生化试剂培训PPT课件

2020年9月28日
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二、常见校准方法
（e）适用的分析方法1点终点法、2点速率法、 2点终点法、速率A法
ALT,AST参数设置时，如果非本公司机器可以将 试剂和样本比改为30：1，即试剂1和试剂2和样本 比为240：60：10，通过校准确定K值；这样的好 处是线性可以提高到1500U/L，抗干扰的能力提高 1.5倍，弊端是CV值不够理想，本公司的机器可以 将试剂样本比设置为20：1，即试剂1和试剂2和样 本比为240：60：15，通过校准确定K值。这样的 好处是线性可提高至1000U/L，并且兼顾了CV值。
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二、常见校准方法
（2） 2点线性法 测定校准液1（试剂空白）与校准液2，形 成 线性工作曲线,校准曲线如图2-7所示：
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二、常见校准方法
（3） 多点线性法 通过空白（或校准液1）和校准液（第2校准液及第6校准液）的测定 用线性回归制成线性工作曲线,校准曲线如图2-8所示:
生化试剂培训教材
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第一部分 基本术语
• 一、临床化学自动分析使用术语
• 1、双波长 由主波长和副波长构成，可以消除对实 验结果的影响。主波长是生成的产物颜色对光吸收 的特有波长。副波长是为消除其他干扰物质在主波 长造成测定干扰所设定的波长。
• 2、反应杯空白 在特定波长下，光通过以蒸馏水 或空气为反应体系所测得的吸光度值。
图2-2 1点终点法反应曲线
吸
光
度
Leabharlann Baidu
R2
S+ R1 SB B1 B2 B3
AL AL 1 2
时间（s）
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一、测试方法
• （2） 2点终点
• 在被测物反应尚未开始时，选择第一个测光点， 在反应到达终点或平衡时选择第二个测光点， 这2个测光点的吸光度之差用于计算样本浓度， 称为2点终点法。
图2-8 多点线性校准曲线（线性）
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三、常见校准方法
（4） Logit-log3P（非线性法） 适用于随浓度升高而吸光度表现为收敛 的工作曲线,Logitlog3P（非线性法）校准曲线如图2-9所示:
图2-9 Logit-log3P校准曲线（非线性法）
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一 基本术语
• 5、延迟时间
•
指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。
一般用于两点法和速率法。
• 注意：在速率法和两点法中，延长延迟时间必然缩 短线性监测期，减少测定的线性范围，也易发生底 物耗尽.ALT,AST,BUN,HBDH等负反应试剂 ，浓度 极高时测值不一定是超线性，还有可能是底物耗尽
光度也不是终点吸光度，在单位时间内计算2点 间的吸光度之差用于样本浓度的计算，称为2点 速率法，反应曲线如图2-4所示：
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一、测试方法
图2-4 2点速率
吸
反应界限水平
光
度
R2
S+ R1
AL AL 1 2
( AM AM 1) 2
（t）
SB B1 B2 B3
时间（s）
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三、常见校准方法
（5） Logit-log4P（非线性法） 适用于随浓度升高而吸光度表现为收敛 的工作曲线,Logitlog3P（非线性法）校准曲线如图2-10所示:
图2-10 Logit-log4P校准曲线（非线性法）
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三、常见校准方法
（6） Logit-log5P（非线性法） 具有与Logit-log4P同样的特征，由于此方法多一个计算参数 在某些情况下结果更加精确,校准曲线如图2-11所示:
图2-11 Logit-log5P校准曲线（非线性法）
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三、常见校准方法
（7） 指数函数法（非线性法） 工作曲线随浓度的增加吸光度出现离散趋势,校准曲线如图2-12所示:
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一、测试方法
反应曲线如图2-3所示：
吸
光
R2
度
S+ R1
AL AL 1 2
SB B1 B2 B3
( AM AM 1) 2
时间（s）
分析项目：如酶法的肌酐（CRE）等。
图2-3 2点法终点
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一、测试方法
• 2点速率 测定2个测光点，此两点既不测反应初始吸
7、标 准 差 标准差是方差的算术平方根。标准 差能反映一个数据集的离散程度。平均数相同的， 标准差未必相同。
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一 基本术语
8、方差 样本中各数据与样本平均数的差的平方 和的平均数叫做样本方差。方差越大，样本数据 的波动就越大。
9、变异系数 标准差与平均数的比值称变异系数 CV,又称离散系数。变异系数可以反映单位均值 上的离散程度。
而导致测值很低，这时要注意看线并且把吸光度界 限设定在0.5 。当有吸光度界限超出报警进行稀释再 测定。一般进行10倍稀释再做，如有超出继续稀释。
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一 基本术语
6、线性范围 指该试剂盒按其说明书使用时可准 确测量的范围，线性是试剂的主要性能指标之一， 如果试剂线性达不到要求，将直接影响高浓度样 本的检测。线性的测量与仪器相关。
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第二部分 测试和校准方法
• 1、终点法 经过一定反应时间后，当反应达 到平衡（终点）时在指定的1个测光点测定吸 光度做到的一点分析法。
• 反应曲线如图2-2所示：图2-2 1点终点法反应 曲线
• 分析项目：如总蛋白（TP）、白蛋白（ALB） 等。
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一、测试方法
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一 基本术语
3、试剂空白 在特定波长下光通过以蒸馏水或生 理盐水和相应测定项目的试剂所构成的反应体系所 测得的吸光度值。
4、样品空白 主要为了消除样品本身混浊或色度 的干扰。常采用空白通道法，测定校正结果=显色 反应通道结果—空白通道结果。多数仪器须另外占 用测定通道，分析速度减半。
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一、测试方法
速率法A 根据两测光点之间每分钟吸光度的变化率计 算浓度或活性值的测定方法，称为速率A法，反应曲线如图 2-5示：
吸
反应界限水平
光
度
R2
S+ R1
Al （t）
SB B1 B2 B3
时间（s）
分析项目：丙氨酸氨基转移酶（ALT）
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二、常见校准方法
（1） 1点线性法（K因数法） 通过测定校准液1（试剂空白）的吸光度和输入的K因数而得 出的工作曲线图2-6 1点线性校准曲线（K因数法）