树突状细胞的体外诱导

按表型分
经典DCs(cDCs)
CD11c+CD11b-CD8α+ CD11c+CD11b+CD8α-
DCs亚型
浆细胞样DCs(DCS, pDCs)
摄 取
加 工
提 呈
Flt3L体外诱导 DCs
- 然而，体内DCs数量相对较少，分离纯化也较困难，这严重 影响其在科研和临床中的进一步发展； -通过特定的体外培养、诱导程序，可产生数量可观的DCs， 为DCs研究提供材料上的便利；
扑杀C57BL/6小鼠
制备骨髓单细胞悬液
完全1640培养基添加Flt3L刺激培养
收获细胞，鉴定

R2
R3
小结： R2: pDC (CD11c+CD45RA+) R3: cDC (CD11c+CD45RA-) R4: CD8α+cDC (CD24highCD11blow) R5: CD8α-cDC (CD24lowCD11bhigh)
通过DCs体外诱导和刺激研究进一步了解其在抗分 枝杆菌感染中的功能。
三 试验设计
方法建立
小鼠BM细胞制备
功能研究
细胞因子 分泌 FACS表 型分析 抗原提 呈试验
Flt3L刺激培养BM
获得FL-DCs
表型/功能 鉴定 BCG刺激
FL-DCs在抗菌感染中 的作用研究
四 目前研究进展
1. 小鼠FL-DCs的体外诱导和初步鉴定
脾脏 DCs 亚型
CD11cint B220+PDCA-1+
CD11c+CD45RA-CD24highCD11blow
CD8+cDC
CD11c+CD11b-CD8α+
CD11c+CD45RA-CD24lowCD11bhigh
CD8-cDC
CD11c+CD11b+CD8α-
二 研究内容和目的
建立Flt3L体外诱导小鼠FL-DCs方法，并对其进行 鉴定； 使用卡介苗(BCG)刺激FL-DC，分析其在抗菌感染 中的功能；
- DCs是Ralph M. Steinman于1973年在观察小鼠脾脏细胞时 首次发现的“一种具有不同特性的大的星形细胞”； - DCs、巨噬细胞和B细胞同属于抗原提呈细胞，均具有摄取、 加工并通过MHC I/II分子提呈抗原的能力，在感染等的先 天和获得性免疫中发挥重要作用； - DCs是一个包含许多不同细胞亚群的异质性群体，不同亚群 之间在表型、定位甚至功能上都有不同。
R4
R5
五 下一步计划
使用卡介苗(BCG)刺激FL-DC，分析其在抗菌 感染中的作用
数据整理，论文写作
敬请各位老师、同学批评指正！
- 近年来，通过体外培养小鼠骨髓细胞Biblioteka BaiduBM)，添加fms样酪氨 酸酶3配体(Flt3L)进行刺激，可获得大量DCs(FL-DCs)，且 它们在表型、功能等方面与小鼠体内脾脏DCs均很相似，有 望作为体内DCs等价物。
Flt3L
Flt3L
Flt3L作用下的DCs谱系分化图谱
FL-DCs 亚型
pDC CD11c+CD45RA+PDCA-1+
扬州大学本科学位论文中期考核
Flt3L体外诱导的小鼠树突状细
胞及其抗菌免疫功能的研究
班 级：生工0901班 学 生：蒋 晨 指导老师：陈 祥 副教授 2012年11月
汇报内容
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相关研究背景 研究内容和目的 试验设计
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5
目前研究进展
下一步计划
一 研究背景
树突状细胞（dendritic cells, DCs）