月季植物组织培养

月季植物组织培养

月季介绍

月季为常绿有刺灌木，或呈蔓状与攀援状。常绿或落叶灌木，直立，茎为棕色有一点绿，具有钩刺或无刺，但也有几乎无刺的。小枝绿色，叶为墨绿色，多数羽状复叶，宽卵形或卵状长圆形，长 2.5-6厘米，先端渐尖，具尖齿，叶缘有锯齿，两面无毛，光滑；托叶与叶柄合生，全缘或具腺齿，顶端分离为耳状。花朵常簇生，稀单生，花色甚多，色泽各异，径4-5厘米，多为重瓣也有单瓣者；萼片尾状长尖，边缘有羽状裂片；花柱分离，伸出萼筒口外，与雄蕊等长；每子房1胚珠。果卵球形或梨形，长1-2厘米，萼片脱落。花期4--10月。大多数是完全花，或者是两性花。有花中皇后的美称。现为天津市的市花，还是中国十大名花.

实验原理

植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植

物。

实验材料及用具

实验材料：月季

实验试剂：MS母液70％酒精氯化汞0.1 mol/L NaOH与0.1 mol/L HCl IAA 2,4-D

实验器具：广口瓶棕色瓶锥形瓶剪刀镊子酒精灯紫外灯

实验步骤：

培养基的配制

1 称取6.5g～12g琼脂，先用蒸馏水置1000ml搪瓷杯浸泡2小时后充分洗去杂质。弃去浸液用无离子水再洗1～2次，并加入500ml无离子水在电炉上溶化。边搅拌边溶化，直至完全溶化备用。

2 另取蔗糖30g于上述溶液中搅拌完全溶解备用。

3 另按MS培养基用量量取无机大量微量元素及有机成分的母液于一烧杯中，并完全倒入②液中搅拌溶解混匀备用。

4 按目的要求用取样器加入各种激素并搅拌混匀，加稀碱或稀释酸调pH值应比目的要求的pH值稍高0.1～0.2。定溶1000ml。

趁热大于60℃分装于培养瓶中，应边搅拌边分装液体，根据要求的量分装。一般液体的厚度掌握在1cm左右为宜。分装时不得将液体粘落至瓶口上。

将培养瓶封口塞棉塞、包牛皮纸系线绳。

另取Ф5cm的滤纸若干，置Ф9cm的培养皿中并用牛皮纸包好准备灭菌。

另取无离子水若干不得超过瓶内总体积的70%，加棉塞包牛皮纸，灭菌制备无菌水。另取清毒瓶包好备用。

灭菌

1检查有无漏电漏水现象，加无离子水的3升，将要灭菌的物品平稳地放置高压锅套桶内。

2盖上锅盖水平拧好螺栓，打开放气阀，接通电源加热，待放气阀处水汽充分溢出时盖上放气阀，待压力升至0.05Mpa时打开放气阀放气至压力回到零位时盖上放气阀升压。

3待压力达0.12～0.15Mpa时，开始计时，使调压器自220V回调170～180V左右维持30分钟断电。

4待压力回降至零位时，打开锅盖错开一缝隙使热蒸汽迅速溢出烘干包纸和瓶塞。

5趁热取出被灭菌之物，将培养瓶置平稳处使培养瓶中的培养基凝固。23小时后查有无细菌，48小时后查有无霉菌，如有杂菌应及时处理，无杂菌备用。

接种

取材：1.将采集的月季茎段冲洗干净，分装到烧杯中，放入超净工作台；先用70%酒精浸没并轻摇15s进行欲消毒；倒出酒精，加入0.1%二氯化汞浸没；倒净二氯化汞。用无菌水冲洗3次，将废液倒弃备用。

2.解下培养瓶上包头纸的线绳，并将培养瓶整齐地排列在接种台的左侧，然后用70%的酒精棉球从内向外擦接种台面。

3 .在酒精灯下用用镊子在消毒瓶内取出材料置于培养皿内的无菌滤纸上吸干水分，右手持镊子左手拿灭过菌的解剖刀迅速地将茎段切成剪成每段2～3cm至少有1个侧芽，用镊子将外植体迅速地在酒精上接入培养瓶内。

头纸，系好线绳，移出净化台或接种箱，写好标签，外植体的名称、种类、接种日期、接种人等，移入培养室进行培养。

实验结果

讨论

1 培养材料采集

要根据培养目的适当选取材料，选择原则：易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒

从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上。

2 灭菌方法

1物理方法：

物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等

2 化学方法：

消毒剂、抗菌素灭菌

3 培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法

压力在9.8×104—10.8×104Pa，温度在121℃，灭菌20—30min