洁霉菌发酵

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洁霉菌的紫外诱变

摘要:洁霉菌的紫外诱变是利用紫外线的能量引起DNA结构发生变化,使邻近碱基对发生突变,形成的胸腺嘧啶二聚体,使DNA复制时发生错位造成蛋白质合成的错误,从而通过改变菌种的特性,再经过选育,从中找出性能优良的菌种,达到提高产量或质量的目的。本实验从孢子悬浮液开始,经过紫外诱变后,分离、纯化、发酵最终用杯碟法测出经诱变后的各菌种的效价。并通过与原菌种的效价相比,检验本实验所用诱变剂剂量对菌种效价提高的影响。

关键词:紫外诱变洁霉菌抗生素杯碟法效价

Abstract: Ultraviolet ray is microorganism strains of breeding a kind of the most commonly used one of the mutagen, it use ultraviolet light energy cause DNA structure changes, base neighboring mutations, formation of thymine dimers, make DNA replication happens when dislocation of the protein synthesis by mistake, so as to change the characteristics of strains, and then by selective breeding, find out the good performance of strains, improve the quality of the production or purpose. This experiment spore suspension from the start, after uv mutagenesis, separation, purification, fermentation and eventually use cups and saucers method by mutation of the measure after the titer strains. And through the effect with the original strains than price, inspection this experiment used mutagen dose to the influence of the strains titer improve

Key words:ultraviolet mutagenesis clean mold antibiotics cup dish method titer

前言:紫外线是微生物菌种选育中最常用的一种诱变剂之一,在实验中我们常用15瓦的紫外线灯管来处理菌种,因为此灯管照射的波长范围中253.7 A波长附近的光波比较多。此波长易被核酸吸收,因而诱变频率高。

在处理菌种时常用死亡率的大小来间接了解诱变率的高低。因为菌种的死亡率和诱变率之间有一定的相应关系,而在实验中测出死亡率所用的时间比较短,能较早了解照射剂量是否适合,可及早调整。

一般照射剂量与波长、照射距离、照射时间有关,所以可改变上述因素来调整照射剂量的大小,以达到较大的诱变率,提高得到高产菌种的机率。

本实验固定波长(用15瓦灯管)、固定照射距离(30cm),通过不同的照时间(20~40秒)的处理,最后视其效果。

学会用生物效价测定法中的杯碟法测定洁霉素的效价。

一、实验目的与要求

掌握洁霉菌紫外诱变技术的全程操作,包括消毒仪器器皿、配置培养基等准备工作、诱变、分离、培养等。本实验为设计型实验,学生在老师的指导下自行选择紫外诱变时间。

整个实验分五次完成,历时五周。实验报告以论文形式提交,要求在五千字以上、装订成册,并提交电子版。

二、实验原理

紫外线是微生物菌种选育中最常用的一种诱变剂之一,它利用紫外线的能量引起DNA结构发生变化,使邻近碱基对发生突变,形成的胸腺嘧啶二聚体,使DNA复制时发生错位造成蛋白质合成的错误,从而改变菌种的特性,再经过选育,从中找出性能优良的菌种,达到提高产量或质量的目的。

本实验从孢子悬浮液开始,经过紫外诱变后,分离、纯化、发酵最终用杯碟法测出经诱变后的各菌种的效价。并通过与原菌种的效价相比,检验本实验所用

诱变剂剂量对菌种效价提高的影响。

三、实验过程

第一次实验

1.实验目的:

为诱变实验作准备,学会培养基的配制。

2.材料与仪器

(1)玻璃仪器:250ml三角瓶:15*150试管12只;双碟:直径9cm10个:直径5cm1个:涂布棒2只:lml或2ml吸管12只:5ml吸管1只。

(2)洁霉菌平板分离培养基配方:可溶性淀粉2%,KNO30.1%,K2HPO4 3H2O 0.05%,MgSO4 7H2O 0.05%,NaCL 0.05%,FeSO4 7H2O 0.001%。琼脂 1 %,pH 7.2。其余为蒸馏水。

3、实验步骤:

(1) 按上述培养基配方配制250毫升分离培养基,分装到二只三角瓶中。每瓶100毫升,剩余部分装到4支试管中,每支4毫升左右,待消毒后做成斜面。

(2) 在12支试管中分别加4.5毫升蒸馏水。

(3) 将9cm的碟子(每人8-10个)、5cm的碟子1个(含转子)、涂布棒2只、移液管(塞好棉花)等均经高温灭菌后备用。

第二次实验

1、实验目的:

掌握紫外诱变育种的操作技术并通过实验计算出不同照射时间的死亡率。

2、实验原理:

紫外线处理菌种的原理在前面已叙述,在实验中我们常用15瓦的紫外线灯管来处理菌种,因为此灯管照射的波长范围中253.7 A波长附近的光波比较多。此波长易被核酸吸收,因而诱变频率高。

在处理菌种时常用死亡率的大小来间接了解诱变率的高低。因为菌种的死亡率和诱变率之间有一定的相应关系,而在实验中测出死亡率所用的时间比较短,能较早了解照射剂量是否适合,可及早调整。

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