亚慢性毒性试验

毒理学作业

农药2,4-滴钠盐原药为白色粉末，水溶性，表1是其对SD大鼠的急性经口试验结果，请根据表中结果，给出该农药的90天亚慢性试验的试验方案，以及如何对保证实验质量予以控制。

表1 2，4-滴钠盐原药对SD大鼠急性毒性实验结果

剂量设置高剂量为25%LD50，中剂量为12.5%, 低剂量为6.3%。

雌性LD50为584mg/kg，高剂量为146mg/kg,中剂量为73mg/kg,低剂量为37mg/kg；雄性为501mg/kg，高剂量为125mg/kg，63mg/kg,低剂量为31mg/kg。

根据GB15670《农药登记毒理学实验方法》的农药急性毒性分级标准，2，4-滴钠盐原药的LD50>500mg/kg，属于低度农药。因此试验时选择SD大鼠的LD50为584mg/kg。

农药2,4-滴钠盐原药SD大鼠亚慢性毒性试验

目的;研究喂饲农药2,4-滴钠盐原药对大鼠的亚慢性毒性。

方法：取初断乳 SD大鼠80只，雌雄各半按照体重随机分为4组。将2,4-滴钠盐原药按146、73、37mg/kg mg/kg剂量分别拌入饲料内经口喂饲染毒90d。

观察：大鼠外观体征、体质量、进食情况等。在实验中期和末期采血检测检测血液学。试验末期检测血生化指标以及尿常规检查。实验结束时处死实验动物，计算脏器指数，并对主要脏器进行病理组织学观察。

1 材料和方法

1.1 受试物

农药2,4-滴钠盐原药，白色粉末，水溶性，由某地某农药公司提供。SPF级初断乳大鼠80只，雌雄各半，体质量50~100 g，由XXX实验动物研究所繁育场提供，动物合格证号为医动字第XX-XXXX号。

1.2 饲养与管理

SPF 环境条件下，同组同性别两只一笼喂养，自由进食和饮水。环境温度 21～25℃，相对湿度 40%～60%。严格控制昼夜交替。

1.3实验方法

试验前将雌、雄大鼠各半按体重随机分为3个剂量组和1个对照组，每组20只，将2,4-滴钠盐原药按146、73、37mg/kg mg/kg剂量分别均匀混入饲料中制成颗粒饲料辐照灭菌后分别供高、中、低剂量组动物食用，连续每日一次喂养90d；对照组给予不加受试物的正常饲料。

1.4 观察指标

1.4.1一般情况

试验期间观察动物的一般情况包括外观体征和行为活动、粪便性状、食物摄入量及体重变化等。

1.4.2血常规

在实验中期和末期按常规方法测定血液学指标

1.4.3血液生化指标

试验末期检测血液生化指标

1.4.5尿常规检查

尿常规测定颜色、 pH值、比重(SG)、尿糖(GLU)、尿蛋白，将尿液离心，并对尿中沉淀物进行镜检。

1.4.6脏器病理

解剖动物，取心、肝、脾、肺、肾、胃肠、肾上腺、胸腺、脑和卵巢、睾丸等脏器，观察大体变化并称重（胃肠除外），计算脏器指数[脏器质量/体重）×100%]。

将解剖取得的脏器福尔马林固定，常规制片，HE 染色，光学显微镜进行病理组织学检查。

1.5 统计学分析

亚慢性毒性试验结果经正态性检验后，符合正态的指标采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析，否则经变换后分析。

２结果

2.1 一般状况

2.2 体重变化见表2

2.3 血常规检验结果见表3

2.4 血生化检测结果见表4

2.5 尿常规检查

2.5 脏器指数见表5

2.6 病理组织学检查

表2 2，4滴原药大鼠90 d亚慢性毒性试验体质量变化情况

性别剂量

（mg/kg)

染毒周数

0 2 5 8 10 13

雌0

37

73

146

雄0

37

73

146

表3 2，4-滴钠盐原药大鼠90 d亚慢性毒性试验血液常规检验

性别剂量

（mg/kg) RBC/(×1012·

L-1)

Hb/(g·L-1)WBC/(×109·L-1)GRA/%LYM/%

雌性试验前0 37 73 146

雄性试验前0 37 73 146

雌性试验后0 37 73 146

雄性试验后0 37 73 146

表4 2，4-滴钠盐原药大鼠90 d亚慢性毒性试验血生化检测结果

性别剂量

（mg/k

g) AST/(U·L-1)ALT/(U·L-1)ALP/(U·L-1)BUN/(mmol ·L-1

)

TP/(g ·L-1)ALB/(g ·L-1)

雌0

37

73

146

雄0

37

73

146

表5 脏器指数%

性别剂量

（mg

/kg)

大脑肝脏脾脏心脏肺脏胸腺肾脏肾上腺睾丸（卵巢）

雌0

37

73

146

雄0

37

73

146

3.讨论

控制实验质量

1 大鼠毒理学实验中实验技术因素的质量控制

1. 1 动物临床观察指标的质量控制

在药品临床前大鼠毒理学实验研究过程中 , 其临床观察指标主要包括行为活动、体质

量、增质量、饲料生物利用度等，而体质量、增质量、饲料生物利用度指标均为需要

统计分析的客观指标。因其贯穿于整个实验周期 ,数据的客观性与实验环境、给药过程中

动物感受是否舒适、动物密度、动物健康状况等因素相关。在动物临床指标统计分析前

控制体系中 , 实验环境应选择 S P F级动物实验室 ;每笼 2只 ;体质量在实验前应适应环

境周期≥1周 ; 计算饲料摄入量每日应称质量 , 每周给药完毕即计算大鼠的饲料生物利

用度 ,比较分析各组动物饲料生物利用度的统计学意义 ; 分析产生差异的原因 ,讨论差异

是否与动物自发性疾病 ( 如大鼠自发性糖尿病会引起大鼠饲料生物利用度明显增大 ) 有