乳酸测定方法

乳酸的测定:

对观基联苯比色法(参照高庆，2005)

1.材料、试剂与仪器

无水乳酸锂、对疑基联苯、鸽酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水匍萄糖均为分析纯试剂。主要溶液：

①钩酸溶液：L硫酸及10%(W/V)鸽酸钠(NaoWO. - 2H：0)溶液等体积混合，当天使用前配制；

②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuS04 - 5H20) 20g,加蒸馅水70ml,加热使之溶解，再加入蒸憾水定容至100ml；

③对疑基联苯溶液：称取对疑基联苯溶于lOOrnl的L氢氧化钠溶液中(配制时加热助溶，溶解后为澄淸液体)，贮存于棕色瓶中，保存于4C冰箱，可使用一个月；

④乳酸标准储存液(lmg/inl):精确称取无水乳酸锂，溶于50ml蒸饰水中，加L硫酸20ml,后加蒸憎水泄容至100ml,混匀后保存于4°C冰箱。

⑤4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液lOmL加蒸憾水稀释至50mL o

⑥乳酸标准应用液(200gg/mL):使用时取储存液10mL用蒸懈水稀释至50mL o在冰箱中可保存数天。主要仪器：

UNICUV-2100紫外可见分光光度计、TGL-16B离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。

2.方法

青贮浸提液样品预处理

取适虽青贮浸提液样品5000r/min离心10min,取上淸液适当稀释，吸取稀释液于洁净离心管中，加入鸽酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中岀现明显絮状物(约30〜45min), 10000r/m离心10min,取上淸液置于5ml洁净具塞试管中，60C水浴保温30min左右，冷却待用。

标准曲线的制作

①用200Lg/mL乳酸应用标准液

同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释)，按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馅水。

表1 乳酸标准液配制

②各管中分别加入氢氧化钙粉末lOOmg,混匀,8000r/min离心5min,取上淸液,加入预先加有20mg氢氧化钙粉末的小试管中，混匀，加20$硫酸铜溶液，称重，迅速混匀，沸水浴3min,水浴冷却，补足重量,3000r/min 离心5min,各吸上淸液加入比色管中。③在各笛加入25PL的4%硫酸铜溶液，混匀后置冰水浴内冷却。④将预冷的浓硫酸缓缓加入各管中，每管各加，边加边摇,混匀后置沸水浴中准确加热5min, 取出后迅速置冰水浴中冷却3min左右。⑤在各管中加$对轻基联苯溶液，充分振摇后，放置，其间每10min混摇一次。⑥各管置于沸水浴中准确加热90s,立即放入冰水浴中冷却。在波长565nm处用1cm 比色皿，1管作为参比，分别测定吸光度(A)。所得数据以乳酸含量为横坐标，以565nm处的光吸收为纵坐标,作标准曲线。

青贮样品浸提液中乳酸含戢的测左

取青贮样品浸提液滤液按标准曲线的测左方法，以蒸懈水为空白测定其在560nm处的光吸收，所得数据在标准曲线上查得相应的乳酸含量，即为青贮样品浸提液中的乳酸含量。

样品中乳酸含疑二计算值X稀释倍数

2.2 乳酸标准曲线根据乳酸标准液测定的数据作图如下。

由图可得回归方程为；

A= 0. 119C - 0.0102 ( K2= 0. 9943)

式中 C ------ 酒液中乳酸的浓度;Pg/inLo

A —一测定光吸收值。

A-0.0102*1

最后确定的样品中乳酸含1=CX稀释倍数* ---------- 稀释倍数心

(K113

需要试剂：

无水乳酸锂、对疑基联苯、鸽酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水匍萄糖均为分析纯试剂。需要器材：

分光光度计、离心机、离心管、恒温水浴锅、

具塞试管5ml及具塞比色管20ml o