药品分析方法建立及验证培训教材
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
药品分析方法建立及验证 培训教材
目录
•方法开发考虑 •方法哪里来 •开发什么方法 •检测方法初识 •分析方法验证 •分析方法确认及再验证
方法考虑原则
预期的监督机构期望 产品质量参数对安全性和有效性的预期影响 分子的具体开发经验 来自之前以开发的类似分子的平台经验
方法开发考虑
折叠结构可以防止生物制品降解，但同时使分子的 某些部分难以被检测到
偶联密度
ADC （抗体药物偶联物） 抗原与载体蛋白偶联物（疫苗类药物）
结合力 抗原与佐剂相互作用
开发什么方法
适用于特定分子的方法 活性测定
Elisa（体外评价） 动物实验 （体内评价） 中和实验 （细胞测定特定表位）
降解物测定
HPLC/MS（基于标准样校正或自身对照） 凝胶电泳 （基于特异分子带） SEC/荧光光谱 （解聚或聚合）
开发什么方法
适用于所有分子的方法 蛋白浓度或含量
紫外/可见光光度法（基于消光系数，灵敏度低，干 扰物多）
高效液相色谱法（基于标准样校正） BCA/TCA/G250（基于标准样校正，基质有可能干
扰)
电荷概括
离子交换色谱（原始状态） 毛细管等电聚焦Baidu Nhomakorabea（原始状态和局部变性状态）
生物制品需要多项检测来检量其多种特性，如电荷、 分子大小等
如果一个分子包含多种修饰，则它将被多次计算， 但是降解的分子仍然只有一个
所以不同检测所得到的值是不能累加的
方法开发考虑
很多时候，峰并不能达到基线分离 可容许实验误差较大 定量限较高
对于所要分析的蛋白质物种，通常无法获得纯的样品 用来进行加样/回收的物质是所要分析的蛋白质物种
（杂质）的富集物，而不是纯化物
方法开发考虑
基质（配方组成）或酸碱度变化、自由巯基的出现等， 可能在分析过程中形成原来并不存在的杂质
通过溶液交换消除基质影响
减少暴露于过高或过低酸碱度溶液的时间
在某些特定方法中，自由巯基会导致分析方法造成的杂 质
这些都是要设法避免
方法开发考虑
1. 生物学活性：是反映生物技术药物质量的重要指标，通常使 用细胞或动物进行测定，误差相对较大。不同批细胞、血清、 或其它易变性物质对测定方法的准确度和精密性均有影响。
检测方法初识——ESI-MS
分析方法验证——法规要求
资料6.质量研究资料，临床前有效性及安全性研究资料 （1）质量研究及注册标准研究资料； （2）检定方法的研究以及验证资料； （3）与同类制品比较研究资料； （4）产品抗原性、免疫原性和动物试验保护性的分析资料； （5）动物过敏试验研究资料； （6）动物安全性评价资料。
方法哪里来
标来准自方参法考（文或献正的式方方法法、法定方法） 一是指般在是指专已业有杂国志家或标著准作的上质发控表方并法介，绍W的H方O法，推一荐般的要质认控方真法对待也此可
作类为方重法要，参并考需进。行此全类面方的法验在证被确。定应为说标明准参方考法文前献已的经出过处了，适附当原的文 验及译证文。。申报者应说明方法的来源，并附具体方法。研制单位在首 自己次建采立用的此方类法方法前，也应对该方法进行适当的验证，如进行专属 性对和于精某些密产度品的验，尤证其，是以创便新证性明产在品实来际讲的，使由用于条缺件少下可该参方考法的也方是法适， 用通的常。需要自己建立一种新的分析方法，对于这类方法需进行全面 标准而方严法格的的替验代证方。法 此类方法系指由申报者提出的可取代标准方法的替代方法。申报 者在决定采用此类方法时应持慎重的态度，并需提供表明新方法 等同于或优于原方法的依据以及全面的验证资料，包括两种方法 的比较性资料。
开发什么方法
适用于所有分子的方法 分子大小概况
SEC（原始状态） 凝胶电泳法（非折叠（变性）状态）
病毒样颗粒概况
电镜（局部原始状态，人为影响因素大） DLS（原始状态，分辨率差，大小精准） SEC（原始状态，流动相会影响蛋白状态）
开发什么方法
适用于所有分子的方法 杂质残留量
被结构所保护的易受影响基团延缓了降解过程（氧 化、脱酰胺基、切断和聚合）
完整结构使得分析方法很难检测到内部的变化
在某些分析中保持三维结构是很重要的（如SEC）， 但在其他一些分析中则需拆开折叠结构（如变性凝 胶电泳）
方法开发考虑
如何解释不是针对完整分子而是针对裂解部分所进行的 检测而获得的数据
开发什么方法
检测方法初识——电泳及毛细管电泳
检测方法初识——SEC
检测方法初识——DAD光谱
检测方法初识——荧光光谱
检测方法初识——HPLC肽图
检测方法初识——UV Cp-Temp
检测方法初识——HPLC肽图
睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)
2. 生物技术药物多为生物大分子药物，具有分子量大、结构多 样性和可变性等特点，结构的细微变化可影响药物的活性和质 量。
3. 对酸、碱、高温、冻融等不稳定，保存、运输条件不当会影 响药品质量，并可能导致方法转移困难或失败。
4. 标准物质：活性标准品、含量标准品、理化对照品，根据情 况可能分别制备，保存、运输条件相对较高，需对其稳定性进 行认真分析与评价。
有时有必要将一个蛋白分子裂解为所需的片段，然后对 所关注的片段进行分析，如用于蛋氨酸氧化测定肽图
多数时候片段并非以简单直接或线性的方式与完整分子 相关联（不再是1：1）
需要明确地确定完整分子的片段进行分析而得到的某些 参数的报告值
方法开发考虑
从不同正交试验或从主要和辅助试验所得的杂质量 并不是可以累加的
HPLC（基于标准样校正或自身对照） GC（对残留溶剂） ICP/AAS （对元素测定） Elisa （宿主蛋白、杂蛋白测定） Southern Blot/荧光光谱 （残留DNA）
开发什么方法
适用于特定分子的方法 分子鉴定
肽图 （纯度较高） Western Blot （使用范围广） 紫外扫描图 （纯度及基质要求高） 氨基酸测序 (纯度及基质要求高，样品末端无封闭）
目录
•方法开发考虑 •方法哪里来 •开发什么方法 •检测方法初识 •分析方法验证 •分析方法确认及再验证
方法考虑原则
预期的监督机构期望 产品质量参数对安全性和有效性的预期影响 分子的具体开发经验 来自之前以开发的类似分子的平台经验
方法开发考虑
折叠结构可以防止生物制品降解，但同时使分子的 某些部分难以被检测到
偶联密度
ADC （抗体药物偶联物） 抗原与载体蛋白偶联物（疫苗类药物）
结合力 抗原与佐剂相互作用
开发什么方法
适用于特定分子的方法 活性测定
Elisa（体外评价） 动物实验 （体内评价） 中和实验 （细胞测定特定表位）
降解物测定
HPLC/MS（基于标准样校正或自身对照） 凝胶电泳 （基于特异分子带） SEC/荧光光谱 （解聚或聚合）
开发什么方法
适用于所有分子的方法 蛋白浓度或含量
紫外/可见光光度法（基于消光系数，灵敏度低，干 扰物多）
高效液相色谱法（基于标准样校正） BCA/TCA/G250（基于标准样校正，基质有可能干
扰)
电荷概括
离子交换色谱（原始状态） 毛细管等电聚焦Baidu Nhomakorabea（原始状态和局部变性状态）
生物制品需要多项检测来检量其多种特性，如电荷、 分子大小等
如果一个分子包含多种修饰，则它将被多次计算， 但是降解的分子仍然只有一个
所以不同检测所得到的值是不能累加的
方法开发考虑
很多时候，峰并不能达到基线分离 可容许实验误差较大 定量限较高
对于所要分析的蛋白质物种，通常无法获得纯的样品 用来进行加样/回收的物质是所要分析的蛋白质物种
（杂质）的富集物，而不是纯化物
方法开发考虑
基质（配方组成）或酸碱度变化、自由巯基的出现等， 可能在分析过程中形成原来并不存在的杂质
通过溶液交换消除基质影响
减少暴露于过高或过低酸碱度溶液的时间
在某些特定方法中，自由巯基会导致分析方法造成的杂 质
这些都是要设法避免
方法开发考虑
1. 生物学活性：是反映生物技术药物质量的重要指标，通常使 用细胞或动物进行测定，误差相对较大。不同批细胞、血清、 或其它易变性物质对测定方法的准确度和精密性均有影响。
检测方法初识——ESI-MS
分析方法验证——法规要求
资料6.质量研究资料，临床前有效性及安全性研究资料 （1）质量研究及注册标准研究资料； （2）检定方法的研究以及验证资料； （3）与同类制品比较研究资料； （4）产品抗原性、免疫原性和动物试验保护性的分析资料； （5）动物过敏试验研究资料； （6）动物安全性评价资料。
方法哪里来
标来准自方参法考（文或献正的式方方法法、法定方法） 一是指般在是指专已业有杂国志家或标著准作的上质发控表方并法介，绍W的H方O法，推一荐般的要质认控方真法对待也此可
作类为方重法要，参并考需进。行此全类面方的法验在证被确。定应为说标明准参方考法文前献已的经出过处了，适附当原的文 验及译证文。。申报者应说明方法的来源，并附具体方法。研制单位在首 自己次建采立用的此方类法方法前，也应对该方法进行适当的验证，如进行专属 性对和于精某些密产度品的验，尤证其，是以创便新证性明产在品实来际讲的，使由用于条缺件少下可该参方考法的也方是法适， 用通的常。需要自己建立一种新的分析方法，对于这类方法需进行全面 标准而方严法格的的替验代证方。法 此类方法系指由申报者提出的可取代标准方法的替代方法。申报 者在决定采用此类方法时应持慎重的态度，并需提供表明新方法 等同于或优于原方法的依据以及全面的验证资料，包括两种方法 的比较性资料。
开发什么方法
适用于所有分子的方法 分子大小概况
SEC（原始状态） 凝胶电泳法（非折叠（变性）状态）
病毒样颗粒概况
电镜（局部原始状态，人为影响因素大） DLS（原始状态，分辨率差，大小精准） SEC（原始状态，流动相会影响蛋白状态）
开发什么方法
适用于所有分子的方法 杂质残留量
被结构所保护的易受影响基团延缓了降解过程（氧 化、脱酰胺基、切断和聚合）
完整结构使得分析方法很难检测到内部的变化
在某些分析中保持三维结构是很重要的（如SEC）， 但在其他一些分析中则需拆开折叠结构（如变性凝 胶电泳）
方法开发考虑
如何解释不是针对完整分子而是针对裂解部分所进行的 检测而获得的数据
开发什么方法
检测方法初识——电泳及毛细管电泳
检测方法初识——SEC
检测方法初识——DAD光谱
检测方法初识——荧光光谱
检测方法初识——HPLC肽图
检测方法初识——UV Cp-Temp
检测方法初识——HPLC肽图
睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)
2. 生物技术药物多为生物大分子药物，具有分子量大、结构多 样性和可变性等特点，结构的细微变化可影响药物的活性和质 量。
3. 对酸、碱、高温、冻融等不稳定，保存、运输条件不当会影 响药品质量，并可能导致方法转移困难或失败。
4. 标准物质：活性标准品、含量标准品、理化对照品，根据情 况可能分别制备，保存、运输条件相对较高，需对其稳定性进 行认真分析与评价。
有时有必要将一个蛋白分子裂解为所需的片段，然后对 所关注的片段进行分析，如用于蛋氨酸氧化测定肽图
多数时候片段并非以简单直接或线性的方式与完整分子 相关联（不再是1：1）
需要明确地确定完整分子的片段进行分析而得到的某些 参数的报告值
方法开发考虑
从不同正交试验或从主要和辅助试验所得的杂质量 并不是可以累加的
HPLC（基于标准样校正或自身对照） GC（对残留溶剂） ICP/AAS （对元素测定） Elisa （宿主蛋白、杂蛋白测定） Southern Blot/荧光光谱 （残留DNA）
开发什么方法
适用于特定分子的方法 分子鉴定
肽图 （纯度较高） Western Blot （使用范围广） 紫外扫描图 （纯度及基质要求高） 氨基酸测序 (纯度及基质要求高，样品末端无封闭）