利用大肠杆菌生产胰岛素ppt课件

抑制脂肪组织内的激素敏感性脂肪酶，减缓脂肪动员，使组 织利用葡萄糖增加。
（二）调节脂肪代谢
胰岛素能促进脂肪的合成与贮存，使血中游离 脂肪酸减少，同时抑制脂肪的分解氧化。胰岛 素缺乏可造成脂肪代谢紊乱，脂肪贮存减少， 分解加强，血脂升高，久之可引起动脉硬化， 进而导致心脑血管的严重疾患；与此同时，由 于脂肪分解加强，生成大量酮体，出现酮症酸 中毒。
容纳外来
5.胰岛素的产生
在大肠杆菌内,质粒通过表达转录与翻译后,便产 生出胰岛素蛋白质.通过大肠杆菌的大量繁衍,便 可大量生产出胰岛素! 注意：大肠杆菌产出的是多肽链，因为原核生 物没有内质网、高尔基体等，不能进行多肽的 折叠、修饰等，还需人为进行菌体外加工。
生产步骤
1.提取目的基因 2.提取质粒 3.基因重组 4.将质粒送回大肠杆菌 5.胰岛素的产生
1.提取目的基因
既从人的DNA中提取胰岛素基因,可 Nhomakorabea用限制性内切酶 将目的基
因从原DNA中分离。 1.鸟枪法：用一大堆限制性核酸内切酶对附近基因进行
剪切，再提取所需要的。至于如何筛选，用DNA分 子杂交，即DNA探针 2.人工合成法：根据转录蛋白或者mRNA推导出基因序 4.PCR扩增技术：用于大量生产该段基因片段，用于商
（三）调节蛋白质代谢
胰岛素一方面促进细胞对氨基酸的摄取和蛋白 质的合成，一方面抑制蛋白质的分解，因而有 利于生长。腺垂体生长激素的促蛋白质合成作 用，必须有胰岛素的存在才能表现出来。因 此，对于生长来说，胰岛素也是不可缺少的激 素之一。
（四）其它功能
胰岛素可促进钾离子和镁离子穿过细胞膜进入 细胞内；可促进脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核 酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。
通过共价修饰增强磷酸二酯酶活性、降低cAMP水平、升高 cGMP浓度，从而使糖原合成酶活性增加、磷酸化酶活性降低， 加速糖原合成、抑制糖原分解。
通过激活丙酮酸脱氢酶磷酸酶而使丙酮酸脱氢酶激活，加速 丙酮酸氧化为乙酰辅酶A，加快糖的有氧氧化。
通过抑制PEP羧激酶的合成以及减少糖异生的原料，抑制糖 异生。
利用大肠杆菌生产胰岛素
基因工程育种
胰岛素作用机理
胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，也是唯 一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。 作用机理属于受体酪氨酸激酶机制。
（一）调节糖代谢
胰岛素能促进全身组织对葡萄糖的摄取和利用，并抑制糖原分
解和糖原异生，因此，胰岛素有降低血糖的作用。
促进肌肉、脂肪组织等处的靶细胞细胞膜载体将血液中的葡 萄糖转运入细胞。
4.将质粒送回大肠杆菌
在大肠杆菌的培养液中加入含有Ca+的物质,如 CaCl2,这使细胞会吸收外源基因.此时将重组的 质粒也放入培养液中,大肠杆菌便会将重组质粒 吸收. 将大肠杆菌用氯化钙处理，以增大大肠杆菌细胞壁的
通透性， 使含有目的基因的重组质粒能够进入受体细胞，此时
的细胞处 于感受态（理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和
2.提取质粒
从大肠杆菌的细胞质中提取质粒,质粒为环状。 此质粒将作为胰岛素基因的载体。 1.碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提 取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩 增、银染序列分析。 2.煮沸法
3.基因重组
取出目的基因与质粒,先利用同种限制性内切酶 将质粒切开,再使用DNA连接酶将目的基因与质 粒“缝合”,形成一个能表达出胰岛素的DNA质粒。