硫酸软骨素USP质量标准翻译

硫酸软骨素钠

质量标准（USP）

硫酸软骨素钠是从牛、猪、鸟类等家畜软骨组织中提取制得的硫酸化链状黏多糖钠盐。主要为N-乙酰半乳糖胺（2-乙酰胺-2脱氧-β-D-吡喃半乳糖）和D-葡萄糖全算的共聚物的硫酸酯的钠盐，共聚物内己糖通过β-1,4及β-1,3糖苷键交替连接。在普通使用的黏多糖中，硫酸基主要位于分子中半乳糖的4位上，少量的硫酸基在6位上。在普遍使用的黏多糖中软骨糖胺部分主要为4-位单硫酸盐，少量为6-位。按干燥品计算，含硫酸软骨素钠90.0%~105.0%。

注意：硫酸软骨素钠具有很强的引湿性，应避免暴露于空气中，称量应迅速。

包装、贮存：保存于密封容器。

【溶液澄清度和颜色】取本品2.5g至50ml容量瓶中。溶于不含二氧化碳的纯水中，并稀释至刻度，摇匀后立即检查。置于1cm吸收池内，在420nm波长处检测吸光度，以不含二氧化碳的水作为对照：吸光度不得大于0.35。

【鉴别】A. 本品的红外光吸收图谱应与硫酸软骨素钠对照品的图谱一致。

B. 取本品0.5g溶于10ml纯水中，显钠盐的鉴别反应。

【比旋度】取本品，精密称定，用水溶解并定量稀释制成每1ml中约含30mg的溶液。测定，比旋度应为-20°至-30°。

【微生物限度】细菌总数不能超过1000 CFU/g，霉菌和酵母菌总数不能超过1000 CFU/g，在相同条件下不得检出沙门氏菌和大肠杆菌。

【pH】取本品0.1g溶于10ml纯水中溶解，pH值为5.5~7.5。

【干燥失重】取本品，在105℃干燥4小时，减失重量不得过10.0%。（注意：硫酸软骨素钠有很强的吸湿性，应避免暴露于空气中，称量应迅速。）

【炽灼残渣】以干燥品计算，遗留残渣应为20.0%~30.0%。

【氯化物】取本品0.10g，与0.7ml 盐酸（浓度0.020 mol/L）对照液比较，不得更深（0.5%）。【硫酸盐】取本品200mg溶于40ml水中，加入10ml（30mg/ml）西吡氯胺溶液，混匀，过滤。取25ml滤液检测，与0.25ml 硫酸（浓度0.010mol/L）对照液比较，不得更深（0.24%）。【重金属】照USP<231>II法测定，重金属含量不得过0.002%。

【纯度】电泳法

0.1mol/L醋酸钡缓冲液（pH 5.0）的制备：取醋酸钡约25.24g，加水溶解并稀释至900ml，用醋酸调节pH至5.0，再加水至1L，混合均匀。

染色液：0.1%甲苯胺蓝醋酸溶液：取1g甲苯胺蓝，加0.1mol/L的醋酸1000ml使溶解。

标准溶液1：制备浓度为30mg/ml的硫酸软骨素钠对照品水溶液。

标准溶液2：取1ml标准溶液1，加水稀释至50ml，混合均匀。

供试品溶液：取本品150mg，精密称定，置于5ml容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，混合均匀。

检测步骤：取一适用于醋酸纤维薄膜电泳的电泳仪，将电泳槽内加满0.1mol/L的醋酸钡盐缓冲液（pH5.0）。取一张醋酸纤维薄膜，约5~6cm×12~14cm大小，浸入0.1mol/L的醋酸钡盐缓冲液（pH5.0）中10分钟，或待完全浸透，取出夹于滤纸中吸去多余的缓冲液。将薄膜置于电泳槽架上，用适宜的点样装置，相薄膜的光泽面上滴加相同体积（约0.5μl）的供试品溶液、标准溶液1和标准溶液2。确保薄膜的两端至少各有0.5~1.0cm浸泡如缓冲液中。使用60V恒压（起始电流约6mA）电泳2小时。（注意：应在5分钟内完成点样并启动定压，因为进一步干燥会使薄膜的灵敏度降低。）将点样面向下放置，轻轻摆动或浸入染色

试剂中，5min后再缓慢搅动溶液1min。将膜条移出，用5%醋酸溶液漂洗，直至脱去底色为止。对比色带，供试品中主色带的位置与标准溶液1的完全相同，标准溶液2的色带清晰可见且迁移率与标准溶液1的一致。供试品所有次级色带，与标准溶液2的色带相比，不得更深。检测到的任何单杂不得超过2%。脱色完成后15分钟内拍照记录结果。

【蛋白质限度】

碱性酒石酸铜试剂的制备：取200mg酒石酸钠二水合物，加水10ml使溶解，标记为溶液A。去硫酸铜100mg，加水10ml使溶解，标记为溶液B。取2.0g无水碳酸钠，加入0.1mol/L 氢氧化钠溶液使溶解并稀释至100ml，标记为溶液C。分别取1ml溶液A和溶液B混合均匀，再向混合溶液中缓慢加入100ml溶液C，边加边搅拌。在24小时内使用，否则废弃。

标准溶液的制备：精密量取一定体积的7%的牛血清蛋白法定对照品于适应容器中，加水逐步稀释得浓度为35μg/ml的水溶液。

供试品溶液的制备：取一定量本品（相当于60mg本品干燥品），精密称定，置100ml 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

检测步骤：取三支试管，分别装入2.0ml水、2.0ml供试品溶液和2.0ml标准溶液，各加入2.0ml新鲜配制的碱性酒石酸铜试剂，混匀。约10分钟后，向各试管中加入1.0ml福林酚苯酚指示液（临用钱迅速加水稀释（1:5）），立刻剧烈摇匀。30分钟后，在750nm波长处检测各溶液的吸光度。供试品溶液的吸光度不得大于标准溶液。按干燥品计算，蛋白质含量不得高于6.0%。

含量测定

西吡氯胺溶液的制备：制备浓度为1mg/ml的西吡氯胺水溶液，用前脱气。

稀释液的制备：称取约297g磷酸一钾，492mg磷酸二氢钾，250g吐温-80，置1L烧杯中。加水1000ml使溶解，用氢氧化钾或磷酸调节pH至7.0±0.2。

标准溶液的制备：取USP硫酸软骨素钠对照品加水溶解并稀释，得3种浓度的水溶液，分别为1.5mg/ml，1.0mg/ml和0.5mg/ml。

供试品溶液的制备：取干燥后的本品100mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加30ml 水溶解并稀释至刻度，摇匀。

检测步骤：分别量取5.0ml标准溶液和供试品溶液分置4个滴定容器中，各加入约25ml 稀释液。使用光电极作为参比电极，可选择420nm、550nm或660nm中任一波长。搅动直至读数稳定，将吸光度置零，用西吡氯胺溶液进行滴定。根据消耗的西吡氯胺溶液体积，以及各小份标准溶液中硫酸软骨素钠的质量（mg）进行线性回归，由标准曲线求得滴定所用小份供试品溶液中硫酸软骨素钠的质量。按下式计算硫酸软骨素钠的百分率：2000（M/W）

式中：M为小份供试品溶液中硫酸软骨素钠的质量；

W为制备供试品溶液时所用本品的重量，mg。