内毒素及β-葡聚糖检测讲解

1-3-β -D-葡聚糖本质及特点
1
真菌细胞壁成分，占50%以上
2
其他微生物、动物及人的细胞不含该成分
3
用于侵袭性真菌感染的早期诊断
(1-3)-β -D-葡聚糖特性
1.对热极为稳定，高压21℃并不能使其灭活。在 念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多，对G试验灵 敏。
2.当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细 胞的吞噬、消化等处理后，(1-3)-β -D-葡聚糖 可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液 中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体 免疫系统可将其清除。
检测样本：血液 采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无
热原真空采血管（肝素类抗凝）。常规病人早 上用药治疗前空腹采血/取样（血透患者透析前 采血）。 样本保存：样本采集后应在3000转/分进行离心， 若不能及时检测，应将血浆转移至无热原试管 内，在-30℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。 特殊标本处理 ：对一般黄疸、溶血、乳糜血标本， 稀释2-5倍后进行检测 ；对于严重的黄疸、溶 血、乳糜血标本，应重新采血。
MB-80微生物快速动态检测系统
内毒素检测的参考值
检测值﹤10pg/ml,阴性。 检测值介于10～20pg/ml之间，临床观察期，建
议动态采血检测。 检测值﹥20pg/ml，阳性，建议临床结合症状进
行治疗。
检测方法的局限性
只能检测革兰阴性菌脂多糖含量，不能区分细 菌种属。
检测样本的采集与保存
3.在浅部真菌感染中，(1-3)-β -D-葡聚糖未被释 放出来，故其在体液中的量不增高。
侵袭性真菌感染的定义
侵 袭 性 真 菌 感 染 ( invasive fungal infection, IFI)定义:
指致病性真菌侵犯皮下组织、黏膜、肌肉 和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病，危害 性较大。
内毒素检测的临床应用
1
在肝胆疾病中的应用
2
在呼吸系统感染中的应用
3
在胰腺疾病中的应用
4
在溃疡性结肠炎中6
在不明原因发热中的应用
内毒素检测在医院中的应用
1
在医院灭菌制剂检验中应用
2
对注射器、输液器等医疗器械的内毒素检测
3
在透析站和血站中的应用
4
在临床医学研究中的应用
1
增加机体非特异性免疫力
2
防御放射性损伤，促进粒细胞生成
3
增加网状内皮系统功能
4
抗肿瘤，免疫佐剂作用
内毒素血症产生原因
内毒素血症
内源性
外源性
1
肠道内毒素的吸收
2
败血症时血中细菌的释放
3
有效的抗菌治疗后，细菌崩解
输入了含有 细菌的药物、 血液或者体 液等。
各类疾病内毒素血症的发生率
肺炎100%、尿路感染70-80%、腹腔感染72-84%、 烧伤85%、急性胰腺炎90%、败血症70%、急性肝 炎37-64%、暴发性肝炎58-100%、丙肝60%、胆 石症伴急性梗阻性化脓性感染85%、多器官功能 衰竭100%。
菌体多糖（O抗 原），与细菌侵 袭力有关。
中层
同一种属之间是 相同的。
内层
特殊的糖磷脂， 起毒性作用，而 无种属特异性。
特异性多糖
核心多糖
类脂A
内毒素概述
内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁结构 中的脂多糖（LPS），这些成分只在细菌 死亡裂解后才释放到菌体外或活菌以发泡 形式将其释出。
内毒素的有益作用
侵袭性肺部真菌感染
侵袭性真菌感染的发病率逐年上升,其中又以侵 袭性肺部真菌感染最常见,大约占50%～60%。未 经及时治疗的肺部真菌感染患者的病死率可高 达30% ～80% 。
侵袭性肺部真菌感染
临床表现：缺乏特异性,多表现为发热、咳嗽、 咳痰、咳血、胸闷、呼吸困难等。 现状：两高两低一快 高院内感染率和病死率，低临床和实验 室诊断率，患者病情恶化快。 （检测方法相对滞后,早期诊断和治疗仍存在困难,副作
干扰因素
1.应用某些抗生素如β -酰胺内酯类、喹诺酮类 等患者；
2.一些蛋白：阳离子蛋白如溶菌酶、核糖核酸酶 A及人免疫球蛋白G均能与内毒素形成细菌内毒 素--蛋白复合体，对细菌内毒素有显著的屏蔽 作用，而影响测定内毒素结果；
3.操作环境及操作过程中的污染，可能造成假阳 性。
(1-3)--D-葡聚糖
3.比色法：利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生 的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多 少而测定内毒素含量
4.流式细胞术：测内毒素的量而不是活性 5.化学发光测定法
内毒素的检测原理
革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒（光度法） 检测原理：革兰阴性菌脂多糖能激活酶反应主
剂中的C因子、B因子、凝固酶原等，引起凝固 蛋白原转变成凝固蛋白从而引起吸光度变化， 根据检测其溶液吸光度变化对革兰阴性菌脂多 糖浓度进行测定。
内毒素和1，3-β-D-葡 聚糖检测的临床应用
主要内容
来源及结构 生物学活性 检测的临床应用 检测方法及参考范围 标本采集及影响因素
内毒素
内毒素的生物学活性
1
发热反应
2
激活血管活性物质的释放
3
激活凝血和纤溶系统
4
激活补体
5
直接或间接损害肝脏
6
激活白三烯、前列腺素及单核巨噬系统
内毒素的结构
外层
内毒素血症的临床症状
内毒素血症临床症状主要决定于宿主对内毒素的抵 抗力。
症状和体征有：发热，白细胞数变化，出血倾向， 心力衰竭、肾功能减退、肝脏损伤、神经系统症状， 以及休克、血压下降、组织灌流不足、缺氧及酸中 毒等。 ▲最严重的后果：致死性感染性休克，多器官功能 衰竭，DIC等。病死率极高。
用小的新型抗真菌药物价格昂贵,导致病死率高。）
侵袭性真菌感染的诱因
内源性诱因： 影响机体抵抗力的各种疾病，如白血病、癌症、 结核、肺脓肿、糖尿病、肝脏疾病以及维生素 缺乏等。
外源性诱因： ▲广谱抗生素，抗肿瘤药物和免疫抑制剂； ▲插管等侵袭性治疗，骨髓和实体器官移植； ▲免疫缺陷综合症。
侵袭性真菌感染诊断困难的原因
内毒素的检测方法
鲎试验是1968年由Levin和Bang建立。其原 理是利用鲎的变形细胞与微量内毒素产生凝集 反应的现象，作为判断试剂中细菌内毒素含量 的一种方法。
内毒素的检测方法
1.凝胶法：鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理 来定性检测或半定量内毒素的方法
2.浊度法：利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中 的浊度变化而测定内毒素含量