清准确标定其试验量（蝮蛇、眼镜蛇及银环蛇1个L+，五步蛇2个L+）。使用干毒时，须以精确的分析天平称取，每次称取量不得少于5mg，溶解后应在3天内（保存于2～8℃）用完。干毒应封存于装有干燥剂的真空器皿中。亦可将干毒制成液体甘油蛇毒，即干毒溶解液与中性甘油（经116℃10分钟灭菌）等量混合，每ml至少含50

个试验量，保存于2～8℃暗处。

1.3 稀释液

硼酸盐缓冲盐水，灭菌后pH应为7.0～7.4。配方为：

氯化钠8.5g

硼酸 4.5g

硼砂0.5g

加蒸馏水至1000ml，过滤。

2 用具

吸管、容量瓶、注射器应经标化。吸管、试管、容量瓶应洁净干燥，其他用具应灭菌。

3 试验动物

体重18～20g健康小白鼠。

4 试验方法

4.1 稀释标准抗蛇毒血清

用稀释液稀释标准抗蛇毒血清使每ml含抗银环蛇、眼镜蛇或抗蝮蛇毒血清5U、或抗五步蛇毒血清10U，即与5个相应蛇毒试验量混合后每0.4ml注射量中含1U 或2U。

4.2 稀释蛇毒

用稀释液稀释蛇毒，使其5个试验量不超过0.8ml，在与抗蛇毒血清混合时补加稀释液至2ml，即每0.4ml注射量中含1个试验量。

4.3 稀释待检抗蛇毒血清

用稀释液将待检抭蛇毒清稀释成数个稀释度，使每ml抗蝮蛇、眼镜蛇或银环蛇毒血清约含5U或其上下：抗五步蛇毒血清约含10U或其上下。各稀释度间隔5%～10%。

4.4 混合

4.4.1 待检组

定量吸取不同稀释度之待检抗蛇毒血清各1ml，分别装入小试管中，每管加入5个试验量与待检抗蛇毒血清相应的稀释蛇毒液，补加稀释液至2ml，混合均匀，加塞，置37℃结合45分钟后立即注射小白鼠。

4.4.2 对照组

按下表定量吸取已稀释之待检抗蛇毒血清相应的标准抗蛇毒血清，分别装入小试管中：

对照①

对照②

标准抗眼镜蛇毒血清1ml 1.2ml

每管加入5个试验量之相应稀释蛇毒液，补加稀释液至2ml，混合均匀，加塞，置37℃结合45分钟后立即注射小白鼠。

4.5 注射

每个稀释度的待检抗蛇毒血清、对照①及对照②各注射小白习4只，每只腹腔注射0.4ml。应注意勿使注射液流出。

4.6 观察