第五章 色谱法__聚酰胺色谱与其他色谱
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交联葡聚糖凝胶由葡聚糖 和甘油基通过醚桥相互交联 而成的多孔性网状结构。 2.流动相
【习题】
1.根据分离原理分类，色谱法主要有___。（A.硅胶色谱和氧化铝色谱 B.液相色 谱和气相色谱 C.柱色谱和薄层色谱 D.吸附色谱、分配色谱、排阻色谱和离 子交换色谱）
2.硅胶柱色谱分离中药成分的色谱行为是___。（A.极性大的先流出 B.极性小 的先流出 C.熔点低的先流出 D.易挥发的先流出）
离子交换色谱的基本构成要素
2）离子交换树脂的组成——树脂母体与交换 基团。 以苯乙烯为单体，二乙烯苯为交联剂， 聚合而成的球形网状结构为母体。然后在 母体上再连接许多活性交换基团。这些基 团的氢离子可被其它离子置换。
3）离子交换树脂的性能
交联度 表示离子交换树脂中交联
剂的百分含量。
交换容量 表示离子交换树脂的交
种类：硅胶 含水17%以上，可作为载体，吸水可 达50%。
硅藻土——最好的支持剂，惰性、多用；可 吸水100%
纤维素 惰性、常用
2.固定相
种类：极性和亲水性溶剂——水、各种水溶液、甲醇、 甲酰胺。亲脂性溶剂——硅油、液体石蜡、石油醚。
选用原则：
被分离成分
固定相
亲水性成分
极性和亲水性溶剂
亲脂性成分
亲脂性溶剂
C.与以前相反 D.无规律变化） 8.SephadexG分离糖、苷的原理是___。（A.吸附 B.分配比 C.分子大小 D.离子
交换
9.不宜用离子交换色谱法分离的成分是___。（A.有机酸 B.生物碱盐 C.强心苷 D.氨基酸）
10.分析色谱行为 （1）纸色谱Rf值大小（水为固定相，正丁醇为流动相）：___ ﹥ ___
1.概念：以多孔凝胶作为固定相的柱 色谱形式为凝胶色谱。（又称为分 子排阻色谱、凝胶过滤色谱、凝胶 渗透色谱）
2.原理：利用分子筛分离物质的原理。 常用于生物化学或分子生物学
或用于分离基因。
凝胶色谱的基本构成要素
1.固定相： 1）种类 多孔凝胶——葡聚糖
凝胶和羟丙基葡聚糖凝胶 2）葡聚糖凝胶的结构
﹥ ___ A.某苷元 B.该苷元的双糖苷 C.该苷元的单糖苷
（2）硅胶薄层色谱Rf值大小：___ ﹥ ___ ﹥ ___ 氧化铝柱色谱出柱顺序：___ → ___ → ___ A.对甲氧基偶氮苯 B.对氨基偶氮苯 C.对羟基偶氮苯
（3）聚酰胺薄层色谱Rf值大小：___ ﹥ ___ ﹥ ___ A.3，7，4‘-三羟基黄酮 B.3-甲氧基- 7，4‘-二羟基黄酮 C.3，7，4‘-三甲氧基黄酮
（2）分类
类型 正相分配色谱
固定相 极性大的溶剂
流动相 极性小的溶剂
被分离成分 水溶性成分
反相分配色谱 极性小的溶剂 极性大的溶剂
脂溶性成分
常用的正相分配色谱：纸色谱 常用的反相分配色谱：C18高效液相色谱
（3）构成要素 1.支持剂——载体，是载负固定相的介质。
要求：中性多孔的粉末；无吸附作用；不溶于所用 溶剂中；可吸收一定量的固定液；不影响流动液的通过； 不影响溶剂的组成与性质。
3.硅胶色谱的分离是依据被分离成分___。（A.吸附力的不同 B.分配系数的不同 C.分子量的不同 D.离子交换能力的不同）
4.正相分配色谱常用的固定相是___。（A.氯仿 B.甲醇 C.正丁醇 D.水） 5.正相分配色谱常用的流动相是___。（A.水 B.碱水 C.亲脂性有机溶剂 D.亲
水性有机溶剂） 6.可用作分配色谱载体的是___。（A.硅藻土 B.聚酰胺 C.活性炭 D.氧化铝） 7.硅胶TLC中，若展开剂的极性增大，各成分的Rf值将会___。（A.变大 B.变小
换能力。
离子交换色谱的基本构成要素
2.流动相——多用具有一定PH和离子强度的缓冲溶液，如磷酸盐 缓冲液。
3.被分离成分——必须具备一定的离子强度。 影响离子交换的因素：交换离子的影响、温度的影响、
交换溶液浓度的影响 离子交换色谱的操作技术——树脂预处理、装柱、上样
交换、洗脱、收集检查、树脂再生。
凝胶色谱
1.聚酰胺色谱
一、含义 以聚酰胺为吸附剂的吸附色谱法。
二、类型——薄层和柱色谱两大类 三、制备 四、分离操作技术
聚酰胺TLC——“聚酰胺片”同氧化铝与硅胶薄层 聚酰胺CC——洗脱液需以水为基本溶剂进行洗脱 五、分离原理
聚酰胺色谱三要素 ① 吸附剂 吸附机理属于半化学吸附，即聚酰胺通过氢键
力吸附。
②流动相及其解吸附能力的强弱
3.流动相
3.流动相
种类：亲脂性溶剂——石油醚、苯、卤代烃类、脂、 酮类等或它们的混合物。极性和亲水性溶剂——水、各 种水溶液及和水相混溶的有机溶剂。
选用原则：
被分离成分
流动相
亲水性成分
亲脂性溶剂
亲脂性成分
极性和亲水性溶剂
4.被分离成分
百度文库
通常——正相分配色谱
被分离成分
固定相
极性大
极性大
极性小
极性小
成分的极性（水溶性）↗ Rf↘
离子交换色谱IEC
原理 利用混合物中各成分解离度的不同进行分离的。
该色谱主要用来分离水离子型化合物或能离子化的成 分与分子型成分，例如无机盐、氨基酸、生物碱和有机酸 等。
+ + R SO3-H+ Na+Cl- R SO3 -Na+ HCl
R N+ OH- + NaCl
二甲基甲酰胺＞甲酰胺＞氢氧化钠水溶液＞氨水溶液＞丙酮＞乙醇＞水
③被分离成分 ——要求：分子结构含有酚羟基或羧基或醌式 羰基
★特别适合分离酚类、酮类，例如黄酮类、鞣质等化合物。 ★影响成分被吸附能力的结构因素（以酚类为例说明）
酚羟基越多的，被吸附能力越强 酚羟基形成分子内氢键的，被吸附能力较弱 具对（间）二酚羟基的 ＞ 具邻二酚羟基的 酚羟基所连母核芳香化程度高的，被吸附能力较强 酚羟基在分子中所占比例越大的，被吸附能力越强
六、应用 聚酰胺色谱对黄酮、酚类、醌类成分的分离效果好，并广泛
应用于生物碱、甾体等极性化合物与非极性的分离。 对鞣质有极强的几乎不可逆的吸附，故可以作为脱鞣的方法
使用。 聚酰胺柱色谱的样品分离量大，可用于制备性分离。
2.分配色谱
（1）原理 利用混合物中各成分在固定相和流动相之间分配系数的不同，经 连续多次的分溶而达到分离目的。由此可见，其分离原理与液-液萃取法相 似，但分离效果高的多。
流动相 极性小 极性大
纸色谱（Paper Chromatography PC）
（1）定义 在色谱滤纸上进行分离分析的色谱方法称之。通常的 纸色谱属于正相分配色谱，色谱滤纸表面吸着的水为固定相，正丁醇等 为流动相。该纸色谱主要分离单糖、低聚糖、氨基酸和苷类等水溶性成 分。
（2）操作步骤 裁制滤纸→点样→展开→显色检视 （3）色谱行为的分析（斑点Rf值大小的判断）
R N+ Cl-+ NaOH
R表示树脂母体，上述交换反应是可逆的。
正反应方向， 交换过程； 逆反应方向， 洗脱过程— —树脂再生。
离子交换色谱的基本构成要素
1.固定相——离子交换剂 种类：离子交换树脂、
硅胶化学键合离子交换剂。 1）离子交换树脂的种类——
阳离子和阴离子交换树脂, 每类又各分为强酸、弱酸、 强碱、弱碱等类型。
【习题】
1.根据分离原理分类，色谱法主要有___。（A.硅胶色谱和氧化铝色谱 B.液相色 谱和气相色谱 C.柱色谱和薄层色谱 D.吸附色谱、分配色谱、排阻色谱和离 子交换色谱）
2.硅胶柱色谱分离中药成分的色谱行为是___。（A.极性大的先流出 B.极性小 的先流出 C.熔点低的先流出 D.易挥发的先流出）
离子交换色谱的基本构成要素
2）离子交换树脂的组成——树脂母体与交换 基团。 以苯乙烯为单体，二乙烯苯为交联剂， 聚合而成的球形网状结构为母体。然后在 母体上再连接许多活性交换基团。这些基 团的氢离子可被其它离子置换。
3）离子交换树脂的性能
交联度 表示离子交换树脂中交联
剂的百分含量。
交换容量 表示离子交换树脂的交
种类：硅胶 含水17%以上，可作为载体，吸水可 达50%。
硅藻土——最好的支持剂，惰性、多用；可 吸水100%
纤维素 惰性、常用
2.固定相
种类：极性和亲水性溶剂——水、各种水溶液、甲醇、 甲酰胺。亲脂性溶剂——硅油、液体石蜡、石油醚。
选用原则：
被分离成分
固定相
亲水性成分
极性和亲水性溶剂
亲脂性成分
亲脂性溶剂
C.与以前相反 D.无规律变化） 8.SephadexG分离糖、苷的原理是___。（A.吸附 B.分配比 C.分子大小 D.离子
交换
9.不宜用离子交换色谱法分离的成分是___。（A.有机酸 B.生物碱盐 C.强心苷 D.氨基酸）
10.分析色谱行为 （1）纸色谱Rf值大小（水为固定相，正丁醇为流动相）：___ ﹥ ___
1.概念：以多孔凝胶作为固定相的柱 色谱形式为凝胶色谱。（又称为分 子排阻色谱、凝胶过滤色谱、凝胶 渗透色谱）
2.原理：利用分子筛分离物质的原理。 常用于生物化学或分子生物学
或用于分离基因。
凝胶色谱的基本构成要素
1.固定相： 1）种类 多孔凝胶——葡聚糖
凝胶和羟丙基葡聚糖凝胶 2）葡聚糖凝胶的结构
﹥ ___ A.某苷元 B.该苷元的双糖苷 C.该苷元的单糖苷
（2）硅胶薄层色谱Rf值大小：___ ﹥ ___ ﹥ ___ 氧化铝柱色谱出柱顺序：___ → ___ → ___ A.对甲氧基偶氮苯 B.对氨基偶氮苯 C.对羟基偶氮苯
（3）聚酰胺薄层色谱Rf值大小：___ ﹥ ___ ﹥ ___ A.3，7，4‘-三羟基黄酮 B.3-甲氧基- 7，4‘-二羟基黄酮 C.3，7，4‘-三甲氧基黄酮
（2）分类
类型 正相分配色谱
固定相 极性大的溶剂
流动相 极性小的溶剂
被分离成分 水溶性成分
反相分配色谱 极性小的溶剂 极性大的溶剂
脂溶性成分
常用的正相分配色谱：纸色谱 常用的反相分配色谱：C18高效液相色谱
（3）构成要素 1.支持剂——载体，是载负固定相的介质。
要求：中性多孔的粉末；无吸附作用；不溶于所用 溶剂中；可吸收一定量的固定液；不影响流动液的通过； 不影响溶剂的组成与性质。
3.硅胶色谱的分离是依据被分离成分___。（A.吸附力的不同 B.分配系数的不同 C.分子量的不同 D.离子交换能力的不同）
4.正相分配色谱常用的固定相是___。（A.氯仿 B.甲醇 C.正丁醇 D.水） 5.正相分配色谱常用的流动相是___。（A.水 B.碱水 C.亲脂性有机溶剂 D.亲
水性有机溶剂） 6.可用作分配色谱载体的是___。（A.硅藻土 B.聚酰胺 C.活性炭 D.氧化铝） 7.硅胶TLC中，若展开剂的极性增大，各成分的Rf值将会___。（A.变大 B.变小
换能力。
离子交换色谱的基本构成要素
2.流动相——多用具有一定PH和离子强度的缓冲溶液，如磷酸盐 缓冲液。
3.被分离成分——必须具备一定的离子强度。 影响离子交换的因素：交换离子的影响、温度的影响、
交换溶液浓度的影响 离子交换色谱的操作技术——树脂预处理、装柱、上样
交换、洗脱、收集检查、树脂再生。
凝胶色谱
1.聚酰胺色谱
一、含义 以聚酰胺为吸附剂的吸附色谱法。
二、类型——薄层和柱色谱两大类 三、制备 四、分离操作技术
聚酰胺TLC——“聚酰胺片”同氧化铝与硅胶薄层 聚酰胺CC——洗脱液需以水为基本溶剂进行洗脱 五、分离原理
聚酰胺色谱三要素 ① 吸附剂 吸附机理属于半化学吸附，即聚酰胺通过氢键
力吸附。
②流动相及其解吸附能力的强弱
3.流动相
3.流动相
种类：亲脂性溶剂——石油醚、苯、卤代烃类、脂、 酮类等或它们的混合物。极性和亲水性溶剂——水、各 种水溶液及和水相混溶的有机溶剂。
选用原则：
被分离成分
流动相
亲水性成分
亲脂性溶剂
亲脂性成分
极性和亲水性溶剂
4.被分离成分
百度文库
通常——正相分配色谱
被分离成分
固定相
极性大
极性大
极性小
极性小
成分的极性（水溶性）↗ Rf↘
离子交换色谱IEC
原理 利用混合物中各成分解离度的不同进行分离的。
该色谱主要用来分离水离子型化合物或能离子化的成 分与分子型成分，例如无机盐、氨基酸、生物碱和有机酸 等。
+ + R SO3-H+ Na+Cl- R SO3 -Na+ HCl
R N+ OH- + NaCl
二甲基甲酰胺＞甲酰胺＞氢氧化钠水溶液＞氨水溶液＞丙酮＞乙醇＞水
③被分离成分 ——要求：分子结构含有酚羟基或羧基或醌式 羰基
★特别适合分离酚类、酮类，例如黄酮类、鞣质等化合物。 ★影响成分被吸附能力的结构因素（以酚类为例说明）
酚羟基越多的，被吸附能力越强 酚羟基形成分子内氢键的，被吸附能力较弱 具对（间）二酚羟基的 ＞ 具邻二酚羟基的 酚羟基所连母核芳香化程度高的，被吸附能力较强 酚羟基在分子中所占比例越大的，被吸附能力越强
六、应用 聚酰胺色谱对黄酮、酚类、醌类成分的分离效果好，并广泛
应用于生物碱、甾体等极性化合物与非极性的分离。 对鞣质有极强的几乎不可逆的吸附，故可以作为脱鞣的方法
使用。 聚酰胺柱色谱的样品分离量大，可用于制备性分离。
2.分配色谱
（1）原理 利用混合物中各成分在固定相和流动相之间分配系数的不同，经 连续多次的分溶而达到分离目的。由此可见，其分离原理与液-液萃取法相 似，但分离效果高的多。
流动相 极性小 极性大
纸色谱（Paper Chromatography PC）
（1）定义 在色谱滤纸上进行分离分析的色谱方法称之。通常的 纸色谱属于正相分配色谱，色谱滤纸表面吸着的水为固定相，正丁醇等 为流动相。该纸色谱主要分离单糖、低聚糖、氨基酸和苷类等水溶性成 分。
（2）操作步骤 裁制滤纸→点样→展开→显色检视 （3）色谱行为的分析（斑点Rf值大小的判断）
R N+ Cl-+ NaOH
R表示树脂母体，上述交换反应是可逆的。
正反应方向， 交换过程； 逆反应方向， 洗脱过程— —树脂再生。
离子交换色谱的基本构成要素
1.固定相——离子交换剂 种类：离子交换树脂、
硅胶化学键合离子交换剂。 1）离子交换树脂的种类——
阳离子和阴离子交换树脂, 每类又各分为强酸、弱酸、 强碱、弱碱等类型。