吲哚乙酸氧化酶活性的测定PPT课件
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②处理：在试管中加入：MnCl2 1ml +2，4-二 氯酚1ml + IAA 2 ml+酶液1 ml+磷酸缓冲液5ml
对照：在试管中加入：MnCl2 1 ml +2,4-二氯 酚1ml + IAA 2 ml+ 磷酸缓冲液6ml
保温：30℃温箱中30min；
显色：三支试管中分别加入处理液、对照液、 蒸馏水各2ml后，再分别加入试剂A8ml，摇匀， 40℃黑暗处30min(15-20min)；
IAA +FeCl3 → 红色螯合物
.
3
实验材料 绿豆芽的下胚轴 。
取 材 部
下 胚
位
轴
上胚轴:子叶到第1片真叶之间的部分 下胚轴:子叶与根之间的一部分
方法步骤
IAA氧化酶需要两个辅助因子： 一元酚和二价离子 Mn
标准曲线的绘制。
IAA含量的测定
①称取1g下胚轴，置于研钵中，加入预冷的磷 酸 缓 冲 液 (pH=6.1)1ml ， 研 磨 成 匀 浆 ， 再 用 9ml 分 2 次 冲 洗 ， 总 体 积 为 10ml 。 离 心 4000rpm 10min，所得的上清夜即为粗酶液。
❖ 现有黄豆芽、绿豆芽两种材料，测定黄豆芽的吸 光度值为A1，绿豆芽的吸光度值为A2，且A1>A2， 试比较这两种材料下胚轴中哪个IAA氧化酶活力 大，为什么？
实验
（设计性实验）
.
8
结果总结
不同培养基对怀地黄愈伤组织生长情况的影响
培养基
接种数 (瓶*片）
MS+2,4-D1.0 13*3
最早出愈 时间 （d）
18
MS+2,4-D1.0 12*3
17
+6-BA0.4
MS+2,4-D1.0 12*3
16
+6-BA1.0
出愈率 （%）
97.43
100
100
污染率 （%）
愈伤生长 情况
7.69 0 0
切口处较多出 愈，黄色颗粒 状，偶见灰白 色愈伤
切口及与培养 基接触处生长 愈伤，黄色透 明，较湿润
切ห้องสมุดไป่ตู้及与培养 基接触处生长 愈伤，黄白色， 湿润
用分光光度计在530nm波长处测A值；
查标准曲线；
计算 对照—处理(μg/ml)
IAA氧化酶活力 = 时间(h)
(μg·IAA/h·ml)
.
× 10
6
❖ 简述IAA 氧化酶活力测定的原理。
❖ 制备酶液时，为何加入pH 6.1 的磷酸缓冲液。
❖ 酶促反应时，为何要加入MnCl2和2，4-二氯酚。 ❖ 比色时，为何要选在530nm波长处？
结果总结
I型愈伤组织
Ⅱ型愈伤组织
Ⅲ型愈伤组织
不同培养基对怀地黄试管苗生长情况的影响
培养基 （mg/L)
MS+NAA 0.02
接种数 （瓶*株）
13*3
出芽时间 (d)
20
平均叶 片数 （个/ 株）
2
增值系数
2
MS+NAA 0.02
12*3
15
4
4
+6-BA0.2
MS+NAA0.02
14*3
10
5
5
+6-BA0.5
P144
.
1
实验目的
熟悉运用比色法测定吲哚乙酸 氧化酶活力的方法，并掌握测定酶 活力的基本要求。
.
2
实验原理
吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧 化破坏失去活力。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力 的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平起着重要的 作用，从而影响植物的生长。
酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表 示。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。
对照：在试管中加入：MnCl2 1 ml +2,4-二氯 酚1ml + IAA 2 ml+ 磷酸缓冲液6ml
保温：30℃温箱中30min；
显色：三支试管中分别加入处理液、对照液、 蒸馏水各2ml后，再分别加入试剂A8ml，摇匀， 40℃黑暗处30min(15-20min)；
IAA +FeCl3 → 红色螯合物
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3
实验材料 绿豆芽的下胚轴 。
取 材 部
下 胚
位
轴
上胚轴:子叶到第1片真叶之间的部分 下胚轴:子叶与根之间的一部分
方法步骤
IAA氧化酶需要两个辅助因子： 一元酚和二价离子 Mn
标准曲线的绘制。
IAA含量的测定
①称取1g下胚轴，置于研钵中，加入预冷的磷 酸 缓 冲 液 (pH=6.1)1ml ， 研 磨 成 匀 浆 ， 再 用 9ml 分 2 次 冲 洗 ， 总 体 积 为 10ml 。 离 心 4000rpm 10min，所得的上清夜即为粗酶液。
❖ 现有黄豆芽、绿豆芽两种材料，测定黄豆芽的吸 光度值为A1，绿豆芽的吸光度值为A2，且A1>A2， 试比较这两种材料下胚轴中哪个IAA氧化酶活力 大，为什么？
实验
（设计性实验）
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8
结果总结
不同培养基对怀地黄愈伤组织生长情况的影响
培养基
接种数 (瓶*片）
MS+2,4-D1.0 13*3
最早出愈 时间 （d）
18
MS+2,4-D1.0 12*3
17
+6-BA0.4
MS+2,4-D1.0 12*3
16
+6-BA1.0
出愈率 （%）
97.43
100
100
污染率 （%）
愈伤生长 情况
7.69 0 0
切口处较多出 愈，黄色颗粒 状，偶见灰白 色愈伤
切口及与培养 基接触处生长 愈伤，黄色透 明，较湿润
切ห้องสมุดไป่ตู้及与培养 基接触处生长 愈伤，黄白色， 湿润
用分光光度计在530nm波长处测A值；
查标准曲线；
计算 对照—处理(μg/ml)
IAA氧化酶活力 = 时间(h)
(μg·IAA/h·ml)
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× 10
6
❖ 简述IAA 氧化酶活力测定的原理。
❖ 制备酶液时，为何加入pH 6.1 的磷酸缓冲液。
❖ 酶促反应时，为何要加入MnCl2和2，4-二氯酚。 ❖ 比色时，为何要选在530nm波长处？
结果总结
I型愈伤组织
Ⅱ型愈伤组织
Ⅲ型愈伤组织
不同培养基对怀地黄试管苗生长情况的影响
培养基 （mg/L)
MS+NAA 0.02
接种数 （瓶*株）
13*3
出芽时间 (d)
20
平均叶 片数 （个/ 株）
2
增值系数
2
MS+NAA 0.02
12*3
15
4
4
+6-BA0.2
MS+NAA0.02
14*3
10
5
5
+6-BA0.5
P144
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1
实验目的
熟悉运用比色法测定吲哚乙酸 氧化酶活力的方法，并掌握测定酶 活力的基本要求。
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2
实验原理
吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧 化破坏失去活力。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力 的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平起着重要的 作用，从而影响植物的生长。
酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表 示。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。