无菌检查验证方案

目录

1.验证目的及要求

2.验证小组成员及职责

3.验证所必须的文件

4.验证方案具体实施

5.验证总结

1.验证目的及要求：

1.1.目的：

验证在进行无菌检查之前，需验证在实际检验条件下检验用物品及操作程序不得对可能存在的微生物的生长造成不良影响，旨在为进一步完善药品的质量标准，为该药品的无菌检查法的方法学进行验证而提供建议，本实验是关于对***注射液无菌检查方法的验证，结果应显示，***注射液的无菌检查方法符合验证要求。

1.2.要求：

严格按照05版中国药典的无菌检验方法准备验证试验用的样品和材料并依照药典要求的操作步骤对样品进行过滤、淋洗和培养。连续3批产品的验证试验结果均应表明，所有的试验菌株在样品实验组，蛋白胨对照组和阳性对照组中最初出现生长的时间均很相近，并且在14d内都明显见微生物生长，与阳性对照比较，如样品管的微生物生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下已经去除抑菌作用，如样品管的微生物生长微弱，缓慢或不生长，则供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，需消除。可采取以下措施：1）增加冲洗量，但每片滤膜不能超过1000ml。否则，需验证加大冲洗量对滤膜质量有无影响；2）更换滤膜品种，选择对样品吸附性较低的滤膜，并再以相应的方法重复以验证试验，确认采用无菌检查法的可行性。

2.验证小组成员及职责：

公司各部门在验证工作中的职责详见验证主计划

3.验证所必须的文件：

文件存放地点均为公司档案室。

4.验证方案具体实施：

4.1.验证产品名称****注射液

4.2.验证数量：全封闭无菌检测系统：60支/批×3批

4.3.冲洗液：0.1%蛋白胨水溶液

4.4.试验用菌株及培养基：

4.5.菌液的制备：

取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物分别接种至营养肉汤培养基中，白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养18～24小时；用0.9％无菌氯化钠溶液稀释至10-4～10-7制成30～100cfu/ml的菌液。

取黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5～7天，加3～5ml0.9％无菌氯化钠溶液洗脱孢子，吸取出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细管）至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数为30～100cfu/ml的孢子悬液。

4.6.培养基的灵敏度和无菌检查：

取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种的大肠埃希菌菌液1ml（30～100cfu/ml），金黄色葡萄球菌菌液1ml（30～100cfu/ml）、铜绿假单胞菌菌液1ml（10～100cfu/ml）、生孢梭菌液1ml（30～100cfu/ml）各2支，另1支

不接种作为空白对照，培养3天。取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别

接种白色念珠菌菌液1ml（30～100cfu/ml），黑曲霉菌1ml（30～100cfu/ml）各2支，另1支不接种作空白对照，培养5天。

以每株菌接种后的培养基，应该不少于2管呈现生长，对照管澄清即无菌生长，

该培养基的灵敏度和无菌检查符合要求。

4.7.试验方法：

4.7.1.试验组：在超净工作台内打开无菌检测用滤瓶包；把两个过滤瓶插到全自动

封闭式无菌检测仪相对应的底座上。松开蠕动泵头，插入两条连接管后关闭

泵头。在酒精灯近火区内，先将针头插入到0.1%蛋白胨水溶液的瓶子内，

过滤50ml；再将针头插入到盛有***注射液的瓶内，将两个红色的橡胶帽盖

到两个过滤瓶的顶部，启动泵并将盛有***注射液的瓶子倒悬使得溶液被均

等地分流到两个过滤瓶内，过滤完后停泵。同法，用0.1％蛋白胨水溶液冲

洗滤膜，每膜每次冲洗100ml，每片滤膜共冲洗2次。滤完后，取下红色的

盖子，用过滤瓶附带的黄色塑料盖盖上两个过滤瓶下端的出水口。分别往滤

筒内加入约100ml改良马丁培养基或者约100ml硫乙醇酸盐流体培养基。用

剪子在距过滤瓶顶部约12cm处剪断连接管，将断口末端与其滤瓶过滤器的

接头相连。在滤瓶上作标识，注明***注射液名称、批号，日期，培养基种

类。重复上述操作，做完另2组试验，用无菌注射器吸取30-100CFU 上述

表中规定的试验菌通过各培养器顶部的软管接入。

4.7.2.菌液组：无需过滤检品，其它操作均按4.8．1.中同法试验。取与样品组相

同的培养基管，不加样品，同法冲洗后，分别接入表中规定试验菌30-100CFU，作为阳性对照管。

4.7.3.阴性对照组：无需过滤检品，取与样品组相同的培养基管，同法冲洗后，不

加入任何菌株，作为阴性对照。

4.7.4.将改良马丁培养基管置于23-28℃下培养，硫乙醇酸盐流体培养管置于

30-35℃下培养，培养14天，并每天观察试验菌生长情况。

4.7.

5.重复上述（4.8．1.～4.8．4.）步骤，做完3批样品。

4.7.6.将上述各培养管，与阳性对照比较，如样品管的微生物生长良好，则供试品

的该检验量在该检验条件下已经去除抑菌作用，如样品管的微生物生长微弱，

缓慢或不生长，则供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，需消除。

可采取以下措施：1）增加冲洗量，但每片滤膜不能超过1000ml。否则，需

验证加大冲洗量对滤膜质量有无影响；2）更换滤膜品种，选择对样品吸附

性较低的滤膜，并再以相应的方法重复以验证试验，确认采用无菌检查法的

可行性。

5.验证总结