纸层析法实验
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原点到层析点中心的距离 Rf ＝ 原点到溶剂前沿的距离
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。 值的大小与物 在一定的条件下某种物质的 值是常数。Rf值的大小与物 值是常数 质的结构、性质、溶剂系统； 质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度 等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。
氨基酸的分类鉴定 纸层析法
一、实验目的
• 通过氨基酸的分离，学习纸层析的基本原 通过氨基酸的分离， 理及操作方法。 理及操作方法。
二、实验原理
• 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 • 层析溶剂由有机溶剂和水组成。 层析溶剂由有机溶剂和水组成。 • 物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来 物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用 值 比移） 表示的： 表示的：
溶剂前沿 层析点
原点
Leabharlann Baidu
三、实验器材
• • • • • 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸
四、实验试剂
1、扩展剂： 是4份水饱和的正丁醇和一份醋酸的混 、扩展剂： 份水饱和的正丁醇和一份醋酸的混 合物。 正丁醇15ml水放入分液漏斗中混匀， 水放入分液漏斗中混匀， 合物。将20ml正丁醇 正丁醇 水放入分液漏斗中混匀 充分振荡，静置后分层，放出下层水层， 充分振荡，静置后分层，放出下层水层，再和 5ml冰醋酸混合。取漏斗内的扩展剂约5ml置于小 冰醋酸混合。取漏斗内的扩展剂约 置于小 冰醋酸混合 烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用。 烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用。 2、氨基酸溶液： 0.5％的赖氨酸、缬氨酸、亮氨酸 、氨基酸溶液： ％的赖氨酸、缬氨酸、 溶液及它们的混合物（各组分浓度均为0.5％） 溶液及它们的混合物（各组分浓度均为 ％） 3. 显色剂 0.1％茚三酮 正丁醇溶液 显色剂: ％茚三酮-正丁醇溶液
用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液 用喷雾器均匀喷上 ％茚三酮正丁醇溶液, 置于烘箱中烘烤5min（100℃）或用热吹风吹干 置于烘箱中烘烤 （ ℃
计算各种氨基酸的Rf值 计算各种氨基酸的 值
溶剂前沿
亮氨酸 苯丙氨酸 缬氨酸
脯氨酸 赖氨酸
氨基酸纸层析分离示意图
六、注意事项
• 在操作过程中，手不要摸滤纸 在操作过程中，手不要摸滤纸。 • 点样直径不超过 点样直径不超过3mm 。 • 点样的一端朝下, 扩展剂的液面需低于点样 点样的一端朝下 线1cm。 。 • 即时取出滤纸 以免出现氨基酸层析跑到滤 即时取出滤纸, 纸的外面不能检测。 纸的外面不能检测。
将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中
五 、 操 作 方 法
用別针缝成筒状，将盛有 用別针缝成筒状，将盛有20ml扩展剂大额培养皿迅速置于密闭 扩展剂大额培养皿迅速置于密闭 的层析缸中并将滤纸直立于培养皿中，待溶剂上升15－ 的层析缸中并将滤纸直立于培养皿中，待溶剂上升 －20cm时取 时取 出滤纸，用铅笔描处溶剂前沿界限， 出滤纸，用铅笔描处溶剂前沿界限，自然干燥或用吹风机热风吹干 用毛细管将各氨基酸样品分别点在这四个位置， 用毛细管将各氨基酸样品分别点在这四个位置，干后再点一次 取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘 － 处用铅笔划线， 取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2－3cm处用铅笔划线， 处用铅笔划线 每隔2cm做一个记号 每隔 做一个记号
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。 值的大小与物 在一定的条件下某种物质的 值是常数。Rf值的大小与物 值是常数 质的结构、性质、溶剂系统； 质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度 等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。
氨基酸的分类鉴定 纸层析法
一、实验目的
• 通过氨基酸的分离，学习纸层析的基本原 通过氨基酸的分离， 理及操作方法。 理及操作方法。
二、实验原理
• 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 • 层析溶剂由有机溶剂和水组成。 层析溶剂由有机溶剂和水组成。 • 物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来 物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用 值 比移） 表示的： 表示的：
溶剂前沿 层析点
原点
Leabharlann Baidu
三、实验器材
• • • • • 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸
四、实验试剂
1、扩展剂： 是4份水饱和的正丁醇和一份醋酸的混 、扩展剂： 份水饱和的正丁醇和一份醋酸的混 合物。 正丁醇15ml水放入分液漏斗中混匀， 水放入分液漏斗中混匀， 合物。将20ml正丁醇 正丁醇 水放入分液漏斗中混匀 充分振荡，静置后分层，放出下层水层， 充分振荡，静置后分层，放出下层水层，再和 5ml冰醋酸混合。取漏斗内的扩展剂约5ml置于小 冰醋酸混合。取漏斗内的扩展剂约 置于小 冰醋酸混合 烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用。 烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用。 2、氨基酸溶液： 0.5％的赖氨酸、缬氨酸、亮氨酸 、氨基酸溶液： ％的赖氨酸、缬氨酸、 溶液及它们的混合物（各组分浓度均为0.5％） 溶液及它们的混合物（各组分浓度均为 ％） 3. 显色剂 0.1％茚三酮 正丁醇溶液 显色剂: ％茚三酮-正丁醇溶液
用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液 用喷雾器均匀喷上 ％茚三酮正丁醇溶液, 置于烘箱中烘烤5min（100℃）或用热吹风吹干 置于烘箱中烘烤 （ ℃
计算各种氨基酸的Rf值 计算各种氨基酸的 值
溶剂前沿
亮氨酸 苯丙氨酸 缬氨酸
脯氨酸 赖氨酸
氨基酸纸层析分离示意图
六、注意事项
• 在操作过程中，手不要摸滤纸 在操作过程中，手不要摸滤纸。 • 点样直径不超过 点样直径不超过3mm 。 • 点样的一端朝下, 扩展剂的液面需低于点样 点样的一端朝下 线1cm。 。 • 即时取出滤纸 以免出现氨基酸层析跑到滤 即时取出滤纸, 纸的外面不能检测。 纸的外面不能检测。
将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中
五 、 操 作 方 法
用別针缝成筒状，将盛有 用別针缝成筒状，将盛有20ml扩展剂大额培养皿迅速置于密闭 扩展剂大额培养皿迅速置于密闭 的层析缸中并将滤纸直立于培养皿中，待溶剂上升15－ 的层析缸中并将滤纸直立于培养皿中，待溶剂上升 －20cm时取 时取 出滤纸，用铅笔描处溶剂前沿界限， 出滤纸，用铅笔描处溶剂前沿界限，自然干燥或用吹风机热风吹干 用毛细管将各氨基酸样品分别点在这四个位置， 用毛细管将各氨基酸样品分别点在这四个位置，干后再点一次 取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘 － 处用铅笔划线， 取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2－3cm处用铅笔划线， 处用铅笔划线 每隔2cm做一个记号 每隔 做一个记号