淋球菌

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4 基因诊断：
1）淋病奈瑟氏菌的基因探针诊断 淋病奈瑟氏菌的基因探针诊断，所用的探针有： 质粒DNA探针，染色体基因探针和rRNA基因探针。 2）淋病奈瑟氏菌的基因扩增检测 上面讲述的探针技术检测淋病奈瑟氏菌的方法， 虽然比培养方法在灵敏度，特异性和方便性上有了 很大的提高，但其仍有一定的局限性，如多数情况 下需要标本的淋病奈瑟氏菌浓度很高，PCR技术的出 现进一步提高了检测淋病奈瑟氏菌的灵敏性，它具 有快速、灵敏、特异、简便的优点，可以直接检测 临床标本中极微量的病原体。
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院内消毒监测
1.空气消毒监测 2.手消毒监测
依据《消毒技术规范》2012版 规定
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空气消毒监测
应在消毒处理后、操作前进行采样。采用沉降法。
布点方法： 室内面积≤30m2， 设内、中、外对 角线3点，内、 外点布点部位距 墙壁1M处；室内 面积＞30m2，设 4角及中央5点， 4角的布点部位 距墙壁1m处。
1.形态与染色
为革兰氏阴性双球菌（粉红色）。形态呈 园形，卵园形或肾形，常成对排列，邻近面扁平 或略凹陷，形似一对咖啡豆。大小为 0.6μm×0.8μm，无芽胞和鞭毛，一般无荚膜， 有菌毛。
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2.培养特性与生化反应
专性需氧。营养要求高，一般多用巧克力 琼脂平板。初次分离培养时需在5%～10%二氧化 碳条件下。
鳞状上皮细胞之间的背 景干净、清亮
鳞状上皮细胞的边缘光 滑且清晰
“肮脏”，鳞状上皮细 胞间堆积大量细菌
一些上皮细胞的至少 75%的边缘被革兰氏染 色不定的球杆菌完全遮 盖（看上去毛茸茸）。 至少20%的细胞有黏附 细菌
细菌性阴道炎的阴道分 泌物中细菌的数量会增 加3-4倍
阴道加德纳菌和厌氧菌 黏附与上皮细胞边缘。 湿片中的这种细胞称为 线索细胞
2 干燥的温度
涂片应自然干燥，如干燥温度过高，细菌会发生 菌体变形，影响观察结果。
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3 固定的操作
固定的目的是杀死细菌，使涂抹于载片上的菌 体很好的附着于玻片上，防止被水冲掉，因为死 的蛋白质比活蛋白质着色力更强。因此固定时， 将涂片慢慢从火焰上通过2-3次，使菌体受热固 着于玻片上。要操作得当，温度低，固定不牢固 水洗时容易被水冲掉；温度高，菌体容易变形， 影响观察效果。
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革兰氏染色注意事项
影响染色的主要因素：
1 涂片的厚度 2 干燥的温度 3 固定的操作 4 酒精脱色的时间 5 载玻片的洁净程度等 6 染色的质量控制
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1 涂片的厚度
若涂片太厚，染色中菌体堆积，导致脱色不全， 造成假阳性。
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女性宫颈分泌物中杂菌多，敏感性和特异性 较差，阳性率仅为50-60%，且有假阳性(有时可见 灰色奈瑟氏菌与正常菌群中的不动杆菌和莫拉氏菌 属，它们的形态与淋病奈瑟氏菌很相似，容易误 诊)。 因此确诊淋病奈瑟氏菌必须：1 直接涂片， 镜检可见多形核白细胞内有革兰氏阴性双球菌。2 淋病奈瑟氏菌培养阳性。世界卫生组织推荐用培养 法检查女病人。
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淋病奈瑟氏菌实验室检查
1 直接涂片染色 2 培养检查淋病奈瑟氏菌
3 淋病奈瑟氏菌相关抗原检测
4 基因诊断等。
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1 涂片检查：
取患者尿道分泌物或宫颈分泌物，新生儿取结膜分 泌物作革兰氏染色，在多形核白细胞内找到革兰氏阴 性双球菌。 涂片对有大量脓性分泌物的单纯淋菌性前尿道炎患 者，此法阳性率在90%左右，可以初步诊断。
淋病奈瑟氏菌
实验室检查
北京世纪坛医院临床检验中心
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1 拓展内容：
a.女性生殖道样本的种类？ b.正常阴道内微生物？ c.阴道清洁度判断标准 d.细菌性阴道炎？
2 淋病奈瑟氏菌检测
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女性生殖道标本的采集
3.抵抗力
极弱，对干燥、热、冷极敏感，在干燥的 环境中，仅存活1～2小时，湿热55摄氏度仅能 存活5分钟。在患者分泌物污染的衣裤、被褥及 厕所上，能存活24小时。对消毒剂极敏感，如 用1：4000硝酸银作用2分钟即可杀死淋病奈瑟 氏菌；对多种抗生素敏感，但易产生耐药性。
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1 简介 2 生物学性状 3 致病性与免疫性 4 实验室检查
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淋病奈瑟氏菌，属奈瑟氏菌属。奈瑟氏菌属 （ Neisseria ）是一群触酶、氧化酶阳性的革兰 氏阴性球菌，包括脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、 乳糖奈瑟氏菌、灰色奈瑟氏菌、粘液奈瑟氏菌、多 糖奈瑟氏菌、微黄奈瑟氏菌、干燥奈瑟氏菌等。
女性下生殖道标本采集的部位取决于症状和所感染 的疾病：
1 宫颈或宫颈内部：淋病奈瑟氏菌，沙眼衣原体，
人乳头瘤病毒 2 阴道高位拭子：念珠菌，阴道毛滴虫，细菌性阴道炎 3 肛门或直肠拭子：淋病奈瑟氏菌，B-群链球菌（+阴 道拭子）
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正常阴道内微生物 （以培养为基础）
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革兰氏染色
1 原理 2 方法 3 注意事项
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革兰氏染色的原理
革兰氏染色原理目前有三种观点：等电点学说、 化学学说和渗透学说。
1．等电点学说：革兰氏阳性菌的等电点在
PH2-3，比阴性菌（PH4-5）低，加之碘为弱氧化剂， 可降低革兰氏阳性菌的等电点，致使两类菌的等电 点差异扩大，因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴 性菌更强。 2．化学学说：碘液在菌体内与结晶紫结合 后又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合，此 结合物不易被丙酮酒精脱掉，呈革兰氏染色阳性。 因革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐，故对碘与结晶 紫结合物摄取少，且不牢固，易被丙酮酒精脱色而 呈革兰氏染色阴性。
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3．渗透学说：
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成 的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇 (或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状 结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的 复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复 染后仍保留初染剂的蓝紫色。 革兰氏阴性菌由于其细胞壁肽聚糖层较薄、 类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇 (或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘 的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后， 细胞被染上复染剂的红色
1 乳酸杆菌 95% 2 脲原体80%
3 葡萄球菌66%
4 普雷沃菌属52% 5 消化链球菌42%
6 链球菌百度文库8%
7 肠杆菌38% 8 支原体14%
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阴道清洁度判定（湿片）
清洁度 杆菌 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 多 中 少 — 球菌 — 少 多 大量 上皮细胞 脓细胞或白细胞个数 满视野 1/2视野 少 — 0～5个/高倍视野 5～15个/高倍视野 15～30个/高倍视野 ＞30个/高倍视野
灰色奈瑟氏菌
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注意事项：
结果应报告：镜检见到白细胞内或 外见到或未见到革兰氏阴性双球菌，不 能直接报告见到淋病双球菌。
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慢性淋病由于分泌物中淋病奈瑟氏菌较 少，阳性率低，因此要取前列腺按摩液，以 提高检出率。 咽部涂片发现革兰氏阴性双球菌不能诊 断淋病，因为其他奈瑟氏菌属在咽部是正常 的菌群。另外对症状不典型的涂片阳性应作 进一步检查。
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2 培养检查：
淋病奈瑟氏菌培养是诊断的重要佐证，培 养法对症状很轻或无症状的男性、女性病人 都是较敏感的方法，只要培养阳性就可确诊， 在基因诊断问世以前，培养是世界卫生组织 推荐的筛选淋病的唯一方法。培养阳性率男 性80%-95%，女性80-90%。
4.所致疾病
淋病奈瑟氏菌侵入泌尿生殖道感染：
在男性主要引起尿道炎，尿道口有脓性分泌物 自动溢出，有尿频、尿急、尿痛、排尿困难等症 状，还可引起前列腺炎、输精管炎、附睾炎等。 在女性主要引起子宫颈炎及尿道炎，还可伴发 阴道炎及外阴炎等，是导致不育原因之一。患淋 病的孕妇，可引起胎儿宫内感染，导致流产、早 产等。 新生儿经产道时可被淋病奈瑟氏菌感染，引起 眼结膜炎，眼内有大量脓性分泌物，称为脓漏眼。
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正常 存在一些或大量相对 较长、平行排列的杆 菌，革兰氏染色阳性 或不定，提示为乳酸 杆菌 除乳酸杆菌外，其他 细菌形态很少，特别 是弯曲的杆菌
细菌性阴道炎 镜检未见形态规则的 乳酸杆菌
备注 大量乳酸杆菌的缺失 是细菌性阴道炎的标 志。
存在许多细菌形态， 包括革兰氏染色不定 的短小球杆菌，小革 兰氏阳性球菌，偶见 两种线状杆菌：短小 逗号形和长梭形 其他结构如多性核白 细胞，酵母菌，精子 等，可能存在但对细 菌性阴道炎的诊断意 义不大。应报告它们 的存在
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4 酒精脱色时间
一般为30秒左右，脱色时间过度，革兰氏阳 性会被误认为阴性，脱色时间不足革兰氏阴性 会被误认为阳性。
5 载玻片的洁净度
载玻片应清洁无油污，若有油污则细菌在玻 片上不能均匀散开，影响涂片效果。
6 染色的质量控制
为避免假阳性与假阴性，每次染色时应使用 标准菌株（大肠杆菌，葡萄球菌）做染色的质 量控制。大肠杆菌应为革兰氏阴性，呈红色。 葡萄球菌应为革兰氏阳性，呈蓝色。
清洁度在Ⅰ～Ⅱ度内视为正常，Ⅲ、Ⅳ度为异常，多数为阴 道炎，可发现阴道霉菌、阴道毛滴虫等病原体，单纯不清洁 度增高而不见滴虫、霉菌者，可见于于细菌性阴道炎。
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细菌性阴道炎(革兰氏染色)
正常 大量鳞状上皮细胞 细菌性阴道炎 大量鳞状上皮细胞 备注 若涂片中少见鳞状上皮 细胞，多由于标本采集 不合格。可以报告：上 皮细胞少见；标本不可 用于评估细菌性阴道炎
形态类别
0 加德纳菌/普雷沃菌（革兰 氏染色不定、求杆菌） 动弯杆菌 0 0
数目/视野
≤1 1 1 1-5 2 2 5-30 3 3 ＞30 4 4
得分
乳酸杆菌
4
3
2
1
0
分数解释标准：
0-3：正常 4-6：中介 7-10：细菌性阴道炎
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淋病奈瑟氏菌检测
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3 抗原检测：
1）固相酶免疫试验（EIA）：可用来检测临 床标本中的淋病奈瑟氏菌抗原，在流行率很高的 地区而又不能作培养或标本需长时间远送时使用， 可以在妇女人群中用来诊断淋病奈瑟氏菌感染。 2）直接免疫荧光试验：通过检测淋病奈瑟氏 菌外膜蛋白I的单克隆抗体作直接免疫荧光试验。 但目前在男女二性标本的敏感不高，特异性差， 加之实验人员的判断水平，故该实验尚不能推荐 用来诊断淋病奈瑟氏菌感染。
混杂的细菌形态提示 厌氧菌和阴道加德纳 菌。弯曲的杆菌提示 动弯杆菌（在无细菌 性阴道炎的妇女中很 少见） 革兰氏染色不能辨别 阴道毛滴虫
其他结构如多性核白 细胞，酵母菌，精子 等，可能存在但对细 菌性阴道炎的诊断意 义不大。应报告它们 的存在
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细菌性阴道炎涂片评分表（革兰氏染色）
淋病奈瑟氏菌为淋病的病原菌，主要经性接触 传染，也可经病人分泌物污染的衣服、毛巾、浴盆 等传染。可引起男性尿道炎、附睾炎、前列腺炎、 咽喉炎，女性的尿道炎、阴道炎、子宫炎。新生儿 经过产道时被感染，可引起淋病奈瑟氏菌结膜炎。
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淋病奈瑟氏菌生物学性状