高效液相色谱二极管阵列检测器测定化妆品中的甲氨蝶呤

高效液相色谱二极管阵列检测器

测定化妆品中的甲氨蝶呤

武　婷Ξ,王　超,王　星,肖海清,张　庆,马　强

(中国检验检疫科学研究院工业品检验研究所,北京100123)

摘　要:建立了高效液相色谱(HP LC )Π二极管阵列检测器(DAD )测定化妆品中

甲氨蝶呤的方法。乳液、膏霜、化妆水、散粉、唇膏类等不同类型的化妆品样品经超声提取后,高效液相色谱DAD 扫描检测,并在302nm 进行分析。用保留时间结合紫外光谱定性,外标法定量。甲氨蝶呤在0105～100mg ΠL 的范围内线性关系良好(r =019999)。在添加质量浓度为0105～110mg ΠL 范围时,回收率在8718%～10314%之间,相对标准偏差在0142%～618%,检出限为0102mg ΠL ,定量限为0105mg ΠL 。该法可用于化妆品中甲氨蝶呤的检测。关键词:高效液相色谱;二极管阵列检测器;化妆品;甲氨蝶呤

中图分类号:O657.7 文献标识码:A 文章编号:100020720(2009)082040203

甲氨蝶呤为一种叶酸还原酶抑制剂,主要抑制二氢叶酸还原酶而使二氢叶酸不能还原成有生

理活性的四氢叶酸,从而使嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的生物合成过程中一碳基团的转移作用受阻,导致DNA 的生物合成受到抑制。甲氨蝶呤会导致胃肠道反应、肝功能损害、肾功能损害、呼吸系统内脏等出现病变。对消费者的健康产生不良影响。文献[1]规定了甲氨蝶呤在化妆品中为禁用物质。

目前,文献中只有对血浆等生物样品中甲氨

蝶呤测定方法的报道[2～8]

,关于化妆品中甲氨蝶呤测定的方法未见报道。本文建立了用高效液相色谱(HP LC )Π二极管阵列检测器(DAD )进行化妆品中甲氨蝶呤检测的方法,用保留时间结合紫外光谱图定性,外标法定量。方法灵敏度高、准确、快速、简便,可用于化妆品中甲氨蝶呤的检测。1　实验部分1.1　仪器与试剂

Agilent 1200高效液相色谱仪,配有在线脱气

机、二元泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检

测器(美国Agilent 公司);Milli 2Q 超纯水器(美国

Millipore 公司);K Q 2600B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器公司);CR 21G 型高速冷冻离心机(日本Hitachi 公司);甲氨蝶呤(纯度99%,F LUK A 公司);甲醇(色谱纯,美国Fisher 公司);其它试剂均为分析纯,化妆品样品为市售化妆品。1.2　色谱条件

色谱柱:K romasil C 18柱(250mm ×416mm i.d.,5μm );流动相:V (甲醇)∶V (01025m ol ΠL NaH 2PO 4溶液,pH 5.0)=3∶7;流速:110m L Πmin ;

柱温:25℃;检测波长:302nm ;进样量:10μL 。甲氨蝶呤的标准液相色谱图如图1。1.3　标准溶液的配制

称取甲氨蝶呤010500g ,置于50m L 烧杯中,加入1m L 0.1m ol ΠL 的NaOH 溶液溶解后,用水移入100m L 棕色容量瓶中,加水定容至刻度,即得甲氨蝶呤质量浓度为500mg ΠL 的标准储备液,再逐级用水稀释至所需要浓度。

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04—Ξ收稿日期:2008207201;修订日期:2008208231

基金项目:国家标准委员会计划(200728342T 2607)项目资助作者简介:武　婷(1982-),女,工程师;E 2mail :cau6281@

图1　甲氨蝶呤的标准液相色谱图

Fig.1　Liquid chrom atogram of methotrexate stand ard

1.4　样品前处理

1.4.1　乳液、膏霜、化妆、散粉类化妆品前处理　称取化妆品试样01200g,置于10m L具塞比色管中,加入10m L流动相:V(甲醇)∶V(01025 m olΠL NaH2PO4溶液,pH510)=3∶7,超声提取20min。取部分溶液转移至离心管中,以12000rΠmin离心15min,离心后的上清液经0145μm滤膜过滤,滤液待测定用。

1.4.2　唇膏类化妆品前处理　称取化妆品试样01200g,置于10m L具塞比色管中,加入10m L V(四氢呋喃)∶V(01025m olΠL NaH2PO4溶液, pH5.0)=1∶1的混合溶液,超声提取20min。取部分溶液转移至离心管中,以12000rΠmin离心15min,离心后的上清液经0.45μm滤膜过滤,滤液待测定用。

2　结果与讨论

通过实验,采用K romasil C

18色谱柱,能够得到满意的效果。

2.1　流动相的选择

分别考察了不同比例的甲醇2水、乙腈2水、甲

醇2NaH

2

PO4缓冲盐对甲氨蝶呤的洗脱及峰形情

况,结果表明,流动相为甲醇2NaH

2

PO4缓冲盐体系下,且体积比为3∶7时,甲氨蝶呤保留较好,峰

形较对称。后研究了不同浓度的NaH

2

PO4、不同pH的NaH2PO4对甲氨蝶呤出峰情况及峰形的影

响,结果表明,甲醇20.025m olΠL NaH

2

PO4(pH5.0)出峰效果最佳,峰的对称性最好。

2.2　检测波长的选择

对一定浓度的甲氨蝶呤进行紫外全波长扫描。甲氨蝶呤的紫外吸收光谱图见图2。从图可见,甲氨蝶呤在302nm处吸收较强,响应值最大,所以选择302nm作为检测波长

。

图2　甲氨蝶呤标准溶液紫外吸收光谱图

Fig.2　UV spectrum of methotrexate stand ard

2.3　样品前处理方法

化妆品基质比较简单,经文献调研和实验对比,采用超声提取的方法能够有效的提取化妆品中的甲氨蝶呤。

2.3.1　提取溶剂的选择　甲氨蝶呤易溶于稀酸、稀碱等水溶液。但只加入稀酸、稀碱对于油包水结构的化妆品很难达到破乳的效果,所以提取时需加入一定量的有机溶剂进行破乳。分别研究了甲醇∶2mm olΠL NaOH(1∶1)、乙腈∶2mm olΠL NaOH (1∶1)、甲醇∶2mm olΠL NaOH(3∶7)、流动相等4种溶液的提取效果。结果表明,流动相的提取效果最佳,回收率最好,且不存在溶剂与流动相不匹配的情况。所以,确定流动相为提取溶剂。

对于唇膏类,含蜡质成分较多的化妆品样品,另外比较了四氢呋喃22mm olΠL NaOH(1∶1)、四氢呋喃22mm olΠL NaOH(3∶7)、四氢呋喃225mm olΠL NaH2PO4(1∶1)、四氢呋喃225mm olΠL NaH2PO4(3∶7)等4种提取溶剂的提取效率,结果表明,四氢呋喃225mm olΠL NaH2PO4(1∶1)作为提取溶剂的提取效率最高,所以选定唇膏等蜡质样品的提取溶剂为四氢呋喃225mm olΠL NaH

2

PO4(1∶1)。

2.3.2　提取时间的选择　在化妆品中添加相同量的甲氨蝶呤,分别超声提取10,20,30,40和50min,测定溶液中甲氨蝶呤的含量,结果发现当提取时间超过20min后,提取效率基本一致,因此选用20min作为提取时间。

2.4　线性关系与检出限

按上述色谱条件分别注入系列质量浓度的标准溶液各10μL,测定甲氨蝶呤的峰面积,以待测物的质量浓度ρ(mgΠL)对相应的峰面积Y作图,

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