高二生物PCR技术

DNA母链：提供复制的模板 解旋酶：打开DNA双链 4种脱氧核苷酸：合成子链的原料 DNA聚合酶：催化合成DNA子链 ATP：为复制过程提供能量 引物：使DNA聚合酶从引物的3′端开始连
接脱氧核苷酸
一、PCR原理：
• PCR（多聚酶链式反应）技术
– 是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它 能以极少量的DNA为模板，在几小时内复 制出上百万份的DNA拷贝。
课题2
多聚酶链式反应（PCR)扩增 DNA片段
温故知新1
• 组成DNA分子的基本单位是什么? • 这些基本单位是如何连接成DNA分子的? • DNA分子结构有什么特点？
脱 氧 磷酸
脱氧Biblioteka Baidu
核 苷
核糖 脱氧核苷
腺嘌呤（A） 嘌呤
酸
含氮
鸟嘌呤（G）
碱基 嘧啶 胞嘧啶（C）
胸腺嘧啶（T）
5 4
3
1 2
OH HO P O
– 利用了DNA的热变性原理，通过控制温度 来控制双链的解聚与结合。
PCR反应的条件
DNA母链：提供复制的模板
8解0—旋1酶0：0℃打开DNA双链
4种脱氧核苷酸：合成子链的原料 DNA聚合酶： 催化合成DNA子链
耐AT热P：的为D复NA制聚过合程酶提供能量
引物：使DNA聚合酶从引物的3′端开始连 接脱氧核苷酸
碱基
O
O
OH OH
HO P O
O 碱基
O
OH
5’
碱基
脱氧核糖
OH HO P O
O 碱基
磷酸基团 碱基
脱氧核糖
O
磷酸二酯键 O
HO P O
碱基
O
O
碱基
OH
脱氧核糖
脱氧核苷酸链结构简图
3’
5’
3’
3’
5’
温故知新2
➢DNA分子的复制过程是怎样的？ ➢DNA分子的复制需要哪些条件？
DNA复制的条件
缓冲溶液：维持反应的pH值不变
二、PCR反应的过程
1、变性：温度上升到90℃以上时,双链 DNA解聚成为单链。
2、复性（退火）：温度下降到50℃左右,引 物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
3、延伸：温度上升到72℃左右,溶液中
的4种脱氧核苷酸在Taq DNA聚合酶的
作用下,根据碱基互补配对的原则合成 新的DNA链。