精制抗蛇毒血清制造及检定规程

精制抗蛇毒血清制造及检定规程
本品系蛇毒或脱毒蛇毒免疫马的血浆，经胃酶消化后用硫酸铵盐析法制成的抗蛇毒球蛋白制剂，能中和相应蛇毒，用于治疗被相应毒蛇咬伤之患者。

1 制造
1.1 对血浆的要求
1.1.1 用于制造精制抗蛇毒血清的血浆应符合附录1《抗蛇毒血清生产用马匹免疫方法》的规定。

1.1.2对血浆效价的最低要求如下：
血浆种类每瓶血浆效价（U/ml）
蝮蛇150
五步蛇50
银环蛇200
眼镜蛇12
1.2 制造程序
按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.2项进行。

1.3 对制造工艺的要求及规定
按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.3项进行。

1.4 半成品检定
由制造部位进行理化检定、无菌试验、安全试验、热原质试验、类A血型物质测定及效力试验。

热原质试验、类A血型物质测定及效力试验可与质量检定部门会同进行。

检定方法及要求同成品检定。

2 成品检定
由质量检定部门进行全面检定，半成品已会同检定的项目可抽检。

2.1 鉴别试验
按《精制抗毒素制造及检定规程》2.1项进行。

2.2 理化检定
按《精制抗毒素制造及检定规程》中2.2项进行
2.3 无菌试验
按《生物制品无菌试验规程》进行。

2.4 安全试验
按《精制抗毒素制造及检定规程》2.4项进行。

2.5 热原质试验
按《生物制品热原质试验规程》进行。

注射剂量为3ml/kg。

判定标准按该规程4.1项要求进行。

2.6 类A血型物质测定
按《精制抗毒素制造及检定规程》2.6项进行。

2.7 效价测定
2.7.1 效价测定方法见附录2。

2.7.2对各种抗蛇毒血清成品的最低效价要求如下：
抗血清种类血清效价（U/ml）
蝮蛇500
五步蛇180
银环蛇800
眼镜蛇100
3 保存与效期
保存在2～8℃。

自效价测定合格之日起，液体血清效期为3年，冻干血清效期为5年。

附录1 抗蛇毒血清生产用马匹免疫方
法
1 马匹
1.1 用于免疫采血之马匹必须符合《生物制品生产用马匹检疫及管理规程》的规定。

1.2 马匹开始免疫前可做破伤风预防注射。

1.3抗蛇毒血清生产用马匹，如解剖确诊为蛇毒中毒死亡者，应将尸体焚毁或深埋。

2 抗原与佐剂
2.1 免疫用蛇毒抗原选用蛇毒或脱毒蛇毒。

2.2 用作免疫之蛇毒毒素必须经除菌处理。

2.3 蛇毒应于2～8℃真空干燥保存。

免疫抗原为配制稀释成一定浓度的蛇毒液。

2.4凡接触蛇毒之用具，用前用后都应煮沸消毒，手有创伤者，操作时应有保护措施。

2.5 免疫用佐剂应符合《精制抗毒素制造及检定规程》附录1中的有关要求。

3 免疫与采血
3.1 马匹免疫采血按《抗毒素生产马匹免疫方法》中的要求及规定进行。

3.2 基础免疫、超免疫
根据基础免疫情况，制定超免疫计划。

免疫注射量应逐渐递增，可视注射反应而定。

3.3 采血
经试血效力试验合格之马匹可进行采血，其血清的效价不得低于下列要求。

分离之血浆加适宜防腐剂（如0.5%苯酚）。

抗血清种类采血要求最低效价（U/ml）
抗蝮蛇毒180
抗五步蛇毒60
抗银环蛇毒300
抗眼镜蛇毒15
4 效价测定
效价测定方法见附录2。

附录2 抗蛇毒血清效价测定方法（小
白鼠试验法）
1 试剂
1.1 标准抗蛇毒血清
由中国药品生物制品检定所分发。

标准抗蛇毒血清应保存于2～8℃。

1.2 蛇毒
由检定所分发。

试验用的蛇毒须以检定所分发的标准抗蛇毒血清准确标定其试验量（蝮蛇、眼镜蛇及银环蛇1个L+，五步蛇2个L+）。

使用干毒时，须以精确的分析天平称取，每次称取量不得少于5mg，溶解后应在3天内（保存于2～8℃）用完。

干毒应封存于装有干燥剂的真空器皿中。

亦可将干毒制成液体甘油蛇毒，即干毒溶解液与中性甘油（经116℃10分钟灭菌）等量混合，每ml至少含50
个试验量，保存于2～8℃暗处。

1.3 稀释液
硼酸盐缓冲盐水，灭菌后pH应为7.0～7.4。

配方为：
氯化钠8.5g
硼酸 4.5g
硼砂0.5g
加蒸馏水至1000ml，过滤。

2 用具
吸管、容量瓶、注射器应经标化。

吸管、试管、容量瓶应洁净干燥，其他用具应灭菌。

3 试验动物
体重18～20g健康小白鼠。

4 试验方法
4.1 稀释标准抗蛇毒血清
用稀释液稀释标准抗蛇毒血清使每ml含抗银环蛇、眼镜蛇或抗蝮蛇毒血清5U、或抗五步蛇毒血清10U，即与5个相应蛇毒试验量混合后每0.4ml注射量中含1U 或2U。

4.2 稀释蛇毒
用稀释液稀释蛇毒，使其5个试验量不超过0.8ml，在与抗蛇毒血清混合时补加稀释液至2ml，即每0.4ml注射量中含1个试验量。

4.3 稀释待检抗蛇毒血清
用稀释液将待检抭蛇毒清稀释成数个稀释度，使每ml抗蝮蛇、眼镜蛇或银环蛇毒血清约含5U或其上下：抗五步蛇毒血清约含10U或其上下。

各稀释度间隔5%～10%。

4.4 混合
4.4.1 待检组
定量吸取不同稀释度之待检抗蛇毒血清各1ml，分别装入小试管中，每管加入5个试验量与待检抗蛇毒血清相应的稀释蛇毒液，补加稀释液至2ml，混合均匀，加塞，置37℃结合45分钟后立即注射小白鼠。

4.4.2 对照组
按下表定量吸取已稀释之待检抗蛇毒血清相应的标准抗蛇毒血清，分别装入小试管中：
对照①
对照②
标准抗眼镜蛇毒血清1ml 1.2ml
每管加入5个试验量之相应稀释蛇毒液，补加稀释液至2ml，混合均匀，加塞，置37℃结合45分钟后立即注射小白鼠。

4.5 注射
每个稀释度的待检抗蛇毒血清、对照①及对照②各注射小白习4只，每只腹腔注射0.4ml。

应注意勿使注射液流出。

4.6 观察
试验小白鼠每日观察1次，并记录发病及死亡情况，抗银环蛇毒血清及抗五步蛇毒血清之试验小白鼠观察48小时，抗腹蛇毒血清及抗眼镜蛇毒血清之试验小白
鼠观察72小时。

4.7 结果判定
对照①小白鼠死亡50%以上，对照②小白鼠应比对照①死亡晚或不死亡。

待检抗蛇毒血清之效价应以与对照①小白鼠同时死亡之最高稀释度判定。

精制抗蛇毒血清使用说明书
本品系用蛇毒免疫马匹后由马血浆精制而成，供治疗蛇咬伤者之用，其中蝮蛇抗血清对竹叶青和烙铁头咬伤亦有疗效。

咬伤后，应迅速注射本品，愈早愈好。

本品为无色或淡黄色的澄明液体，含防腐剂，久置可析出少量能摇散的沉淀。

用法
1.注射途径：通常采用静脉注射，也可做肌内或皮下注射。

2.剂量：一般蝮蛇咬伤注射抗蝮蛇毒血清6000U；五步蛇咬伤注射抗五步蛇毒血清8000U；银环蛇或眼镜蛇咬伤注射抗银环蛇毒血清10000U或抗眼镜蛇毒血清2000U。

以上剂量约可中和一条相应蛇的排毒量。

视病情可酌量增减。

3.儿童用量应与成人相等，不应减少。

4.注射前必须先做过敏试验，阴性者才可全量注射。

过敏试验方法
取0.1ml抗血清加1.9ml氯化钠注射液，好20倍稀释。

在前臂掌侧皮内注射0.1ml，经20～30分钟，注射部位皮丘在2cm以内，且皮丘周围无红晕及蜘蛛足者为阴性，可直接注射。

若阳性可疑者，预先注射扑尔敏10mg（儿童剂量根据体重酌减），15分钟后再注射本品。

若阳性者应采用脱敏注射法。

脱敏注射法
用氯化钠注射液将抗血清稀释20倍。

分数次做皮下注射，每次观察10～20分钟，第1次注射0.4ml。

如无反应，可酌情增量注射。

注射观察3次以上，无异常反应者，即可做静脉、肌内或皮下注射。

注射前将制品在37℃水浴加温数分钟。

注射时速度应慢，开始每分钟不超过1ml，以后亦不宜超过4ml。

注射时，如有异常反应，应立即停止注射。

注意事项
1.遇有血清过敏反应，即肌内注射扑尔敏。

必要时，应用地塞米松5mg加入25%（或50%）葡萄糖注射液20ml中静脉注射或氢化可的松琥珀酸钠135mg或氢化可的松100mg加入25%（或50%）葡萄糖注射液40ml中静脉注射，亦可静脉滴注。

2.对咬伤者不论是否毒蛇咬伤，遇有伤口污染较明显者，应同时注射破伤风抗毒素1500～3000U。

保存
保存于2～8℃暗处。