血细胞分析仪与临床应用资料PPT课件
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24
库尔特CBC分析技术
计数和体积分析的技术
脉冲编辑 重叠校正 三次计数/延长计数 高频度分析
血小板分析的技术
扫流技术 拟合曲线 三次计数/延长计数
免日常保养的技术
燃烧电路 酶清洁剂 自我清洁的分血片 其他技术
25
白细胞分类原理
三分类原理:库尔特直方图分类 五分类原理:VCS三维分析原理
26
从三分类到五分类
库尔特原理
红细胞
红细胞通过小孔
检测区域
Os示cill波os镜cope
9
库尔特原理
白细胞
白细胞通过小孔
检测区域
示波镜
10
库尔特技术
11
高频度分析-直方图
通道划分 RBC直方图:36-360fL PLT直方图:2-20fL WBC直方图:35-450fL
直方图 -X轴:体积(fL) -Y轴:相对数量
早期单克隆抗体研究 者 直至1998年,曾获 6 项美国科学荣誉, 及多项发明专利
4
主要服务对象
生物研究
诊断医疗
大学 研究所
生物技术 生化制药
医院 私人实验室 医疗所 临床实验室
5
血细胞分析仪的发展史 从库尔特公司的发展史开始…
1947年,华莱士.库 尔特先生发明库尔特 原理;
“当一个不良导 体颗粒,例如血细胞, 通过两个电极之间时, 导致电路的电阻抗发 生变化。”
12
脉冲编辑(专利技术)
作用:删除不规则脉冲对体积测量的影响。
13
重叠校正(专利技术)
作用:纠正因重叠而导致的对颗粒计数和体积测量的影响。
小孔近观
14
三次计数/延长计数
血小板计数以三次拟合的均值为依据; 对血小板浓度小于67X109/L的标本,仪器自动延长1-2个三次计数。 三次计数:统计补偿;监控计数过程的稳定性。 延长计数:针对低浓度的标本。
血细胞自动分析与临床
Automated analysis of blood cells and clinic 王佳
1
传统的血细胞检查完全采用手工方法,不 仅操作繁琐费时,而且由于多种原因,计数 结果的准确性和精密度难以保证.20世纪 50年代末,库尔特采用电阻率变化与电子 技术相结合的方法,发明了性能比较稳定 的电阻抗法血细胞计数仪,开创了血细胞 分析的新纪元.
-华莱士.库尔特,
1947
6
1953年库尔特家族研制出全世界 第一台血细胞计数仪:Model A;
现在,95%的血细胞分析仪采用 库尔特原理;
7
库尔特原理三要素:小孔、负压、电极 检测:细胞大小和数量
小孔电流 外电极 样品杯
小孔
wk.baidu.com
负压
内电极
血细胞 悬液
小孔管
•在等渗电解质溶液(稀释 液)中,有一个用于细胞计 数的小孔管,其内侧充满了 稀释液,并有一个内电极, 其外侧细胞悬液中有个外电 极,小孔两侧的电极之间有 稳定的电流。细胞为相对不 良导体,其导电性质比稀释 液低,当有个细胞通过小孔, 小孔近观 于瞬间引起了电压变化而出 现脉冲信号,脉冲的数量与 细胞的数量成正比,高度与 细胞体积成正比。脉冲信号 经放大,阈值调节,甄别, 整形后,送入计数系统进行 处理,得出被测细胞的数量 和体积分布直方图8 。
21
燃烧电路(专利技术)
作用:预防蛋白堆积于计数孔; 取消小孔的日常保养程序。
22
酶清洁剂(专利配方)
操作:每24小时浸泡0.5小时。 作用:令仪器的流式通道、计数池、分血片、
和血红蛋白检测室保持洁净性。
图示:计数孔在用CLENZ清洁 剂浸泡前后的洁净度比较。
23
自我清洁的分血片
库尔特另一个免日常保养的关键 部件是专利的、是具自我清洁功 能的分血片。
15
扫流技术(专利技术)
红细胞回流
+
-
红细胞
血小板
测试区域
示波镜
16
扫流技术(专利技术)
+
-
红细胞被扫 流液冲走
RBC
PLT
测试区域
扫流液
示波镜
17
扫流技术(专利技术)
作用:防止红细胞回流对血小板计数的干扰; 防止细胞再度进入感应区被两次计数。
18
拟合曲线(专利技术)
在血小板的直方图上可见两条曲线: 一条是 2fl-20fl 的原始数据曲线; 另一条是 0fl-70fl 的拟合曲线.
28
在正常白细胞直方图上,小细胞群是位于左侧又高又陡 的峰,分布在35-90fl,以成熟淋巴细胞为主要特征细胞,大 细胞群是位于右侧较低且分布宽的峰,跨越160-450fl,以 中性粒细胞为主要特征细胞,位于大、小细胞群之间的 较平坦的区域,分布在90-160fl,是单个核细胞,也称 为中间细胞,以单核细胞为主要特征细胞。
淋巴细胞
单核细胞
粒细胞
29
仪器根据各细胞群占总体的比例计算出 相应的百分比,从而得到白细胞三分类 结果,如果再与该标本的白细胞总数相 乘,即得到各类细胞的绝对值。电阻抗 法的白细胞分类只是根据加溶血剂后白 细胞体积的大小获得,由于多种因素可 影响白细胞分类的真实性,因此,准确 的白细胞分类还不能完全脱离手工显微 镜检查。
2
公司创办人
贝克曼仪器公司 始创于1935 年 Dr. Arnold O. Beckman
库尔特电子公司 始创于1958 年 Wallace H. & Joseph R. Coulte3r
库尔特先生 (1913 - 1998)
“Science Serving Humanity”
(科学服务人类) 库尔特原理发明者,
三分类:
淋巴细胞 单核细胞 粒细胞
中性粒细胞 嗜酸细胞 嗜碱细胞
五分类:
淋巴细胞 单核细胞 中性粒细胞 嗜酸细胞 嗜碱细胞
27
在进行白细胞分析时,,由于白细胞计数池 中除加入一定量的稀释液外还加入了溶 血剂,此溶血剂一方面使红细胞溶解,另一 方面使白细胞质经胞膜渗出,胞膜紧裹在 细胞核或存在的颗粒周围,使白细胞成为” 膜包核”.仪器将体积在35-450fl的这种颗 粒认定为白细胞,并根据其体积大小在直 方图上从左至右初步确认其相应的三个 细胞群.
由最小平方回归法定义出一条对数正态曲线, 即拟合曲线;
19
拟合曲线
血小板计数的干扰主要来自: 2 fl以下:噪音;细菌的干扰 20 fl以上:裂红细胞;小红细胞;白细胞的 干扰
20
拟合曲线的作用
对曲线下的面积进行积 分计算; 将该面积值校准到参考 的PLT计数; 获得与参考方法最具相 关性的血小板数值. 在0-70 fL范围的非血小 板脉冲被拟合曲线排除 于血小板计数之外; 大大增加了血小板的线 性范围(0-1,500,000)
库尔特CBC分析技术
计数和体积分析的技术
脉冲编辑 重叠校正 三次计数/延长计数 高频度分析
血小板分析的技术
扫流技术 拟合曲线 三次计数/延长计数
免日常保养的技术
燃烧电路 酶清洁剂 自我清洁的分血片 其他技术
25
白细胞分类原理
三分类原理:库尔特直方图分类 五分类原理:VCS三维分析原理
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从三分类到五分类
库尔特原理
红细胞
红细胞通过小孔
检测区域
Os示cill波os镜cope
9
库尔特原理
白细胞
白细胞通过小孔
检测区域
示波镜
10
库尔特技术
11
高频度分析-直方图
通道划分 RBC直方图:36-360fL PLT直方图:2-20fL WBC直方图:35-450fL
直方图 -X轴:体积(fL) -Y轴:相对数量
早期单克隆抗体研究 者 直至1998年,曾获 6 项美国科学荣誉, 及多项发明专利
4
主要服务对象
生物研究
诊断医疗
大学 研究所
生物技术 生化制药
医院 私人实验室 医疗所 临床实验室
5
血细胞分析仪的发展史 从库尔特公司的发展史开始…
1947年,华莱士.库 尔特先生发明库尔特 原理;
“当一个不良导 体颗粒,例如血细胞, 通过两个电极之间时, 导致电路的电阻抗发 生变化。”
12
脉冲编辑(专利技术)
作用:删除不规则脉冲对体积测量的影响。
13
重叠校正(专利技术)
作用:纠正因重叠而导致的对颗粒计数和体积测量的影响。
小孔近观
14
三次计数/延长计数
血小板计数以三次拟合的均值为依据; 对血小板浓度小于67X109/L的标本,仪器自动延长1-2个三次计数。 三次计数:统计补偿;监控计数过程的稳定性。 延长计数:针对低浓度的标本。
血细胞自动分析与临床
Automated analysis of blood cells and clinic 王佳
1
传统的血细胞检查完全采用手工方法,不 仅操作繁琐费时,而且由于多种原因,计数 结果的准确性和精密度难以保证.20世纪 50年代末,库尔特采用电阻率变化与电子 技术相结合的方法,发明了性能比较稳定 的电阻抗法血细胞计数仪,开创了血细胞 分析的新纪元.
-华莱士.库尔特,
1947
6
1953年库尔特家族研制出全世界 第一台血细胞计数仪:Model A;
现在,95%的血细胞分析仪采用 库尔特原理;
7
库尔特原理三要素:小孔、负压、电极 检测:细胞大小和数量
小孔电流 外电极 样品杯
小孔
wk.baidu.com
负压
内电极
血细胞 悬液
小孔管
•在等渗电解质溶液(稀释 液)中,有一个用于细胞计 数的小孔管,其内侧充满了 稀释液,并有一个内电极, 其外侧细胞悬液中有个外电 极,小孔两侧的电极之间有 稳定的电流。细胞为相对不 良导体,其导电性质比稀释 液低,当有个细胞通过小孔, 小孔近观 于瞬间引起了电压变化而出 现脉冲信号,脉冲的数量与 细胞的数量成正比,高度与 细胞体积成正比。脉冲信号 经放大,阈值调节,甄别, 整形后,送入计数系统进行 处理,得出被测细胞的数量 和体积分布直方图8 。
21
燃烧电路(专利技术)
作用:预防蛋白堆积于计数孔; 取消小孔的日常保养程序。
22
酶清洁剂(专利配方)
操作:每24小时浸泡0.5小时。 作用:令仪器的流式通道、计数池、分血片、
和血红蛋白检测室保持洁净性。
图示:计数孔在用CLENZ清洁 剂浸泡前后的洁净度比较。
23
自我清洁的分血片
库尔特另一个免日常保养的关键 部件是专利的、是具自我清洁功 能的分血片。
15
扫流技术(专利技术)
红细胞回流
+
-
红细胞
血小板
测试区域
示波镜
16
扫流技术(专利技术)
+
-
红细胞被扫 流液冲走
RBC
PLT
测试区域
扫流液
示波镜
17
扫流技术(专利技术)
作用:防止红细胞回流对血小板计数的干扰; 防止细胞再度进入感应区被两次计数。
18
拟合曲线(专利技术)
在血小板的直方图上可见两条曲线: 一条是 2fl-20fl 的原始数据曲线; 另一条是 0fl-70fl 的拟合曲线.
28
在正常白细胞直方图上,小细胞群是位于左侧又高又陡 的峰,分布在35-90fl,以成熟淋巴细胞为主要特征细胞,大 细胞群是位于右侧较低且分布宽的峰,跨越160-450fl,以 中性粒细胞为主要特征细胞,位于大、小细胞群之间的 较平坦的区域,分布在90-160fl,是单个核细胞,也称 为中间细胞,以单核细胞为主要特征细胞。
淋巴细胞
单核细胞
粒细胞
29
仪器根据各细胞群占总体的比例计算出 相应的百分比,从而得到白细胞三分类 结果,如果再与该标本的白细胞总数相 乘,即得到各类细胞的绝对值。电阻抗 法的白细胞分类只是根据加溶血剂后白 细胞体积的大小获得,由于多种因素可 影响白细胞分类的真实性,因此,准确 的白细胞分类还不能完全脱离手工显微 镜检查。
2
公司创办人
贝克曼仪器公司 始创于1935 年 Dr. Arnold O. Beckman
库尔特电子公司 始创于1958 年 Wallace H. & Joseph R. Coulte3r
库尔特先生 (1913 - 1998)
“Science Serving Humanity”
(科学服务人类) 库尔特原理发明者,
三分类:
淋巴细胞 单核细胞 粒细胞
中性粒细胞 嗜酸细胞 嗜碱细胞
五分类:
淋巴细胞 单核细胞 中性粒细胞 嗜酸细胞 嗜碱细胞
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在进行白细胞分析时,,由于白细胞计数池 中除加入一定量的稀释液外还加入了溶 血剂,此溶血剂一方面使红细胞溶解,另一 方面使白细胞质经胞膜渗出,胞膜紧裹在 细胞核或存在的颗粒周围,使白细胞成为” 膜包核”.仪器将体积在35-450fl的这种颗 粒认定为白细胞,并根据其体积大小在直 方图上从左至右初步确认其相应的三个 细胞群.
由最小平方回归法定义出一条对数正态曲线, 即拟合曲线;
19
拟合曲线
血小板计数的干扰主要来自: 2 fl以下:噪音;细菌的干扰 20 fl以上:裂红细胞;小红细胞;白细胞的 干扰
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拟合曲线的作用
对曲线下的面积进行积 分计算; 将该面积值校准到参考 的PLT计数; 获得与参考方法最具相 关性的血小板数值. 在0-70 fL范围的非血小 板脉冲被拟合曲线排除 于血小板计数之外; 大大增加了血小板的线 性范围(0-1,500,000)